이 프로토콜의 개발은 DeFishGear 프로젝트 (1 ° STR / 00010)에서, IPA 아드리아 국경 간 협력 프로그램 2007-2013에 의해 설립되었다.

바다 표면에 microplastics 1. 샘플링 <ol><li> 라인과 캐러 비너를 사용하여 스피너 커 붐 또는»A-프레임«를 사용하여 용기의 측면에서 만타 그물을 배포합니다. </li><li> 후류 영역 내부의 난류의 영향을 물을 수집하는 것을 방지하기 위해 - (보트에서 4m 거리. 약 3) 후류 영역에서 만타 그물을 배포합니다. </li><li> 데이터 시트의 초기 GPS 좌표와 초기 시간을 기록합니다. </li><li> 약의 속도로 하나의 직선 방향으로 이동하기 시작합니다. 2-3 매듭 30 분 동안의 시간 측정을 시작한다. </li><li> 30 분 후 보트를 중지하고 최종 GPS 좌표를 기록, 경로의 길이는 제공된 데이터 시트에 평균 보트 속도에서 만타 그물을 들어 올려 (가장 정확한 방법은 GPS 좌표에서 길이를 계산하는 것입니다) 물. </li><li> 보트 워싱턴에서 잠수 펌프 또는 물을 사용하여 해수와 인터넷의 외부로부터 철저하게 만타 그물을 씻어터 저수지. 대구 끝으로 그물에 부착 된 모든 입자를 집중하기 위해 대구 끝까지 타 입의 방향으로 씻어. 주 : 오염을 방지하기 위해 그물의 개구부를 통해 샘플을 씻어 마십시오. </li><li> 안전하게 대구 끝을 제거하고 대구의 샘플은 300 μm의 메쉬 크기 체 이하를 종료 체. </li><li> 외부로부터 철저하게 대구 끝을 씻어 체를 통해 샘플의 나머지 부분을 붓는다. 더 이상 대구 끝에 내부에 입자가 없을 때까지이 단계를 반복합니다. </li><li> 체의 한 부분에 체에 대한 모든 자료를 집중한다. </li><li> 깔때기를 이용하여 70 % 에탄올을 사용하여 유리 병 또는 플라스틱 병에 체를 헹군다. </li><li> , 병을 닫습니다 종이 수건으로 닦아 뚜껑을 라벨 및 방수 마커 샘플 이름과 날짜와 함께 단지 외부 (당신은 또한 가능한 손실을 방지하기 위해 항아리에 연구 개 종이에 연필로 쓴 두 번째 레이블을 넣어해야합니다 의항아리에 삭제 된 라벨로 인해 샘플 이름). 멋진 상자에 표시된 플라스틱 병을 전송합니다. 일반적인 샘플링 조건 참고 : 풍속 이상이 퍼트 안 파도가 너무 높고 그물 바다 표면에 안정하지 않기 때문에. 트로 올 동안 일정한 속도로 일정한 직선 코스를 유지하는 것이 중요하다. 만타 순 개방의 절반은 샘플링 동안 침수되어야한다. 샘플링 시간은 30 분이어야한다 (천연 소재의 많은 양이 경우, 예를 들어, 플랑크톤 꽃을 샘플링 기간은 짧아 질 수 있습니다.) 플라스틱 도구와 용기의 사용을 피하십시오. 합성 의류 (예 : 양털)을 피하고, 로프 및 선박 타 네트의 접촉은 시료의 오염을 방지합니다. 배포 및 그물을 캡처하는 동안 만타 순 또는 보트 선체 손상되지 않도록 매우주의해야합니다. </li></ol> 바다 표면 샘플에서 microplastics 2. 분리 <ol><li> 샘플은 포함하지 않는 경우25mm보다 큰 모든 항목과, 깨끗 3 단계와 직접 계속 나타납니다. </li><li> 시각적 식별 및 핀셋을 사용하여 체 (≤300 μm의 메쉬 크기)을 통해 샘플을 붓고 샘플에서 크기&gt; 5mm (매크로 및 메조 쓰레기)의 모든 자연 또는 인공 쓰레기 개체를 제거합니다. 여기에 부착 된 모든 microplastic 쓰레기를 제거하기 위해 증류수로 조심스럽게 각 제거 객체를 씻어주의하십시오. 별도의 용기에 모든 자연과 인공 쓰레기 개체를 저장합니다. 데시 케이 터 (또는 야외에서,하지만 폐쇄 접시)의 모든 자연과 인공 쓰레기 개체를 건조하고 무게. 쓰레기 항목 16의 카테고리의 마스터 목록에 따라 모든 쓰레기 개체&gt; 25mm (매크로 쓰레기)를 확인합니다. </li><li> 모든 큰 객체를 제거한 후, 분출 병 또는 수돗물을 사용하여 자체의 한 부분에 남아있는 부분을 농축시켰다. FUNN의 도움으로 70 % 에탄올의 최소량을 사용하여 유리 샘플 용기에 붓고엘자. 