该协议通过动态共价相互作用实现寡聚子序列的信息导向组装，真正模拟核酸的序列选择性杂交，但具有更高的间束键强度。动态共价组件通常仅限于简单的架构，因为其粘结重新排列和纠错的能力有限。相比之下，通过提高刘易斯酸的浓度，以影响粘结分离，并随后催化粘结重新排列，该技术减轻了自组装系统普遍存在的动力学陷印限制。
这种方法可用于利用共价键重排反应的各个领域，从缺陷率极低的共价有机框架到能够适应和适应组织基板持续重塑的生物材料组织界面。首次执行此技术时，即使长时间退火时间，个人仍可能会发现基内特被困的组件。我们建议首次使用者尝试在含甲醛和仅胺残留物的寡聚体之间进行杂交，从而简化编码信息，从而实现杂交。
要开始此过程，重量为 0.125 克 FMOC 光实验室固体支持树脂，并将其添加到褶皱的自动合成器反应容器中。将容器插入合成器的微波部分。将主溶剂瓶中用 DMF 和脱保瓶填充 DMF 中 20%4-甲基丙胺溶液，并清空废物。
接下来，在D分氟中准备一种溴化酸和DIC的摩尔溶液，每个残留物的总量为1.5毫升，醋酸氢化物的体积为0.47毫升，DMF为4.53毫升，以制造5毫升封盖溶液。准备用于 NMP 的每个主要胺的 0.5 摩尔溶液。每种溶液的总体积应为2.5毫升，用于适当原胺的每种残留物，外加2.5毫升。
将所有解决方案添加到自动合成器歧管中。使用自动肽合成器，膨胀树脂，切割FMOC组，并执行文本协议中概述的位移反应。在此之后，在DCE中用5%二氯二甲基硅烷溶液填充顶部，使装有三向塞子的玻璃反应容器的墙壁盐化。
让它坐30分钟，然后排干容器，用DCE和甲醇清洗。容器干燥后，将树脂转移到容器中。每次洗涤用五毫升用 DCM 清洗树脂三次，同时用氮气通过一只手臂冒泡，用另一只手臂拉真空。
干燥并储存树脂和附着的寡蛋白，直到脱保和裂解。当准备继续时，如果树脂已储存超过一天，则用 5 毫升 DMF 冒泡 10 分钟，重新膨胀。排空容器，在玻璃肽容器中加入一个小磁搅拌棒和三毫升干DCM。
重量相当于每同组0.1个丙酸催化剂和25个当量苯基硅烷。使用夹子将反应容器定位在搅拌板上方的一定角度，使树脂在保持悬浮在溶剂中时进行温和搅拌，并盖住容器以防止 DCM 蒸发。一小时后，过滤掉溶液，每次洗涤用 DCM 用 DCM 洗涤树脂三次。
然后，再次重复 alloc 去保护。接下来，用甲醇和DCM连续冲洗两次树脂，将树脂和磁搅拌棒转移到20毫升的小瓶中。如文本协议中所述，将树脂淹没在 DMF 中，搅拌和切割。
然后，使用注射器过滤器将解放的寡肽从树脂中分离，并在真空下去除溶剂。在50-50水和乙酰三叶酸混合物中重组肽，使用反相制备HPLC进行净化。将纯化分数混合，然后冷冻和冻干，产生白色粉末。
使用 ESI 和 MALDI 质谱法分析粉末。要评估纯度，请对纯化的寡肽进行分析性HPLC。首先，准备用于自组装的每个寡蛋白序列的10毫摩尔库存溶液和无水乙酰三叶草中微钛三叶酸的10毫摩尔库存溶液。
将每个辣椒库存溶液的 20 微升添加到装有磁性搅拌棒的三毫升小瓶中。从库存溶液中加入每一种潜在胺键的 1.5 个分型三叶虫溶液，并加入足够的水和乙酰三叶虫，形成 2% 水和乙酰三叶虫溶液的 200 微升。在70摄氏度下轻轻搅拌两个小时，使乙酰脱脂对醛进行保护，并分离所有链。
在此之后，用200微升氯仿和两毫升水给小瓶充电。轻轻摇动小瓶。让混合物至少站立15分钟。
完成相分离后，用微升注射器提取有机层。将有机层转移到新瓶中，在 70 摄氏度下搅拌，用于寡聚物退火，通常需要 6 个小时。为了证明信息编码的肽能够将序列选择性动态共价自组装成分子梯，合成一种具有代表性的链，并及其互补的肽序列进行杂交。
单体NPAM和NPAL用作动态共价反应对，与NEE辅助最终自组装产品的溶解性。完成固相亚体粒合成后，将去除异构体组。脱保护之前和之后，部分树脂在405纳米光下切割，以电喷电离质谱学为特征。
该序列通过预处理 HPLC 进行纯化，然后冻干，以实现白色粉末，并且通过分析性 HPLC 确认其纯度。寡值随后与互补序列混合，以提供 MALDI-MS 确认的登记内阶梯。执行此过程时，请记住留出足够的时间让层完全分离，直到水分变为透明，至少 15 分钟，以确保足够的催化剂萃取。
完成此装配过程后，应执行质谱法以确定杂交的程度。此外，电感耦合等离子体质谱仪或氟核磁共振可用于评估萃取后浓度。虽然这项技术是最近开发的，但我们预计我们工作中描述的仿生方法将有助于指导未来复杂纳米结构的设计和信息导向组装。
此处使用的几种试剂是危险的。处理这些或任何其他化学品时，请小心谨慎。穿戴所有个人防护装备，并在烟罩内执行所有实验。
