이 프로토콜은 동적 공유 상호 작용에 의해 올리고메릭 서열의 정보 지향 조립을 가능하게 하며, 핵산의 서열 선택적 혼성화를 진정으로 모방하지만 스트랜드 간 결합 강도가 증가합니다. 동적 공유 어셈블리는 일반적으로 채권 재배열 및 오류 수정에 대한 용량이 제한되어 있기 때문에 간단한 아키텍처로 제한됩니다. 대조적으로, 루이스 산의 농도를 따라 상승하여 결합 해리에 영향을 미치고 그 후 채권 재배치를 촉매함으로써, 이 기술은 자기 조립 시스템의 널리 퍼진 운동 포획 제한을 완화한다.
이 방법은 매우 낮은 결함률을 가진 공유 유기 프레임 워크에서 조직 기판의 지속적인 리모델링을 적응하고 수용 할 수있는 생체 물질 조직 인터페이스에 이르기까지 공유 결합 재배열 반응을 활용하는 다양한 분야에서 사용될 수 있습니다. 이 기술을 처음으로 수행 할 때, 개인은 장기간 어닐링 시간 후에도 기이하게 갇힌 어셈블리를 찾을 수 있습니다. 우리는 독점적으로 알데히드베어링 올리고머와 독점적으로 아민 잔류물 사이의 혼성화를 시도하는 처음 사용자를 조언, 인코딩 된 정보를 단순화하고 따라서 혼성화.
이 절차를 시작하려면 0.125 그램의 FMOC 포토실실 고체 지지 수지의 무게를 측정하고 프릿화 자동 신디사이저 반응 용기에 추가합니다. 신디사이저의 전자 레인지 부분에 용기를 삽입합니다. 주요 용매 병을 DMF로 채우고 보호병을 DMF의 20%4-메틸피프리딘용액으로 채우고 폐기물을 비웁니다.
다음으로, DMF에서 브로모아세산과 DIC의 1개의 어어 솔루션을 순차적으로 1.5밀리리터, 4.53밀리리터의 DMF에 아세트 산수화물0.47 밀리리터를 준비하여 5밀리리터 캡핑 솔루션을 만듭니다. NMP에서 사용할 각 기본 아민의 0.5 어어 용액을 준비합니다. 각 용액의 총 부피는 2.5 밀리리터가 적절한 기본 아민의 각 잔류물과 추가 2.5 밀리리터여야 합니다.
자동화된 신디사이저 매니폴드에 모든 솔루션을 추가합니다. 자동 펩타이드 신디사이저를 사용하여 수지팽창, FMOC 그룹을 갈라내고, 텍스트 프로토콜에 설명된 변위 반응을 수행한다. 그 후, DCE의 5%디클로로디메틸틸릴레인용액으로 3방향 스톱콕을 장착한 프릿드 유리 반응 용기의 벽을 염화한다.
30분 동안 앉아서 그릇을 빼내고 DCE와 메탄올로 씻어내십시오. 용기가 건조한 후 수지로 옮김합니다. 한 쪽 팔을 통해 질소 가스로 거품을 내고 다른 쪽 팔을 통해 진공을 당기는 동안 각 세척에 대해 5 밀리리터를 사용하여 DCM로 수지세 시간을 세 번 씻으십하십시오.
건조하고 보호 및 분열될 때까지 수지와 부착된 올리고펩토이드를 보관합니다. 계속 할 준비가되면 10 분 동안 5 밀리리터의 DMF로 버블링하여 하루 이상 저장된 수지를 다시 팽창시. 용기를 배수하고 유리 펩타이드 용기에 작은 자기 교반 바와 3 밀리리터의 건조 DCM을 추가합니다.
팔라듐 촉매의 0.1 등가물및 알록 그룹당 페닐실레인 25등가의 무게. 클램프를 사용하여 반응 용기를 교반판 위에 비스듬히 배치하여 수지가 용매에 매달려 있는 동안 부드러운 동요를 겪고 DCM이 증발하는 것을 방지하기 위해 용기를 캡한다. 1시간 후, 세척당 5밀리리터를 사용하여 용액을 걸러내고 DCM으로 수지세 시간을 3회 세척합니다.