주의 :이 단계에서는 70 % 에탄올의 사용은 시료를 유지하는 것이 중요하다. 또한 샘플의 육안 검사의 단계에서, 에탄올 따라서 쉽게 찾을 될 유기체와 화려한 플라스틱을 변색하는 데 도움이됩니다. </li><li> 샘플 (표본)을 소량 취하여 유리 페트리 접시에 부어. 실체 현미경의 사용과 샘플을 분석 (20 - 80 배 줌) 및 microplastic 입자를 검색합니다. </li><li> 각 microplastic 입자는 표 1에 나열된 카테고리 중 하나로 분류하고 카테고리 이름이 표시 페트리 접시 나 기타 유리 바이알에 투입한다. 페트리 접시는 항상 폐쇄 할 필요가있다. 참고 : 샘플에서 분리 microplastics는 보수적 및 분석을위한 작은 입자보다 오히려 선택합니다. 입자의 실제 화학 구조는 여전히 나중에 결정될 것이다. microplastics가 붙어 때문에 큰 항목 아래에 숨겨져있을 수 있습니다 모든 측면에서 큰 개체를 분석해야합니다.또한, 페트리 접시의 한쪽 이미 분석 된 개체를 이동하는 것이 도움이 될 수있다. </li><li> 장비 (마이크로 미터 슬라이드 또는 이미지 분석 소프트웨어에 의해 보정 안구 통치자)를 측정 현미경 페트리 접시를 넣고 필라멘트를 제외한 각 입자의 크기 (가장 긴 대각선을 측정)를 측정하고 색상을 확인합니다. 각 표본은 다른 사람에 의해 검토되어야한다. 유리 벽에 부착 된 모든 입자는 페트리 접시에 세척되도록 샘플이 들어있는 유리 용기를 씻어주의하십시오. </li><li> 개별적으로 분석 규모의 사용에 의해 각 카테고리의 microplastic 입자를 무게. Microplastic 입자는 계량하기 전에 건조해야합니다. 폐쇄 페트리 접시 데시 케이 터에 넣어하거나 샘플 입자 (입자 폐쇄 페트리 접시의 무게가 일정)까지 건조 된 폐 접시에 건조 남아있을 수있다. </li><li> 마이크로 쓰레기를 식별합니다. microplastics의 검색에서 샘플을 분석 할 때 다음 사항을 고려하시기 바랍니다다른 사람들이 찾을 난이도가있을 수 있지만 일부 입자 (색상, 모양, 크기)을 쉽게 볼 수 있습니다. 다음은 샘플에서 microplastic 입자를 식별하는 몇 가지 기능은 다음과 같습니다 예를 들어, 아니 셀 구조, 고르지, 날카로운, 비뚤어진 가장자리, 균일 한 두께, 독특한 색상 (파란색, 녹색, 노란색, 등). </li></ol> microplastics 3. 화학 물질의 식별 <ol><li> ATR-FTIR 분광기 <ol><li> 이전 분석에 알코올과 보풀이없는 천으로 검출 시스템을 청소합니다. </li><li> 배경 스펙트럼을 기록합니다. 샘플 홀더에 샘플을 놓고 스펙트럼을 수집합니다. 데이터베이스의 스펙트럼으로 얻어진 스펙트럼의 자동 비교를 사용하여 얻어진 ATR- FTIR 스펙트럼을 확인합니다. </li></ol></li><li> 마이크로 ATR-FTIR 분광기 <ol><li> 이전 분석에 알코올과 보풀이없는 천으로 검출 시스템을 청소합니다. </li><li> 유리 필터에 샘플을 놓습니다. 참고 : 다른 필터는 우리가 될 수 있습니다에드 그러나 그들의 폴리머 특성은 특성을 방해 할 수 있습니다. </li><li> 자동 스캔 테이블에 샘플 필터를 놓고 샘플을 찾기 위해 조이스틱을 사용합니다. </li><li> 광학 이미지를 기록하고 영역을 표시합니다 (예 : 20 μm의 20에 의해) 샘플을 특징으로 할 위치. </li><li> 배경 스펙트럼을 기록합니다. </li><li> 샘플 홀더에 샘플을 놓고 미리 정의 된 위치에서 스펙트럼을 수집합니다. </li><li> 데이터베이스의 스펙트럼으로 얻어진 스펙트럼의 자동 비교를 사용하여 얻어진 마이크로 ATR-FTIR 스펙트럼을 확인합니다. </li></ol></li></ol>

