이 원고의 수치 중 일부는 넉넉한 바트 O. 윌리엄스의 실험실에 의해 제공되었다. 저자는 U54CA143803, CA163124, CA093900, 및 CA143055는 국립 암 연구소 (National Cancer Institute)에 의해 부여 지원됩니다.

이 프로토콜은 충족하고 존스 홉킨스 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회가 설정 한 가이드 라인을 따른다. 1. 마우스 전립선을 마이크로 - 해부 <ol><li> 이산화탄소 질식이나 기관 동물 관리 및 사용 지침서에 따라 다른 방법에 의해 승인 된 마우스를 안락사. </li><li> 네 발 각을 통해 핀을 넣어 해부 보드에 부정사 위치에 마우스를 고정. </li><li> 70 % 에탄올로 복부를 스프레이. </li><li> 집게와 하복부의 피부를 잡고, 피부의 실수로 모든 장기를 절단하지 않도록주의 음경의 개방, 약 1cm의 전방을 복막 가위를 사용합니다. </li><li> 복강을 노출, 하복부, 흉곽에 복부의 최대 양쪽에서 피부와 복막을 버려야. </li><li> 방광 및 비뇨 기관을 식별하고 부드럽게 옆으로 지방과 다른 기관을 이동하여 그들을 노출. </li><li> USING 포셉, 그립 요도 근처 기지에서 정관을하고, 그것을 멀리 눈물. </li><li> 반대 정관으로 반복합니다. </li><li> 동시에 방광과 복부 전립선 (방광의 기초 아래 약 1cm) 아래 요도를 통해 절단 가위를 사용하는 동안주의 깊게, 방광을 그립 집게를 사용하고 당기십시오. 주 : 방광이 인상되기 때문에, 전체 비뇨 기관 (함유 방광, 요도, 모든 전립선 돌출부 및 정낭의 단면)이 함께 제공된다. 약간의 저항이있을 수 있습니다. </li><li> 약 5-10 ml의 포스페이트 완충 식염수 (PBS)를 함유하는 60-100mm 페트리 접시에 비뇨 기관 (UGT)를 놓는다. </li><li> 해부 현미경 프로토콜의 나머지 부분을 수행한다. 이 미세 집게, 각 손에 하나를 사용하십시오. &quot;연필과 같은&quot;는 집게를 잡고 그들을 안정 할 수 있도록 벤치 위에 팔을 휴식. </li><li> 방광이라는 UGT 같은 위치를 미세 핀셋을 사용하여위에 요도 아래로 지적되고 정낭 방광의 양측에 위치된다. </li><li> 그립 하나 집게 조심스럽게와 요도는 전립선 조직을 멀리 찢어하지 않고 다른 집게와 멀리 지방을 빼냅니다. 참고 : 지방이 주변 조직에 &quot;반짝&quot;상대적으로 표시됩니다. </li><li> 지방이 제거되면, 전립선 개의 복부 로브 사이의 결합 조직을 찢고 구분 집게를 사용한다. </li><li> , 복부 로브 중 하나를 제거 팁 근처에 그립에 하나의 복부 로브를 하나 집게를 사용하여 그립에 다른 집게를 사용하려면이 가능한 요도에 가깝게 기지에서 로브. 여전히 로브의 기초를 파지하는 동안 그립에 다른 집게 요도를 사용합니다. 기업, 부드러운 움직임으로 떨어져 요도에서 로브를 당깁니다. 확실히 더 전립선 조직이 요도에 부착 남아합니다. 다음 실험 단계에 따라 적절한 매체에 로브를 놓습니다. <ol><li> 수정하고들 파라핀은-포함하려면충분한 조직 학적 분석을 위해, 10 % 중성 완충 포르말린 (NBF) 8의 로브를 배치합니다. </li><li> 냉동 보존를 들면, 10월 등의 매체를 동결하고 8 절편의 로브를 놓습니다. </li><li> 문화 단일 세포 분리를위한 차가운 PBS의 로브를 놓고 9 유동 세포 계측법. </li></ol></li><li> 다른 복부 로브와 단계를 반복 1.15. </li><li> 확인 정낭에 구멍 않도록주의하면서 조심스럽게 거리 정낭에서 로브를 당겨 집게를 사용하여, 전방 로브 중 하나를 제거하십시오. 로브는 정낭의 독립되면, 단계 1.15에서 복부 로브와 같은 방식으로 제거합니다. </li><li> 다른 전방 로브와 단계를 반복 1.17. </li><li> 지느러미 전립선이 표시되도록를 통해 나머지 비뇨 기관 플립. </li><li> 두 배면 측면 로브 또한 로브와 t 사이의 결합 조직 사이의 결합 조직을 찢어 집게를 사용하여 배면 측면 로브 중 하나를 제거하려면그는 정낭의 영역을 후부. 단계 1.15에서 복부 로브와 유사한 방식으로 로브를 제거합니다. </li><li> 다른 배면 측면 로브와 단계를 반복 1.20. </li></ol> 2. 수술 거세 참고 :이 생존 수술이기 때문에, 무균, 마취 및 통증 관리는이 프로토콜의 윤리적 및 성공적인 완료에 중요하다. 모든 기관 동물 관리 및 사용 지침을 따르십시오. 저체온증을 방지하기 위해 수술 중 이러한 재순환 물 블랭킷 같은 외부 열원을 사용한다. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. 수술에 사용하기 전에 모든 수술 도구를 압력솥. <ol><li> 깨끗한 무균 표면에 적절한 조치 (예를 들면 2 % 흡입 이소 플루 란)를 사용하여 마우스를 마취하고, m 위치부정사 위치에 여러개. 