Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

우리는 안구건조증의 신뢰할 수 있는 모델을 확립하기 위해 최선을 다하고 있습니다. 우리는 눈에서 ELG와 ILG를 제거함으로써 수성 결핍성 안구 건조증의 병리학적 상태를 성공적으로 재현했습니다. ILG의 해부학적 위치가 깊기 때문에 ELG와 ILG를 함께 절제하는 것은 더 까다롭고 침습적입니다.

또한 작업 중 출혈을 유발할 수 있어 운영 능력에 대한 요구가 높습니다. 우리 모델은 동물에 대한 피해를 최소화하고 수술 절차를 크게 단순화하면서 상당한 수액 결핍 안구 건조증을 성공적으로 유도했습니다. 구성된 마우스 모델은 쇼그렌 증후군 및 스티븐스-존슨 증후군과 같은 중증 안구 건조 증후군과 매우 유사하여 관련 연구에 강력한 지원을 제공합니다.

이 방법은 체계적인 주입 효과를 피하고, 국소 주입 효과의 낮은 내구성을 해결하고, 안구 건조증 모델의 단점을 극복하고, 전용 동물 환경의 필요성을 제거하여 실험 과정을 단순화합니다. 먼저 마취된 마우스를 외측 욕창 위치에 놓고 수술 부위를 수술 현미경으로 노출시킵니다. 이빨이 있는 집게를 사용하여 마우스 얼굴 오른쪽의 피부를 고정합니다.

눈의 중간 지점을 절개하여 외측 오라클과 하악 라인을 교차시켜 눈의 안쪽 모서리까지 만듭니다. 그런 다음 근육 조직을 노출시키고 근육에 있는 ELG를 조심스럽게 제거합니다. 이제 피부 절개 부위를 눈 안쪽 모서리까지 연장합니다.

근육을 뭉툭하게 분리하고 근육 아래의 밝은 빨간색 샘을 찾습니다. 그런 다음 ILG를 떼어내고 제거합니다. 바늘 홀더, 안과 수술용 가위, 겸자로 5-0 봉합사를 사용하여 절개 부위를 봉합합니다.

감염을 예방하기 위해 수술 마지막에 플록사신 연고를 바르십시오. 일방적인 ELG와 ILG를 제거한 후, 리드미컬한 12시간 명암 주기가 있고 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있는 환경에 쥐를 배치합니다. 눈물 측정을 위해 잘 포장된 페놀 레드 실을 사용하십시오.

수성 결핍성 안구 건조 마우스를 마취한 후 측정할 눈의 아래 눈꺼풀을 부드럽게 아래로 당깁니다. 페놀 레드 실의 윗부분을 아래 눈꺼풀의 안쪽과 바깥쪽 3분의 1에 놓고 즉시 타이머를 시작합니다. 할당된 시간이 지나면 아래 눈꺼풀을 조심스럽게 접고 페놀 붉은 실을 조심스럽게 아래로 제거합니다.

페놀 레드 실의 바깥쪽 백에 제공된 스케일을 사용하여 실 상단에서 빨간색 부분 전체까지 측정합니다. 전자 스톱워치를 사용하여 테스트 기간을 정확하게 기록합니다. 염색을 위해 조직 조각을 준비하려면 안락사된 쥐에서 추출한 안구를 채취합니다.

그런 다음 최적의 절단 온도 화합물에 안구를 삽입하고 냉동 마이크로톰을 사용하여 5-7마이크로미터 두께의 동결 조직 절편을 얻습니다. 각막 mRNA를 추출하려면 가위와 집게를 사용하여 현미경으로 후극에서 안구를 자릅니다. 수정체를 분리하고 과도한 공막과 홍채는 청소하되 0.5mm의 흰색 공막과 각막 전체는 남겨둡니다.

눈물샘 절제술 후 2주가 지난 후, 안구건조증 마우스의 눈물 분비가 정상 그룹에 비해 현저히 감소했습니다. 편평 화생(squamous metaplasia)과 염증성 세포(inflammatory cell)의 축적은 안구건조증(dry eye) 그룹의 각막 상피(corneal epithelium)와 기질층(stromal layer)에서 관찰되었다. 케라틴 12의 발현은 안구건조증 그룹의 각막 상피 세포에서 정상 그룹에 비해 현저히 낮았습니다.

Pax6 발현은 정상 그룹에 비해 안구건조증 그룹의 각막 상피 세포에서 유의하게 감소했습니다. 비정상적으로 분화된 각막 상피 세포의 표지자인 Sprr1b의 발현은 정상 그룹보다 안구건조증 그룹에서 유의하게 높았습니다.