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The authors have nothing to disclose.

타 그물로 바다 표면에 Microplastics 샘플링은 바다 표면에 microplastics의 샘플링을 위해 널리 사용되는 방법이지만 날짜에 더 통일 된 방법이 없었다. 많은 양의 물은 망 만타 통해 여과 될 수있다 따라서 microplastics의 해당 번호를 포착 할 가능성이 높고, 그 결과는 신뢰성있는 것으로 인식된다. 다른 샘플 중 결과의 비교는 정규화에 의해 보장된다. 우리의 경우, 농도는 순 개구의 가로 폭 트롤 거리를 곱하여 샘플 영역에 관련되었다. 또 다른 옵션은 넷 개구부에 고정 된 유량계를 사용하는 것이다. 그 측면 날개 만타 그물 바다 표면에 매우 안정하고, 따라서 파동의 호핑 최소이므로 유량계의 사용이 가능하다. 유량계 여과 물의 부피를 기록함으로써 샘플링 된 물 (16)의 체적 당 결과의 정규화를 가능하게한다. <p class="jove_content"&gt;는 자주 사용 만타 그물 약 300 ㎛의 메쉬 크기를 갖고있는 3 - 4.5 m 길이. 이러한 치수는 네트의 막힘을 방지하고, 가능한 한 큰 물 부피를 샘플링 할 수 있도록 최적화되었다. 트롤 어업 속도는 2 사이가 될 것을 권장합니다 - 3 노트하지만, 파고, 풍속과 바다 전류에 따라 달라집니다. 만타 그물 감독하에 샘플링 동안 전체 시간하는 것이 매우 중요하고 호핑 시작되면, 트롤 어업 속도는 감소되어야한다. 트롤 어업 시간은 약 30 분으로 권장하지만, seston 농도에 따라 결정된다. seston 때로는 타 그물을 막 신 것을 발생할 수 있습니다. 이 경우 저인망 즉시 중단되어야 달리 microplastic 입자가 손실 될 수 있고, 넷은 손상받을 수있다. 타 망은 자주 용기의 측으로부터 고정이다. 만타 그물 후류 영역에서 확실히 동안이, 또한 가장 적합한 옵션입니다. 일부 조사에서는 만타 그물은 선박의 선미에서 고정17, 18,하지만 당신은 그물이 후류 영역에서 있는지 확인해야하는 경우입니다. 용기에 의한 난류의 영역이 상기 용기의 크기와 상기 보트 (19), (20)의 속도의 변화 때문에 트롤이 샘플링에 대해 설정되는 간격은 개별적으로 결정되어야한다. 바다 표면 샘플에서 microplastic 입자의 분리는 대부분 시각적 식별 (21)에 의해 바로 이루어집니다. 1mm보다 작은 입자는 실체의 사용을 필요로하면서 큰 1mm 이상의 입자를 육안으로 쉽게 식별 할 수있다. 실체 현미경의 편광을 이용하여, 플라스틱 사람과 비 플라스틱 입자를 혼동의 가능성을 줄이기 위해 권장합니다. 플라스틱 입자의 오인의 가능성은 작은 입자와 높은 가져옵니다. 따라서 입자&gt; 0.5 mm는 실체 현미경을 사용하여 시각적으로 확인 (21) 할 수있다. 0.5 mm보다 작은 입자추가로,보다 정확한 방법은 예를 들어 마이크로 ATR-FTIR 분광기 (21)가 필요합니다. 샘플로부터 microplastics 분리하는 과정에서 부유 필라멘트 샘플 오염의 가능성이 매우 높다. 이 때문에, 작업 테이블에 열려 배양 접시를 제어하는 ​​강력한 잠재적 인 오염 공기 입자의 식별을 위해 사용하는 것이 좋습니다. 즉, 데이터의 품질 강하게 의존 1) 샘플 16 샘플 2) 품질과 입체의 배율 및 유기물 3) 양의 작업을하는 사람의 정밀도. 시각적 식별 후에 강하게 재료 (8)의 화학 식별 가능한 방법 중 하나에 정렬 된 입자를 분석하는 것을 권장한다. 여러 가지 방법 중 어느 FTIR 스펙트럼과 라만 분광법 가장 FREQUEN은 중합체 식별 존재TLY (22)을 사용했다. FTIR과 라만 분광법은 상호 보완적인 기술이며, 그 정확도는 비슷합니다. 우리의 프로토콜에서 &quot;감쇠 총 반사율&quot;(ATR)와 FTIR 및 마이크로 FTIR 스펙트럼이되게됩니다. 그들은 사용하기 간단하고 빠르고 정확한 결과를 가능하게한다. 플라스틱 폴리머 따라서 IR이 microplastics (21)의 식별을위한 최적의 기술을 분광법 만드는 독특한 밴드 패턴이 매우 특정 적외선 (IR) 스펙트럼을 갖는다. IR 스펙트럼 특성 (22)의 측정을 가능하게하는 샘플과 상호 작용할 때 IR 방사선의 에너지는 특정 분자의 진동을 여기시킨다. FTIR 스펙트럼은 또한 산화 분해 및 23의 24 단계의 강도 등의 입자에 대한 추가적인 정보를 제공 할 수있다. ATR-FTIR 큰 입자의 화학적 식별 (&gt; 0.5 mm)에 적합한 반면, 마이크로 ATR-FTIR 분광기 # 입자의 화학 구조에 대한 정보를 제공 할 수있다60 0.5 mm, 그것이 현미경 적외선 분광기의 기능을 겸비한있다. 물이 강한 IR 방사선 (22), 정제를 흡수 이후 FTIR 마이크로 FTIR 분광기를 사용하기 전에 microplastic 입자 경우들이 IR 스펙트럼에 영향을 미칠 수있는 바이오 필름 및 / 또는 다른 유기 및 무기의 부착물로 피복되는, 이전에 건조한다. 샘플을 정화하는 가장 비 침습적 방법은 교반 및 담수 (25)와 린스입니다. 이 충분하지 않은 경우, 30 %의 과산화수소를 사용하는 것이 바람직합니다. 다른 모든 방법이 부정적인 microplastic 입자에 대한 영향 (예 : 더 입자를 깰 수 초음파 세척, 강한 산성 또는 알칼리성 용액 등 여러 가지 플라스틱 폴리머를 손상시킬 수 있습니다) 따라서 그 사용하지 않는 것이 좋습니다을 가질 수 있습니다. 유망한 플라스틱 친화 정제 단계와 같은 일련의 소화 효소의 사용이다. 정제 다른 기술 효소를 사용하여 (예 : 리파제하는mylase, 테가 키틴은 셀룰라아제는 테-K)는 성공적 플랑크톤 생물학적 매트릭스를 감소시키고 따라서 FTIR 분광학 측정 22 중 매트릭스 아티팩트를 최소화하기위한 유용한 기술로 입증 적용되었다. 시각적 식별 및 선택 입자의 화학 식별하여 microplastics의 분리는 모두 매우 시간이 많이 소요되는 프로세스입니다. 이 작품은 플라스틱 입자를 인식에서뿐만 아니라, 생물학적 문제를 인식에서뿐만 아니라 실체 현미경과 경험을 가지고 정확하고 환자 개인에 의해 수행되어야한다. 심지어 경험이 풍부한 사람은 키틴 또는 규조류 조각 (22)에서 명확하게 모든 잠재적 microplastic 입자를 구별 할 수 없습니다. 따라서, 시각적 인 정렬 에러 레이트 20 % 26 70 % 21 범위 및 입자 크기 감소와 함께 증가한다.

