Con el aumento de los estudios relacionados con los componentes fitoquímicos para los enfoques de detección de fármacos para preparar la solución fitoquímica para la evaluación de los efectos óptimos, estaba prestando atención a las ventajas de este protocolo como operación simple y bajo costo. Este protocolo beneficiará a los investigadores que se ocupan de la detección de medicamentos de la farmacología. Sugerimos comenzar con una pequeña cantidad de compuesto fitoquímico para experimentos preliminares, considerando el costo de consumo.
En segundo lugar, se recomienda usar una jeringa de insulina sobre una jeringa regular Para preparar una solución de naringenina de dos miligramos por mililitro en etanol, pese 3.52 miligramos de polvo de naringenina y agréguela a un tubo de dos mililitros. Gire rápidamente el tubo para asentar el polvo en la parte inferior del tubo. A continuación, agregue 8.8 microlitros de etanol al 100% al tubo para preparar una solución al 0.5%.
Luego agregue 79.2 microlitros de etanol al 100% al tubo para preparar una solución al 5%. A continuación, agregue 1.672 mililitros de solución salina fisiológica al 0.9% al tubo que contiene la solución al 5%. Esto producirá una emulsión.
Luego, la centrífuga rechazó el tubo para verificar si la naringenina está completamente disuelta en la solución. Pueden aparecer precipitados blancos de naringenina no disuelta en la solución. Luego, para preparar una solución de naringenina de dos miligramos por mililitro en DMSO, pese 3.95 miligramos de polvo de naringenina y agréguela a un tubo de dos mililitros.
Después de un giro rápido, agregue 9.8 mililitros de DMSO al tubo para preparar una solución al 8.5%. Luego agregue 88.2 microlitros de DMSO al tubo para preparar una solución al 5%. A continuación, agregue 1.877 mililitros de solución salina al 0.9% a la solución.
Esto dará como resultado una emulsión. Centrifuga la solución para comprobar si la naringenina está completamente disuelta. Los precipitados blancos tienen naringenina no disuelta pueden aparecer en la solución.
Luego, para preparar una solución de naringenina de dos miligramos por mililitro en Tween 80 y DMSO, pese 6.69 miligramos de polvo de naringenina y agréguela a un tubo de cinco mililitros. Gire rápidamente el tubo y agregue 117.7 microlitros de DMSO para preparar una solución al 3.5%. Luego agregue 117.7 microlitros de Tween 80 a la solución para alcanzar una concentración de 3.5% Tween 80 y 3.5% DMSO.
Agregue lentamente esta solución a otro tubo de cinco mililitros que contenga 3109.6 microlitros de solución salina al 0.9% y agite bien para obtener una solución clara de naringenina. Después de dos horas, la solución permanecerá clara sin precipitados visibles. Para administrar la solución de naringenina, levante un ratón macho C57 negro de cinco semanas de edad por la base de su cola y colóquelo sobre una superficie sólida colocando suavemente su cola hacia atrás.
A continuación, agarre el cuello detrás de las orejas con el pulgar izquierdo y el índice y coloque la cola entre el dedo meñique y el anular. Mantenga el ratón en posición supina con su extremo posterior ligeramente elevado. Para inyectar la solución de naringenina, agarre la piel de la espalda del ratón para que la piel abdominal esté tensa.
Luego empuje la aguja en el cuadrante inferior derecho o izquierdo del abdomen en un ángulo de 10 grados. para evitar golpear la vejiga, el hígado u otros órganos internos. Pase la aguja por vía subcutánea en una dirección craneal de tres a cinco milímetros, luego insértela en un ángulo de 45 grados en la cavidad abdominal.
Una vez que la aguja pase a través de la pared abdominal, empuje lentamente la solución. Después de la inyección, sacó lentamente la aguja, girándola ligeramente para evitar fugas. Para realizar una prueba de glucosa en sangre, abra las tiras reactivas y marque la fecha.
Haga una pequeña punción en la vena lateral de la cola con un pinchazo de aguja de calibre 25 y exprima una gota de sangre. Después de limpiar la gota de sangre con papel de seda, exprima otra gota de sangre y recójala en el borde de la tira reactiva. Lea y registre el resultado que se muestra en el medidor de glucosa.
El peso corporal de la dieta alta en grasas alimentada y los ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina disminuyó en comparación con el de los ratones del grupo de control de cero a ocho semanas después de un tratamiento con estreptozotocina. En la cuarta semana, la pérdida de peso de los ratones tratados con naringenina fue significativa en comparación con los ratones no tratados. El nivel de glucosa en sangre en los ratones diabéticos aumentó dramáticamente dentro de un mes después de la inducción de estreptozotocina.
Después de dos meses, disminuyó automáticamente a un nivel observado hace dos meses. Por el contrario, el tratamiento con naringenina redujo los niveles de glucosa en sangre en un 51,8% al mes y en un 34,8% a los dos meses en comparación con STZ. En comparación con los controles, los ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina exhibieron pérdida ósea como lo indica una disminución en el volumen óseo por volumen de tejido y el número de trabécula.
Mientras tanto, el tratamiento con naringenina rescató significativamente la pérdida ósea. La actividad de los osteoclastos mostrada por el número de osteoclastos por área ósea trabecular aumentó en ratones diabéticos, aunque no se observó significación estadística entre los modelos control y de enfermedad. Aquí se muestra la tinción TRAP de hueso trabecular y osteoclastos de ratones control e inducidos por estreptozotocina.
El tratamiento con naringenina disminuyó significativamente las actividades de los osteoclastos. En los animales diabéticos, el telopéptido C-terminal del colágeno tipo uno se elevó en un 68,09% y el propéptido N-terminal del Pro-colágeno tipo uno se elevó en un 204,88%, lo que indica un aumento dramático en la tasa de resorción ósea. Sin embargo, el tratamiento con naringenina disminuyó significativamente ambos indicadores de la tasa de resorción ósea.
Por lo tanto, es difícil pipetear la dosis precisa. Cortar la punta hace que el pipeteo sea más fácil y preciso. Alternativamente, el volumen requerido se puede convertir en una masa, que puede ser más tarde fácilmente.
El tiempo de ayuno de todos los animales antes de cada experimento de glucosa en la vejiga debe seguir siendo lo mismo durante todo el experimento.
