걸음걸이 분석을 사용하는 우리의 프로토콜은 운동 장애의 마우스 모터가 걸음걸이 장애를 가진 환자의 증상을 모방하는지 여부를 결정하는 데 매우 유용합니다. 따라서, 응력 적재 시험에서 걸음걸이 분석은 자발적인 효과없이 마우스에서 특정 모터 표현형을 검출하기 위해, 고가의 장비없이 쉽게 수행 할 수 있습니다. 행동 테스트를 시작하기 전에 각 마우스의 무게를 기록하고 마킹 펜을 사용하여 각 꼬리에 레이블을 지정합니다.
모든 동물의 무게를 측정하고 표시하면, 적어도 30 분 동안 실험실에 마우스를 배치하고, 명확한 설정, 25 에 의해 25 40 센티미터 매달려 상자, 회전 가능한 메쉬 뚜껑, 실험실 벤치에. 마우스가 적응하면 마우스 한 개를 메쉬 뚜껑 중앙에 넣고 뚜껑을 거꾸로 뒤집습니다. 그런 다음 마우스를 홈 케이지로 되돌리기 전에 메시 뚜껑에서 마우스의 가을 대기 시간을 측정합니다.
모든 마우스를 테스트하면 9.9 42센티미터의 백서를 실험실 벤치에 놓고 종이의 말단 끝에 어두운 골 상자를 놓습니다. 다른 상자를 종이와 거의 같은 길이로 놓고 활주로 양쪽에 놓아 탈출을 방지합니다. 블랙과 레드 잉크를 추가하여 35밀리리터 페트리 요리를 분리합니다.
분석을 위해 마우스를 훈련시키기 위해, 마우스를 용지의 근위 끝에 놓고 골 상자를 마주보고, 마우스가 종이의 근접 끝에서 골 상자로 걸어가도록 한다. 마우스가 상자에 도달하면 동물을 부드럽게 뒤턱으로 감싸고 엄지손가락과 다른 손가락 사이에 꼬리를 감싸 뒷다리의 움직임을 제한합니다. 그리고 앞다리의 바닥을 붉은 잉크에 담그고 뒷다리의 바닥을 검은 잉크로 담가 두는 다.
그런 다음 마우스를 즉시 용지의 근위 쪽 끝에 다시 배치하여 골 상자를 향하고 마우스가 근접 끝에서 골 상자로 걸어 가도록 합니다. 발 인쇄 용지를 공기 건조 한 후, 발 인쇄의 동일한 부분 사이의 거리를 측정하여, 보폭 길이의 세 측정을 얻기 위해 눈자를 사용합니다. 전면 베이스 폭의, 연속, 동일측, 전면 발자국 사이의 선을 그리는 것, 그리고 앞발자국 패드에서 수직 선의 길이를 측정하여 발자국 사이에 그려진 선까지.
그리고 뒷드 베이스 폭의, 연속 오른쪽 뒷드 풋프린트 사이의 선을 그리는, 왼쪽 뒷줄 풋프린트의 패드에서 수직 선의 길이를 측정하여, 다른 오른쪽 발자국 사이에 그려진 선에. 겹치면 앞면의 패드와 힌드 풋프린트 사이의 거리를 측정합니다. 구속 튜브를 준비하려면 사각형 드릴을 사용하여 50 밀리리터 튜브에 16 개의 2 밀리미터 구멍을 만들고 각 스케일 마크의 뒷면을 만듭니다.
튜브의 끝을 잘라 5 밀리미터 구멍을 만들고 호흡을 위해, 그리고 꼬리에 대한 튜브 캡에 4 밀리미터 구멍을 합니다. 스트레스 로딩 테스트를 위해 마우스를 스크러프하고 동물을 제지 튜브 헤드에 먼저 넣고 앞다리는 부드럽게 제한됩니다. 튜브를 덮기 전에 모자의 구멍을 통해 꼬리를 전달합니다.
그리고 실온에서 2 시간 동안 벤치 상단에 마우스를 놓습니다. 응력 적재 기간이 끝나면 튜브에서 마우스를 제거하고 동물을 홈 케이지로 되돌려 놓습니다. 이러한 대표적인 인물에서 관찰된 바와 같이, 이종수구스 급속발병 근긴장증 모델 마우스는 4주에 야생형 쓰레기 메이트를 하는 것보다 훨씬 짧은 앞다리 보폭 을 입증한다.
스트레스 이종수습 급속성 난독증 모델 마우스는 8주에 스트레스를 받은 야생형 쓰레기 메이트보다 두 사지의 보폭이 현저히 짧아지는 것을 나타낸다. 두 사지의 보폭 길이의 비대칭은 마우스의 어떤 그룹에서, 어떤 나이에 크게 다르지 않다. 두 사지의 전면 베이스와 겹치는 모든 연령대에서 유사합니다.
힌드 베이스는 이러한 스트레스이 많은 이종수구스 급속 발병 난독증 모델 마우스에서 상당히 넓으며, 10주에 응력 야생형 동물에서 관찰된 것보다 스트레스가 이종구균 급속 발병 난독증 모델 마우스에서 모터 적자를 일으킨다는 것을 나타낸다. 야생형과 돌연변이 사이의 매달려 있는 시간에 는 4~10주 된 동물에서 관찰되지 않습니다. 그러나 12주 시점에서, 스트레스 야생형 마우스의 매달려 시간은 다른 동물보다 훨씬 길며, 이종수 급속난증 파킨슨증 모델 마우스의 모터 적자가 구동물의 억제 시험에 의해 야생형 마우스와 구별될 수 있음을 시사한다.
마우스가 보행 테스트 전에 잉크 건조를 피하기 위해 잉크에 사지의 바닥을 매달린 직후 종이에 마우스를 놓습니다. 오픈 필드, 높은 플러스 미로 및 전체 수영 테스트와 같은 정서적 특성에 대한 추가 테스트는 걸음걸이 이상이 모터 적자에서만 발생하는지 여부를 대답하기 위해 수행 될 수 있습니다. 당사의 프로토콜은 응력 하중의 수와 기간을 변경하고 다양한 로딩 조건 간의 모터 표현형을 비교하여 스트레스에 대한 감수성을 탐구하는 데 사용할 수 있습니다.
당사의 프로토콜은 응력 하중의 수와 기간을 변경하고 다양한 로딩 조건 간의 모터 표현형을 비교하여 스트레스에 대한 감수성을 탐구하는 데 사용할 수 있습니다.