Microplastic pollution in the sea represents a growing concern to contemporary society, due to the constant increase in plastic production and its subsequent disposal and accumulation in the marine environment1. Even if plastic macro litter would no longer enter the seas, microplastic pollution would continue to grow due to fragmentation of already existing plastic litter in the sea2. The majority of microplastic pollution studies were carried out in marine and fresh water ecosystems and mainly addressed sea surface pollution3.
The term microplastic refers to plastic particles smaller than 5 mm in size4. This term describes a heterogeneous mixture of particles, which can differ in size (from a few microns to several millimeters), color and shape (from very different shapes of fragments to long fibers). Microplastic particles can be of a primary or secondary origin5. Microplastic of primary origin is manufactured as small particles used in the cosmetics industry (pilling cr&#232;me etc.) or chemical industry as precursor for other plastic products (e.g. plastic pellets used in plastic industry). Microplastic of secondary origin arise via the degradation of larger plastic pieces in the environment due to physical and chemical processes, induced by light, heat, oxygen, water and organisms6. In 2015, four types of microplastic sources were defined: larger plastic litter, cleaning products, medicines and textiles6. The main source (80 %) of larger plastic litter is assumed to be land based7. Microplastic from cosmetic products, medicines and textile enters water ecosystems through sewage and storm waters6. Microplastic particles most frequently found in water ecosystems are fragments from larger plastic litter and textile fibers8. 
Microplastics have several negative effects on the environment. Their small size allows them to enter the food web through ingestion by marine organisms9, 10. Ingested particles can cause physical damage or block the digestive system of animals11. Particles can also be carriers of persistent organic pollutants (POPs). Their hydrophobic surface and favorable ratio of large surface area to small volume, enables POPs to adsorb onto the microplastics12. In the environment or digestive systems of animals who ingest them, POPs and other plastic additives can be leached from microplastic particles13. 
Previous studies reported the ubiquitous presence of microplastics in the marine environment3, from the water column to the bottom sediments. The threat of microplastic pollution was already identified by the Marine Strategy Framework Directive in the EU and, consequently, mandatory monitoring of microplastics was advised14. Accordingly, the EU Technical Subgroup on Marine Litter (TSG-ML) prepared recommendations for monitoring of microplastics in the European seas15. Thus, the video guidelines for microplastics sampling are of high importance, as they support comparative monitoring and a coherent management process all over the world.
This protocol was developed within the DeFishGear project for the first monitoring of microplastic pollution in the Adriatic Sea. Recommendations from the document "Guidance on Monitoring of Marine Litter in European Seas" by TSG-ML15 were taken into account. This protocol describes the methodology for microplastics sampling on the sea surface, separation of microplastics from the samples, and chemical analysis of microplastic particles to confirm that particles are from plastic material and to identify the type of plastic. Sampling was done by the use of a manta net, which is the most suitable equipment for sampling in calm waters16. Separation of microplastics from the samples was carried out by visual identification using a stereomicroscope. Isolated particles were later chemically identified using Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy and micro FTIR spectroscopy.

<table><tbody><tr><td>In this protocol no specific equipment or reagents were used.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protocol for microplastics sampling on the sea surface and sample analysis

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of scientific publications address microplastic pollution of the sea surface. The protocol below describes the methodology for sampling, sample preparation, separation and chemical identification of microplastic particles. A manta net fixed on an &#187;A frame&#171; attached to the side of the vessel was used for sampling. Microplastic particles caught in the cod end of the net were separated from samples by visual identification and use of stereomicroscopes. Particles were analyzed for their size using an image analysis program and for their chemical structure using ATR-FTIR and micro FTIR spectroscopy. The described protocol is in line with recommendations for microplastics monitoring published by the Marine Strategy Framework Directive (MSFD) Technical Subgroup on Marine Litter. This written protocol with video guide will support the work of researchers that deal with microplastics monitoring all over the world.

