Este estudio describe un método personalizable para crear un modelo de función miocárdica en Miro mediante la ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante micromanipulación. Este protocolo reduce la duración del procedimiento, garantiza un tamaño de infarto controlable y mejora la supervivencia de los ratones. Use un OT rectangular con una almohadilla térmica precalentada a 37 grados centígrados durante todo el procedimiento quirúrgico.
Antes del procedimiento, desinfecte la tabla con luz ultravioleta y alcohol al 70%. Comience colocando el ratón en el OT en posición supina con una gasa debajo de la cabeza para evitar el sobrecalentamiento de los ojos. Aplique ungüento oftálmico en los ojos para evitar que se sequen.
Use una crema para quitar el pelo en el tórax y masajee uniformemente con un hisopo de algodón estéril durante un minuto. Limpia el exceso de pelo con una gasa. Use povidona yodada seguida de alcohol al 70% para limpiar el área y cubra el tórax con una gasa.
Utilice una sutura 4-O debajo de los incisivos superiores y asegúrela al punto de anclaje para mantener la boca ligeramente abierta y facilitar la canulación. Tira de la cola para mantener el cuerpo recto y asegúralo al OT con cinta adhesiva. Asegure las cuatro extremidades con cinta adhesiva y apriételas en los puntos de anclaje.
No estire demasiado las extremidades delanteras para evitar el compromiso respiratorio. Use fórceps para abrir la mandíbula y levantar la lengua. A continuación, utiliza un iluminador para visualizar la garganta y la glotis.
Inserte suavemente una cánula de calibre 22 con una aguja truncada roma a través de la boca hasta la tráquea, aproximadamente un centímetro por debajo de la garganta. Use una mano para sostener la lengua y muévala ligeramente hacia arriba con pinzas romas. Al mismo tiempo, use la otra mano para insertar suavemente el tubo en la tráquea.
Tenga cuidado de no insertar el tubo en el esófago. Retire la aguja con cuidado. Antes de conectarlo al ventilador, verifique la intubación colocando el tubo en el agua para que se formen burbujas.
Conecte el tubo endotraqueal a un ventilador ajustado a 120 por minuto y el volumen corriente ajustado a 250 microlitros. Verifique la intubación comprobando la expansión torácica simétrica bilateral. A continuación, fije la conexión al OT con cinta adhesiva para evitar que se caiga.
Coloque electrodos de ECG en las patas y conéctelos a la grabadora de ECG. Monitoree la electrofisiología cardíaca durante todo el procedimiento. Retire la gasa del tórax.
Desinfecte el área de la incisión usando tres ciclos de fregado con alcohol al 70%. Para reducir la contaminación del sitio quirúrgico, cubra el ratón con un paño quirúrgico estéril con un orificio sobre el campo quirúrgico. Después de realizar una incisión en la piel oblicua con un bisturí, exponer las costillas realizando una disección roma de los tejidos subcutáneos.
Tenga cuidado de no lesionar los vasos, las costillas y los pulmones. Use aplicadores de algodón estériles para detener el sangrado. Identifique el tercer espacio intercostal y haga una incisión de unos seis a ocho milímetros.
A continuación, abra la cavidad torácica realizando una disección roma de los tejidos en el espacio intercostal. Tenga cuidado de no lesionar la arteria torácica interna. Amplíe el espacio intercostal con fórceps.
Inserte retractores caseros preesterilizados en la caja torácica y tire hacia atrás para extender la incisión a aproximadamente seis milímetros de ancho. Fije los retractores al OT con bandas elásticas. Retire con cuidado los tejidos circundantes para exponer el corazón por completo.
Retire el pericardio suavemente con pinzas curvas sin lesionar el corazón. Utilice un microscopio de disección y dirija una luz enfocada y apropiada para la visualización de la LAD. Presione suavemente el sitio debajo de la posición de ligadura elegida para agrandar temporalmente el DA y luego vuelva a verificar el DA.
Bajo un microscopio de disección, use una aguja cónica para pasar un 8-0 ligadura de seda debajo del LAD. Asegúrese de que la aguja no sea lo suficientemente profunda como para entrar en el ventrículo izquierdo y no demasiado superficial para evitar dañar la DA. Ata la ligadura con un nudo doble suelto.
Coloque un tubo de PE-10 de dos a tres milímetros en un bucle paralelo a la arteria. Apriete suavemente el lazo de la abrazadera hasta que quede alrededor de la arteria y el tubo. A continuación, asegure el lazo con un nudo corredizo.
Tenga cuidado de no dañar la pared miocárdica con una presión de tensión excesiva. Una coloración paliálida en la pared anterior del ventrículo izquierdo después de la ligadura confirma el cese del flujo sanguíneo en la DA. Si se requiere ligadura permanente, proceda como se describe en el manuscrito del texto.
Retire los retractores de la incisión. A continuación, cierre la herida temporalmente con una pinza de bulldog. Asegúrese de que el mouse siga conectado al ventilador.
Cuando termine el período de isquemia, retire la pinza bulldog e inserte los retractores para abrir la incisión y exponer el corazón y el sitio de ligadura. Desate el nudo corredizo y retire el tubo de PE-10. El cambio en la coloración pálida a rojo rosado confirma la restauración del flujo sanguíneo.
Al mismo tiempo, para detectar la reperfusión, observe el ECG para detectar una posible disolución de la elevación del ST. Deja el 8-0 ligadura in situ si se realiza una tinción posterior con azul de Evans y TTC. De lo contrario, retire la sutura en este paso.
Retire los retractores y cierre la incisión suturando la tercera y cuarta costilla con una sutura de seda 4-O. Tenga cuidado de no lesionar el pulmón. Presione el pecho suavemente mientras ata los nudos de sutura para expulsar el aire que pueda quedar atrapado en la cavidad torácica.
Cerrar las capas musculares con suturas continuas de seda 4-O. Las imágenes estándar del proceso experimental se adquirieron desde la intubación endotraqueal, la incisión cutánea, la toracotomía, la identificación de la DA y la ligadura, hasta la reperfusión. Las imágenes representativas del ECG verificaron isquemia miocárdica y reperfusión con elevación significativa del ST después de la ligadura.
Y la disolución de la elevación ST después de que se desató el nudo corredizo. Antes de la toracotomía, es muy importante mantener la vía aérea abierta, y lo más importante es asegurarse de que el DAA esté firmemente ligado y evitar daños. A este procedimiento le seguirá una ecocardiografía para evaluar la función cardíaca, así como un TTC para evaluar la lesión miocárdica.
