그래서이 방법은 특정 약물이 살아있는 유기체에서 어떻게 행동하는지에 대한 약물 발견 과정에서 중요한 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 큰 샘플 크기를 빠르고 효율적으로 선별할 수 있다는 것입니다. 이 기술은 이미 약물 후보의 효과의 매우 quanitative 평가를 가능하게 하 여 약물 발견에 큰 영향을 미치고 있다.
이 방법은 잘못된 접이식 질병의 발병과 진행에 대한 새로운 기계론적 통찰력을 제공합니다. 더욱이, 이 방법은 노화 및 유전 검열과 같은 그밖 시스템에 또한 적용될 수 있습니다. 우리는 신약 발견의 공간에 새로운 물리적 방법을 소개하는 이 기회에 매우 기쁘게 기대됩니다.
이 방법의 이러한 악마는 스크리닝 단계가 노보 자동 기술에 높은 친숙을 필요로하기 때문에 중요합니다. 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실에서 검색 도우미 샘 캐스포드될 것입니다. 시술을 시작하기 전에, 각 약물 화합물의 2.2 밀리터를 웜 스트레인 당 6개의 5-플루오로오록시리딘 또는 FUDR 플레이트에 적절한 농도로 추가하고, 조심스럽게 접시의 전체 표면에 화합물을 퍼뜨리고, 멸균 조건하에서 플레이트를 건조시키십시오.
플레이트가 건조되는 동안 M9 버퍼 15밀리리터를 사용하여 5개의 풍부한 선충 성장 인자 플레이트에서 벌레를 세척하고 해방된 벌레를 원심 분리를 위한 원적 튜브로 옮긴다. L4 애벌레 단계에서 벌레의 수를 정량화하기 위해 신선한 M9 버퍼의 3 밀리리터에서 선충을 다시 중단하고, 화합물 당 6개의 건식 FUDR 플레이트 각각에 700 L4 애벌레를 종자한다. 모든 선충이 시드되었을 때, 24시간 동안 온도를 섭씨 24도에서 높여 서 문동이 유도되는 균주를 포함하는 판을 놓습니다.
다음 날, 병렬 웜 트래커의 무대 조명을 켜고 70 %의 에탄올로 추적기의 유리 단계를 청소하십시오. 눈에 보이는 잔류물이 남아 있지 않으면 렌즈 캡을 제거하고 공기 먼지를 사용하여 이미징 렌즈를 청소하십시오. 카메라가 올바르게 연결되고 설치되어 있는지 확인하고 이미지 캡처 소프트웨어로 녹화를 시작합니다.
적절한 모노-16 레코딩 매개 변수를 사용하여 카메라 설정을 조정하여 초당 20프레임을 기록합니다. 빈 9센티미터 페트리 접시를 사용하여 스테이지가 올바른 높이로 설정되어 있는지 확인하고 필요한 경우 스테이지를 조정합니다. 멸균 조건하에서, 운동성 스크리닝 플레이트에 M9 용액 3밀리리터를 추가하고, M9 용액의 2밀리리터를 사용하여 동일한 실험군에서 FUDR 플레이트 2개의 표면적 3분의 1을 스크리닝 플레이트로 세척한다.
그런 다음 스크리닝 플레이트를 트래커 스테이지에 배치합니다. 단일 웜을 사용하여 카메라에 초점을 맞추고 동물 녹음을 시작합니다. 레코딩이 완료되면 운동성 플레이트를 폐기하고 FUDR 플레이트를 한 번 사용한 후 인큐베이터로 되돌리십시오.
비디오 데이터를 분석하려면 병렬 웜 트래커 데이터 분석 소프트웨어 그래픽 사용자 인터페이스를 열고 브라우징 기능을 사용하여 관심 있는 비디오를 로드합니다. 출력 대상 폴더를 선택하고 30초 분석을 위해 600~1200프레임이 설정되어 있는지 확인합니다. 전체 해상도로 9센티미터 페트리 접시의 이미징을 위해 0.029 픽셀에서 밀리미터 변환 계수를 삽입하고, 죽은 추적 algorithhm을 선택합니다.
찾기 매개 변수 탭에서 Z 사용 이미지를 100으로 설정하고 Z 패딩을 3으로, 표준 픽셀을 54로, 임계값은 9로, 개구부가 1으로, 닫기는 2로 설정합니다. 필터링 매개 변수를 최소 크기 20, 최대 크기 180 및 0.94와 같은 웜으로 조정합니다. 성형 궤적 매개변수를 최대 거리 이동 10, 최소 길이 150 및 10의 메모리로 설정합니다.
굽힘 및 속도 매개변수를 1.8의 굽힘 임계값, 최소 굽힘 0, 150의 속도를 추정하는 프레임으로 설정합니다. 죽은 웜 통계를 분당 최대 비트 5, 최대 속도 1로 조정합니다. 출력 폴더를 선택하고 출력 프레임 수를 50으로 선택하고 글꼴 크기를 10으로 선택합니다.
예제 함수를 사용하여 매개 변수를 테스트하고 샘플 이미지를 출력하여 웜이 8개의 임계값 설정 단계에서 표시되는지 확인합니다. 그런 다음 시작 작업"기능을 시작하고 전체 데이터 집합에 대한 개별 결과를 결합하여 테스트 결과 파일을 분석하여 TSV 함수로 내보내결과를 저장합니다. 이 방법은 전두엽 치매, 파킨슨 병, 알츠하이머 병 및 근위축성 측삭 경화증과 같은 신경 퇴행성 질환의 다양한 웜 모델의 대규모 인구 연구에 대한 선충 주체 의 특성화를 허용합니다.
파킨슨 병과 알츠하이머 병의 웜 모델을 사용하여 잠재적 인 치료 분자의 효과의 특성뿐만 아니라. 이러한 측정의 높은 정확도는 기존의 방법에 비해 분석할 수 있는 웜수를 늘려 서 달성됩니다. 이 절차를 수행하는 동안 웜을 운동성과 추적의 시작 에 추가하는 시간을 최소화하는 것이 중요합니다.
이 절차에 따라, 다른 방법은 결과를 보완하고 단백질 응집과 연결하기 위해 수행 될 수있다. 개발 후, 이 기술은 파킨슨병과 알츠하이머병과 같은 신경 퇴행성 및 잘못된 접이식 질환 분야의 연구원들이 올바른 발견 응용 프로그램을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. FUDR과 함께 일하는 것은 매우 위험할 수 있으며 니틀 장갑 착용과 같은 예방 조치는 항상 이 절차를 수행하는 동안 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.