기술 된 프로토콜의 첫 번째 결과들은 시각 정보 (표 1)에 따라 여섯 가지로 분류 microplastic 입자이다. 첫 번째 범주, 통상 가장 풍부한 것은, 단편 (도 1)이다. 그들은 날카로운 비뚤어진 가장자리와 불규칙한 모양, 두께, 강성이다. 서로 다른 다양한 색상 일 수있다. 두 번째 범주는 영화 (그림 2)입니다. 또한 부정형으로 나타나지만, 단편에 비하여 이들은 얇고 유연한 보통 투명하다. 세 번째 범주는 일반적으로 플라스틱 산업에서 발생, 펠렛 (그림 3)입니다. 그들은 불규칙한 둥근 모양이며, 직경 5mm의 주위에, 크기가 일반적으로 더 큰. 그들은 한쪽에 일반적으로 평평하고 다양한 색상이 될 수 있습니다. 네 번째 범주는 과립 (그림 4)입니다. 펠릿에 비해, 이들은 직경 1mm 주위에 규칙적인 원형 일반적으로 작은 크기를 갖는다. 그들은 자연 색상에 표시(흰색, 베이지 색, 갈색). 다섯 번째 범주는 필라멘트 (그림 5)입니다. 그들은, 조각, microplastic 입자의 가장 풍부한 유형 옆에 있습니다. 그들은 서로 다른 두께와 색상, 짧거나 긴 될 수 있습니다. 마지막 범주는 폼 (그림 6)이다. 그들은 대부분 스티로폼의 큰 입자에서 왔습니다. 그들은 부드럽고 불규칙한 모양과 색상 노란색에 흰색입니다. microplastics 샘플링 및 샘플 분석의 주요 결과는 샘플 당 microplastic 입자의 수이다. 이러한 데이터는 km 2 당 더 정규화 할 수 있습니다. 정규화에 사용되는 공식은 다음과 같다 샘플 / 샘플링 면적당 microplastic 입자 (도 7 표 2, 3)의 샘플링 영역은 타 그물의 개구부의 폭으로 샘플링 간격을 곱하여 계산된다. 또한, 입자는 IM으로 분석 할 수있다연령 분석 소프트웨어. 결과는 각 입자 (표 4)의 최대 길이와 면적을 포함한다. 이미지 분석 전에 그림 8a 쇼 입자와 그림 8b는 각 입자 측정 및 번호가 영상 분석, 후입니다. 마지막으로, 샘플 당 입자의 전체 또는 가능한 가장 높은 번호의 화학 분석을 권장합니다. 푸리에 스펙트럼이 다음 소프트웨어 라이브러리 (도 10)의 스펙트럼과 비교도 9에 도시 된 바와 같이 선택된 입자의 스펙트럼이 취득되고 변환 적외 분광의 사용. 소정의 입자가 플라스틱인지 및 화학 구조의 플라스틱의 종류를 나타내는 경우, 최종 결과가 표시된다. <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> 1 </td><td> 조각 </td></tr><tr><td> 이 </td><td> 영화 </td></tr><tr><td> 삼 </td><td> 펠렛 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 과립 </td></tr><tr><td> (5) </td><td> 필라멘트 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 거품<html> 에스 </td></tr></tbody></table> 표 1 : microplastic 입자의 종류. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig1.jpg" /> 그림 1 : 조각 : 카테고리 입자의 예. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig2.jpg" /> 그림 2 : 영화 : 카테고리 입자의 예. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> /55161fig3.jpg &quot;/&gt; 그림 3 : 펠렛 : 카테고리 입자의 예. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig4.jpg" /> 그림 4 : 카테고리 입자의 예 : 과립. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig5.jpg" /> 그림 5 : 카테고리 입자의 예 : 필라멘트. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 6 : 거품 : 카테고리 입자의 예. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> 샘플링 거리 [km] </td><td> 이 </td></tr><tr><td> 만타 폭 [km] </td><td> 0.0006 </td></tr><tr><td> 샘플링 영역 [km 2] </td><td> 0.0012 </td></tr></tbody></table> 표 2 : km 2 당 microplastic 입자의 계산에 사용 설문 조사 데이터, 예. <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> 아니 </td><td> 없음 / km 2 </td></tr><tr><td>조각 </td><td> (301) </td><td> 250833 </td></tr><tr><td> 영화 </td><td> (45) </td><td> 37500 </td></tr><tr><td> 펠릿 </td><td> (15) </td><td> 12500 </td></tr><tr><td> 과립 </td><td> 8 </td><td> 6667 </td></tr><tr><td> 폼 </td><td> (33) </td><td> 27500 </td></tr><tr><td> 필라멘트 </td><td> (223) </td><td> 185833 </td></tr></tbody></table> 표 3 : 6 그룹으로 분류 데이터를 계산하지 않고 km 2 당 정규화 조사 결과의 예 (없음 - 입자의 수). <img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig7.jpg" /> 그림 7 : 페이지를 시각적으로 분류 한 후 대표적인 결과의 예문서 (아니오 - 입자의 수). <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> 인덱스 지역 </td><td> 지역 [mm² 인] </td><td> 최대 길이 [mm] </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 8.010 </td><td> 5.506 </td></tr><tr><td> 이 </td><td> 10.517 </td><td> 5.628 </td></tr><tr><td> 삼 </td><td> 12.185 </td><td> 5.429 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 3.367 </td><td> 3.367 </td></tr><tr><td> (5) </td><td> 2.475 </td><td> 2.155 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 1.809 </td><td> 2.943 </td></tr><tr><td> (7) </td><td> 6.604 </td><td> 5.238 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> 5.779 </td><td> 4.037 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> 4.472 </td><td> 3.791 </td></tr><html><tr><td> (10) </td><td> 16.907 </td><td> 5.355 </td></tr><tr><td> (11) </td><td> 7.246 </td><td> 3.733 </td></tr><tr><td> (12) </td><td> 7.867 </td><td> 4.622 </td></tr><tr><td> (13) </td><td> 6.411 </td><td> 5.056 </td></tr><tr><td> (14) </td><td> 3.281 </td><td> 3.070 </td></tr><tr><td> (15) </td><td> 12.937 </td><td> 5.554 </td></tr><tr><td> (16) </td><td> 6.709 </td><td> 3.716 </td></tr></tbody></table> 표 4 : 영역 [mm 2] 각 입자의 최대 길이 [mm]가 측정되는 화상 해석 결과의 예. <img alt="그림 8" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig8.jpg" /> 도 8의 실시 예는 화상 전)을 취득하고 b) 이미지 분석 소프트웨어 입자 이미지 분석 후.ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55161/55161fig8large.jpg &quot;대상 =&quot;_ 빈 &quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 9" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig9.jpg" /> 그림 9 : 표시 봉우리와 [cm -1] 그 파장으로 선택된 입자에 측정 된 스펙트럼의 예. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig9large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 10" src="/files/ftp_upload/55161/55161fig10.jpg" /> 그림 10 : ATR-FTIR 스펙트럼 라이브러리에서 최고의 경기를 선택한 입자에서 획득 한 스펙트럼의 비교 예. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55161/55161fig10large.jpg" target="_blank">이 F의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오</a>igure.

