최적의 효과 평가를 위해 식물 화학 용액을 제조하기위한 약물 스크리닝 접근법을위한 식물 화학 성분에 대한 연구가 증가함에 따라이 프로토콜의 장점은 간단한 조작과 저렴한 비용이었습니다. 이 프로토콜은 약리학의 약물 스크리닝을 다루는 연구자에게 도움이 될 것입니다. 소비 비용을 고려하여 예비 실험을 위해 소량의 식물 화학 화합물로 시작하는 것이 좋습니다.
둘째, 일반 주사기 위에 인슐린 주사기를 사용하는 것이 좋습니다 에탄올에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하려면 3.52 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 2 밀리리터 튜브에 첨가하십시오. 튜브를 빠르게 돌려 튜브 바닥에 분말을 정착시킵니다. 다음으로 8.8 마이크로 리터의 100 % 에탄올을 튜브에 첨가하여 0.5 % 용액을 준비합니다.
그런 다음 79.2 마이크로 리터의 100 % 에탄올을 튜브에 첨가하여 5 % 용액을 준비합니다. 다음으로, 1.672 % 용액이 들어있는 튜브에 0.9 % 생리 식염수 5 밀리리터를 첨가하십시오. 이것은 에멀젼을 생성합니다.
그런 다음 원심 분리기는 나린 제닌이 용액에 완전히 용해되었는지 확인하기 위해 튜브를 거부했습니다. 용해되지 않은 나린 제닌의 백색 침전물이 용액에 나타날 수 있습니다. 다음으로, DMSO에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하기 위해, 3.95 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 2 밀리리터 튜브에 첨가한다.
빠른 회전 후 9.8ml의 DMSO를 튜브에 추가하여 8.5 % 용액을 준비합니다. 그런 다음 88.2 마이크로 리터의 DMSO를 튜브에 첨가하여 5 % 용액을 준비합니다. 다음으로 1.877 밀리리터의 0.9 % 식염수를 용액에 첨가하십시오.
이로 인해 에멀젼이 생성됩니다. 용액을 원심분리하여 나린제닌이 완전히 용해되었는지 확인합니다. 용해되지 않은 백색 침전물이 용액에 나린제닌이 나타날 수 있습니다.
다음으로, Tween 80 및 DMSO에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하고, 6.69 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 5 밀리리터 튜브에 첨가한다. 튜브를 빠르게 스핀다운하고 117.7마이크로리터의 DMSO를 추가하여 3.5% 용액을 준비합니다. 그런 다음 117.7 마이크로 리터의 트윈 80을 용액에 첨가하여 3.5 % 트윈 80 및 3.5 % DMSO 농도를 얻습니다.
이 용액을 3109.6 마이크로 리터의 0.9 % 식염수가 들어있는 다른 5 밀리리터 튜브에 천천히 첨가하고 잘 흔들어 투명한 나린 제닌 용액을 얻습니다. 2 시간 후, 용액은 눈에 보이는 침전물없이 깨끗하게 유지됩니다. 나린제닌 용액을 투여하려면 5주 된 C57 검은 수컷 6마리 쥐의 꼬리 밑부분을 들어 올려 꼬리를 부드럽게 뒤로 젖히는 단단한 표면에 놓습니다.
그런 다음 왼쪽 엄지 손가락과 검지로 귀 뒤의 목 자국을 잡고 꼬리를 새끼 손가락과 약지 사이에 놓습니다. 뒤쪽 끝이 약간 올라간 상태에서 마우스를 앙와위 자세로 유지하십시오. 나린제닌 용액을 주입하려면 복부 피부가 팽팽해지도록 마우스 등의 피부를 잡습니다.
그런 다음 바늘을 복부의 오른쪽 아래 또는 왼쪽 사분면에 10도 각도로 밀어 넣습니다. 방광, 간 또는 기타 내부 장기에 부딪히지 않도록하십시오. 바늘을 두개골 방향으로 3-5 밀리미터 동안 피하 실행 한 다음 복강 내로 45도 각도로 삽입하십시오.
바늘이 복벽을 통과하면 천천히 용액을 밀어냅니다. 주사 후 바늘을 천천히 당겨 누출을 방지하기 위해 약간 회전시킵니다. 혈당 검사를 수행하려면 테스트 스트립을 열고 날짜를 표시하십시오.
25 게이지 바늘 찌름으로 측면 꼬리 정맥에 작은 구멍을 뚫고 피 한 방울을 짜냅니다. 티슈 페이퍼로 혈액 방울을 닦은 후 다른 혈액 방울을 짜내고 테스트 스트립 가장자리에 모으십시오. 혈당 측정기에 표시된 결과를 읽고 기록하십시오.
스트렙토조토신이 유발된 고지방 사료를 급여한 당뇨 마우스의 체중은 스트렙토조토신 처리 후 8주째 대조군 마우스에 비해 감소하였다. 4주차에 나린제닌 처리된 마우스의 체중 감소는 처리되지 않은 마우스에 비해 유의했습니다. 당뇨병 마우스의 혈당 수치는 스트렙토 조토 신 유도 후 1 개월 이내에 극적으로 증가했습니다.
2 개월 후 2 개월 전에 관찰 된 수준으로 자동 감소했습니다. 대조적으로, 나린제닌 치료는 STZ에 비해 혈당 수치를 한 달에 51.8%, 두 달에 34.8% 낮췄습니다. 대조군과 비교하여, 스트렙토 조토신 유도 당뇨병 마우스는 조직 부피 및 섬유주 수에 의한 뼈 부피의 감소로 나타난 바와 같이 골 손실을 나타냈다.
한편, 나린제닌 치료는 뼈 손실을 크게 구했습니다. 섬유주 뼈 면적당 파골세포 수에 의해 나타난 파골세포 활성은 대조군과 질환 모델 사이에 통계적 유의성이 관찰되지 않았지만, 당뇨병 마우스에서 증가하였다. 대조군 및 스트렙토조토신 유도 마우스의 섬유주 뼈 및 파골세포의 TRAP 염색이 여기에 표시됩니다.
나린제닌 치료는 파골세포 활동을 유의하게 감소시켰다. 당뇨병 동물에서 1형 콜라겐의 C-말단 텔로펩타이드는 68.09%, 제1형 프로콜라겐의 N-말단 프로펩타이드는 204.88% 상승하여 골 흡수율이 급격히 증가했습니다. 그러나 나린제닌 치료는 골 흡수율의 두 지표를 모두 유의하게 감소시켰습니다.
따라서 정확한 복용량을 피펫팅하는 것은 어렵습니다. 팁을 절단하면 피펫팅이 더 쉽고 정확해집니다. 또는 필요한 부피를 질량으로 변환 할 수 있으며 나중에 쉽게 변환 할 수 있습니다.
각 방광 포도당 실험 전에 모든 동물의 공복 시간은 전체 실험 동안 그대로 유지되어야 한다.