그런 다음 alloc 보호 해제를 다시 한 번 반복합니다. 다음으로, 메탄올과 DCM로 수지를 순차적으로 헹구고 수지와 마그네틱 스터드 바를 20 밀리리터 바이알로 옮길 수지와 마그네틱 스터드 바를 전달한다. DMF의 수지를 잠그고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 저어주고 갈라줍니다.
그런 다음 주사기 필터를 사용하여 해방된 올리고펩토이드를 수지로부터 분리하고 진공 하에서 용매를 제거한다. 50-50개의 물과 아세토나이트혼합물로 펩토이드를 재구성하고 반전된 상 전처리 HPLC로 정화한다. 정제 된 분획을 결합한 다음 동결하고 lyophilize하여 흰색이 아닌 분말을 생성합니다.
ESI 및 MALDI 질량 분석법으로 분말을 분석합니다. 순도를 평가하기 위해 정제 된 올리고펩토이드의 분석 HPLC를 수행하십시오. 먼저, 자체 조립에 사용되는 각 올리고펩토이드 서열의 10밀리머 스톡 솔루션과 무수아 아세토닐로 스칸듐 트리플랫의 10 밀리머 스톡 솔루션을 준비한다.
각 펩토이드 스톡 솔루션 20마이크로리터를 마그네틱 스터디 바가 장착된 3밀리리터 바이알에 추가합니다. 스톡 솔루션의 잠재적 아민 결합당 1.5 상당의 스캔듐 트리플랫 솔루션을 추가하고 충분한 물과 아세토닐릴을 추가하여 2%의 물과 아세토나이트 용액의 200 마이크로리터를 형성합니다. 알데히드의 아세틸 제거와 모든 가닥의 해리를 위해 섭씨 70도에서 부드럽게 저어줍니다.
그 후, 200 마이크로리터의 클로로폼과 2밀리리터의 물로 바이알을 충전하십시오. 바이알을 부드럽게 흔들어 줍니다. 혼합물이 적어도 15 분 동안 서 있게 하십시오.
완전한 위상 분리시 마이크로리터 주사기로 유기층을 추출합니다. 유기 층을 새로운 유리병으로 옮기고 일반적으로 6 시간이 걸리는 올리고머 어닐링을 위해 섭씨 70도에서 저어줍니다. 분자 사다리로 서열 선택적 동적 공유 자기 조립을 거치도록 정보 인코딩된 펩토이드의 능력을 입증하기 위해 대표적인 가닥은 보완적인 펩토이드 서열로 합성되고 혼성화된다.
모노머스 NPAM과 NPAL은 NEEE와 함께 역동적인 공유 반응제로 채택되어 최종 자체 조립 제품의 용해도를 돕습니다. 고체 위상 서브모노머 합성이 완료되면 alloc 그룹이 제거됩니다. 보호 를 해제하기 전, 수지의 부분은 405 나노미터 빛 아래에서 갈라졌고 전기 분무 질량 분광법을 특징으로합니다.
서열은 준비 HPLC에 의해 정제된 다음 오프 화이트 파우더를 달성하기 위해 lyophilized되고 순도는 분석 HPLC로 확인됩니다. 올리고펩토이드는 MALDI-MS에 의해 확인된 레지스트리 사다리를 감당하기 위해 상호 보완적인 시퀀스와 혼성화됩니다. 이 절차를 수행할 때, 수성 분획이 투명해질 때까지 레이어에 충분한 시간을 허용하여 충분한 촉매 추출을 보장하기 위해 적어도 15분 이상.
이 어셈블리 절차를 완료한 후 혼성화 의 정도를 결정하기 위해 질량 분석법을 수행해야 합니다. 또한, 유도적으로 결합된 플라즈마 질량 분석법 또는 불소 NMR은 추출 후 스칸듐 농도를 평가하는 데 사용될 수 있다. 이 기술은 최근에 개발되었지만, 우리는 우리의 작업에 설명 된 생물 모방 접근 방식이 복잡한 나노 구조의 미래 설계 및 정보 지향 조립을 지시하는 데 도움이 될 것으로 예상합니다.
여기에 사용되는 시약의 일부는 위험합니다. 이러한 화학 물질 또는 기타 화학 물질을 취급 할 때주의하십시오. 모든 개인 보호 장비를 착용하고 연기 후드 내부의 모든 실험을 수행합니다.