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Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

바다 표면에 microplastics 샘플링, 입자의 microplastic 화학적 식별의 분리 : 프로토콜은 아래의 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 해양 쓰레기에 MSFD 기술 하위 그룹에 의해 출판 microplastics 모니터링을위한 권고와 일치한다.

바다 표면 및 샘플 분석에 Microplastics 샘플링을위한 프로토콜

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Environment

49.3K 조회수.  Institute for water of the Republic of Slovenia.  바다 표면에 microplastics 샘플링, 입자의 microplastic 화학적 식별의 분리 : 프로토콜은 아래의 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 해양 쓰레기에 MSFD 기술 하위 그룹에 의해 출판 microplastics 모니터링을위한 권고와 일치한다. 

비디오: Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Unraveling the Unseen Players in the Ocean - A Field Guide to Water Chemistry and Marine Microbiology

Here we introduce a series of thoroughly tested and well standardized research protocols adapted for use in remote marine environments. The sampling protocols include the assessment of resources available to the microbial community (dissolved organic carbon, particulate organic matter, inorganic nutrients), and a comprehensive description of the viral and bacterial communities (via direct viral and microbial counts, enumeration of autofluorescent microbes, and construction of viral and microbial metagenomes). We use a combination of methods, which represent a dispersed field of scientific disciplines comprising already established protocols and some of the most recent techniques developed. Especially metagenomic sequencing techniques used for viral and bacterial community characterization, have been established only in recent years, and are thus still subjected to constant improvement. This has led to a variety of sampling and sample processing procedures currently in use. The set of methods presented here provides an up to date approach to collect and process environmental samples. Parameters addressed with these protocols yield the minimum on information essential to characterize and understand the underlying mechanisms of viral and microbial community dynamics. It gives easy to follow guidelines to conduct comprehensive surveys and discusses critical steps and potential caveats pertinent to each technique.

Here, we present a comprehensive protocol to assess the organic and inorganic nutrient availability and the abundance and structure of microbial and viral communities in remote marine environments.

물 화학 및 해양 미생물에 필드 가이드 - 바다에서 보이지 않는 선수를 해명

Here we introduce a series of thoroughly tested and well standardized research protocols adapted for use in remote marine environments. The sampling ...

연구

환경과학

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination control. Developments of some techniques aiming to reduce trace metal contamination in the last couple of decades have resulted in concentrations reported now being orders of magnitude lower than those in the past. These low concentrations often necessitate preconcentration of water samples prior to instrumental analysis of samples. Since contamination can appear in all phases of trace metal analyses, including sample collection (and during preparation of sampling containers), storage and handling, pretreatments, and instrumental analysis, specific care needs to be taken in order to reduce contamination levels at all steps. The effort to develop and utilize "clean techniques" in trace metal studies allows scientists to investigate trace metal distributions and chemical and biological behavior in greater details. This advancement also provides the required accuracy and precision of trace metal data allowing for environmental conditions to be related to trace metal concentrations in aquatic environments.
This protocol that is presented here details needed materials for sample preparation, sample collection, sample pretreatment including preconcentration, and instrumental analysis. By reducing contamination throughout all phases mentioned above for trace metal analysis, much lower detection limits and thus accuracy can be achieved. The effectiveness of "clean techniques" is further demonstrated using low field blanks and good recoveries for standard reference material. The data quality that can be obtained thus enables the assessment of trace metal distributions and their relationships to environmental parameters.

Special care using "clean techniques" is required to properly collect and process water samples for trace metal studies in aquatic environments. A protocol for sampling, processing, and analytical procedures with the aim of obtaining reliable environmental monitoring data and results with high sensitivity for detailed trace metal studies is presented.

클린 샘플링 및 추적 금속 연구 강 하구 바다의 분석

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and detritus, and excreting particulate and dissolved compounds, they serve as important agents for benthic-pelagic coupling. Accurately measuring the compounds removed and excreted by suspension feeders (such as sponges, ascidians, polychaetes, bivalves) is crucial for the study of their physiology, metabolism, and feeding ecology, and is fundamental to determine the ecological relevance of the nutrient fluxes mediated by these organisms. However, the assessment of the rate by which suspension feeders process particulate and dissolved compounds in nature is restricted by the limitations of the currently available methodologies. Our goal was to develop a simple, reliable, and non-intrusive method that would allow clean and controlled water sampling from a specific point, such as the excurrent aperture of benthic suspension feeders, in situ. Our method allows simultaneous sampling of inhaled and exhaled water of the studied organism by using minute tubes installed on a custom-built manipulator device and carefully positioned inside the exhalant orifice of the sampled organism. Piercing a septum on the collecting vessel with a syringe needle attached to the distal end of each tube allows the external pressure to slowly force the sampled water into the vessel through the sampling tube. The slow and controlled sampling rate allows integrating the inherent patchiness in the water while ensuring contamination free sampling. We provide recommendations for the most suitable filtering devices, collection vessel, and storing procedures for the analyses of different particulate and dissolved compounds. The VacuSIP system offers a reliable method for the quantification of undisturbed suspension feeder metabolism in natural conditions that is cheap and easy to learn and apply to assess the physiology and functional role of filter feeders in different ecosystems.

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

We introduce the VacuSIP, a simple, non-intrusive, and reliable method for clean and accurate point sampling of water. The system was developed and evaluated for the simultaneous collection of the water inhaled and exhaled by benthic suspension feeders in situ, to cleanly measure removal and excretion of particulate and dissolved compounds.

VacuSIP, 개선 INEX 방법에 대한<em&gt; 현장에서</em&gt; 미립자의 측정 및 용존 화합물은 액티브 서스펜션 피더에 의해 처리

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment during manufacturing and transport. Because of their environmental persistence, they are widely distributed in the oceans and on beaches all over the world. They can act as a vector of potentially toxic organic compounds (e.g., polychlorinated biphenyls) and might consequently negatively affect marine organisms. Their possible impacts along the food chain are not yet well understood. In order to assess the hazards associated with the occurrence of plastic pellets in the marine environment, it is necessary to develop methodologies that allow for rapid determination of associated organic contaminant levels. The present protocol describes the different steps required for sampling resin pellets, analyzing adsorbed organochlorine pesticides (OCPs) and identifying the plastic type. The focus is on the extraction of OCPs from plastic pellets by means of a pressurized fluid extractor (PFE) and on the polymer chemical analysis applying Fourier Transform-InfraRed (FT-IR) spectroscopy. The developed methodology focuses on 11 OCPs and related compounds, including dichlorodiphenyltrichloroethane (DDT) and its two main metabolites, lindane and two production isomers, as well as the two biologically active isomers of technical endosulfan. This protocol constitutes a simple and rapid alternative to existing methodology for evaluating the concentration of organic contaminants adsorbed on plastic pieces.

Microplastics act as vector of potentially toxic organic contaminants with unpredictable effects. This protocol describes an alternative methodology for assessing the levels of organochlorine pesticides adsorbed on plastic pellets and identifying the polymer chemical structure. The focus is on pressurized fluid extraction and attenuated total reflectance Fourier transform infrared spectroscopy.

플라스틱 펠렛 및 플라스틱 유형 분석에서 유기 염소 농약의 추출

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those of suspended/sinking particles. Here, we present an all plastic (Polypropylene and Polycarbonate), multi-layer filtration system for collection of suspended particulate matter (SPM) at sea. This ultra-clean sampling device has been designed and developed specifically for trace element studies. Meticulous selection of all non-metallic materials and utilization of an in-line flow-through procedure minimizes any possible metal contamination during sampling. This system has been successfully tested and tweaked for determining trace metals (e.g., Fe, Al, Mn, Cd, Cu, Ni) on particles of varying size in coastal and open ocean waters. Results from the South China Sea at the South East Asia Time-Series (SEATS) station indicate that diurnal variations and spatial distribution of plankton in the euphotic zone can be easily resolved and recognized. Chemical analysis of size-fractionated particles in surface waters of the Taiwan Strait suggests that the larger particles (&#62;153 &#181;m) were mostly biologically derived, while the smaller particles (10 - 63 &#181;m) were mostly composed of inorganic matter. Apart from Cd, the concentrations of metals (Fe, Al, Mn, Cu, Ni) decreased with increasing size.

Plankton and suspended particles play a major role in the biogeochemical cycles in the ocean. Here, we provide an ultra-clean, low stress method for the collection of various sizes of particles and plankton at sea with the capability of handling large volumes of seawater.

크기 분류 한 해양 플랑크톤과 중단된 한 입자를 수집 하기 위해 매우 깨끗 한 다층 기구

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

Sampling, Sorting, and Characterizing Microplastics in Aquatic Environments with High Suspended Sediment Loads and Large Floating Debris

The ubiquitous presence of plastic debris in the ocean is widely recognized by the public, scientific communities, and government agencies. However, only recently have microplastics in freshwater systems, such as rivers and lakes, been quantified. Microplastic sampling at the surface usually consists of deploying drift nets behind either a stationary or moving boat, which limits the sampling to environments with low levels of suspended sediments and floating or submerged debris. Previous studies that employed drift nets to collect microplastic debris typically used nets with &#8805;300 &#181;m mesh size, allowing plastic debris (particles and fibers) below this size to pass through the net and elude quantification. The protocol detailed here enables: 1) sample collection in environments with high suspended loads and floating or submerged debris and 2) the capture and quantification of microplastic particles and fibers &lt;300 &#181;m. Water samples were collected using a peristaltic pump in low-density polyethylene (PE) containers to be stored before filtering and analysis in the lab. Filtration was done with a custom-made microplastic filtration device containing detachable union joints that housed nylon mesh sieves and mixed cellulose ester membrane filters. Mesh sieves and membrane filters were examined with a stereomicroscope to quantify and separate microplastic particulates and fibers. These materials were then examined using a micro-attenuated total reflectance Fourier transform infrared spectrometer (micro ATR-FTIR) to determine microplastic polymer type. Recovery was measured by spiking samples using blue PE particulates and green nylon fibers; percent recovery was determined to be 100% for particulates and 92% for fibers. This protocol will guide similar studies on microplastics in high velocity rivers with high concentrations of sediment. With simple modifications to the peristaltic pump and filtration device, users can collect and analyze various sample volumes and particulate sizes.

Most microplastic research to date has occurred in marine systems where suspended solid levels are relatively low. Focus is now shifting to freshwater systems, which may feature high sediment loads and floating debris. This protocol addresses collecting and analyzing microplastic samples from aquatic environments that contain high suspended solid loads.

샘플링, 정렬, 및 높은 정지 퇴적 부하와 큰 부동 파편 수생 환경에서 Microplastics

The ubiquitous presence of plastic debris in the ocean is widely recognized by the public, scientific communities, and government agencies. However, only ...

Data Collection on Marine Litter Ingestion in Sea Turtles and Thresholds for Good Environmental Status

The following protocol is intended to respond to the requirements set by the European Union&#39;s Marine Strategy Framework Directives (MSFD) for the D10C3 Criteria reported in the Commission Decision (EU), related to the amount of litter ingested by marine animals. Standardized methodologies for extracting litter items ingested from dead sea turtles along with guidelines on data analysis are provided. The protocol starts with the collection of dead sea turtles and classification of samples according to the decomposition status. Turtle necropsy must be performed in authorized centers and the protocol described here explains the best procedure for gastrointestinal (GI) tract isolation. The three parts of the GI (esophagus, stomach, intestine) should be separated, opened lengthways and contents filtered using a 1 mm mesh sieve. The article describes the classification and quantification of ingested litter, classifying GI contents into seven different categories of marine litter and two categories of natural remains. The quantity of ingested litter should be reported as total dry mass (weight in grams, with two decimal places) and abundance (number of items). The protocol proposes two possible scenarios to achieve the Good Environmental Status (GES). First: &#34;There should be less than X% of sea turtles having Y g or more plastic in the GI in samples of 50-100 dead turtles from each sub-region&#34;, where Y is the average weight of plastic ingested and X% is the percentage of sea turtles with more weight (in grams) of plastic than Y. The second one, which considers the food remain versus plastic as a proxy of individual health, is: &#34;There should be less than X% of sea turtles having more weight of plastic (in grams) than food remains in the GI in samples of 50-100 dead turtles from each sub-region&#34;.

The protocol focuses on the collection of sea turtle samples, describing all the steps from the animal recovery and necropsy to the classification and quantification of ingested marine litter. Moreover, the representative results show how to use the collected data to elaborate the possible thresholds for Good Environmental Status.

해양 쓰레기 수집에 대 한 데이터 수집 및 좋은 환경 상태를 위한 바다 거북 및 임계 값

The following protocol is intended to respond to the requirements set by the European Union&#39;s Marine Strategy Framework Directives (MSFD) for the ...

Seawater Sampling and Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses. For today's demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. An A-frame derrick, with a multi-purpose winch and cable system, is used in combination with Niskin or Go-Flo water sampling bottles. Conductivity, Temperature, and Depth (CTD) sensors are also used to sample the underlying water mass. To minimize outgassing, trace gas samples are collected first.  Then, nutrients, water chemistry, and cell counts are determined. Finally, waters are collected for biomass filtration. The set-up and collection time for a single cast is ~1.5 hours at a maximum depth of 215 meters. Therefore, a total of 6 hours is generally needed to complete the collection series described here.

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses.

해수 샘플링 및 수집

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass ...

생물학

Small Volume (1-3L) Filtration of Coastal Seawater Samples

The workflow begins with the collection of coastal marine waters for downstream microbial community, nutrient and trace gas analyses. For today s demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. This video documents small volume (~1 L) filtration of microbial biomass from the water column. The protocol is an extension of the large volume sampling protocol described earlier, with one major difference: here, there is no pre-filtration step, so all size classes of biomass are collected down to the 0.22 &mu;m filter cut-off. Samples collected this way are ideal for nucleic acid analysis. The set-up, filtration, and clean-up steps each take about 20-30 minutes. If using two peristaltic pumps simultaneously, up to 8 samples may be filtered at the same time. To prevent biofilm formation between sampling trips, all filtration equipment must be rinsed with dilute HCl and deionized water and autoclaved immediately after use.

Small Volume 1-3L Filtration of Coastal Seawater Samples

This video documents small volume (~1 L) filtration of microbial biomass from the water column.

연안 해수 샘플을 소량 (1 - 3L)은 여과

The workflow begins with the collection of coastal marine waters for downstream microbial community, nutrient and trace gas analyses. For today s ...

Sampling, Identification and Characterization of Microplastics Release from Polypropylene Baby Feeding Bottle during Daily Use

Microplastics (MPs) are becoming a global concern due to the potential risk to human health. Case studies of plastic products (i.e., plastic single-use cups and kettles) indicate that MP release during daily use can be extremely high. Precisely determining the MP release level is a crucial step to identify and quantify the exposure source and assess/control the corresponding risks stemming from this exposure. Though protocols for measuring MP levels in marine or freshwater has been well developed, the conditions experienced by household plastic products can vary widely. Many plastic products are exposed to frequent high temperatures (up to 100 &#176;C) and are cooled back to room temperature during daily use. It is therefore crucial to develop a sampling protocol that mimics the actual daily-use scenario for each particular product. This study focused on widely used polypropylene-based baby feeding bottles to develop a cost-effective protocol for MP release studies of many plastic products. The protocol developed here enables: 1) prevention of the potential contamination during sampling and detection; 2) realistic implementation of daily-use scenarios and accurate collection of the MPs released from baby feeding bottles based on WHO guidelines; and 3) cost-effective chemical determination and physical topography mapping of MPs released from baby feeding bottles. Based on this protocol, the recovery percentage using standard polystyrene MP (diameter of 2 &#181;m) was 92.4-101.2% while the detected size was around 102.2% of the designed size. The protocol detailed here provides a reliable and cost-effective method for MP sample preparation and detection, which can substantially benefit future studies of MP release from plastic products.

This study detailed a reliable and cost-effective protocol for microplastics collection and detection from the daily use of plastic products.

매일 사용하는 동안 폴리 프로필렌 아기 먹이 병에서 방출 마이크로 플라스틱의 샘플링, 식별 및 특성화

Microplastics (MPs) are becoming a global concern due to the potential risk to human health. Case studies of plastic products (i.e., plastic single-use ...