참고 예 케타민 마취 같은 대체 방법들이 또한 사용될 수 있고, 승인 동물 프로토콜에 따라. </li><li> 발가락을 곤란하게하여 마우스의 반사 신경을 확인합니다. 마우스가 반응하지 않는 경우, 다음 단계로 진행합니다. 이 반응 할 경우, 1-3 분 후에 다시 확인합니다. 전기 면도기로 수술 영역을 면도. </li><li> 무균 기관 수의 직원이나 IACUC에서 권장하는 70 % 에탄올 및 요오드 또는 절차의 교류 스크럽을 사용하여 마우스의 복부를 준비합니다. </li><li> 멸균 메스를 사용하여 음경에, 하복부의 중간 선에서 약 1.5 cm 전방을 피부를 통해 1 cm 수직 절개를합니다. </li><li> 주의 모든 장기를 절단하지, 복막을 통해 작은 절개 (&lt;1cm)을 확인합니다. </li><li> 멸균 집게 그립 복막의 절단 가장자리를 사용하여 아래 복강를 참조 할 수 있도록 조심스럽게 들어 올립니다. </li><li> 다른 멸균 집게를 사용하여, 일에 도달전자 방광에 측면 복강 그립 중 하나를 왼쪽 또는 오른쪽 고환 지방 패드. 고환뿐만 아니라 빠져 나올 때까지 복막과 피부의 구멍을 통해 지방 패드를 당깁니다. 이 단계에서 다른 조직이나 장기를 손상하지 않도록주의하십시오. </li><li> 소작 펜을 사용하여 고환을 잡고 지방 패드를 통해 절단. 소작 펜 주와 고환 동맥을 통해 천천히 잘라 : 고환 동맥이 너무 빨리 절단하는 경우가 너무 많은 출혈 일 수 있으며, 마우스를 안락사해야 할 수 있습니다. </li><li> 지방 패드와 동맥이 절단되면, 고환과 지방 패드를 제거합니다. </li><li> 를 반복하여 다른 정소와 2.6-2.9 단계를 반복합니다. 참고 : 고환의 제거를위한 다른 방법은 수술 가위로 용기를 절단 다음에 고환 동맥을 결찰하는 것입니다. </li><li> 복막은 흡수성 봉합사로 폐쇄 봉합. </li><li> 스테이플 피부는 수술 상처 클립을 마감했다. </li><li> 통증을 관리 할 수​​있는 진통제를 관리, 및 장소5 ~ 10 분 동안 따뜻한 케이지에 깨끗한 케이지에서 마우스. 통증이나 출혈의 흔적이 마우스를 모니터합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia.">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li><li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+prostate+cancer.">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238 (2011).</li><li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice:+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee.">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li><li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models.">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li><li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium.">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li><li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland.">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li><li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Wnt/beta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia.">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li><li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells.">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li><li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men--warning:+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males,+respectively.">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer.">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li><li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

전립선 마이크로 해부 엽 특정 실험과 마우스 전립선 분석 (그림 1)을 허용한다. 유전자 조작 마우스 모델에서 표현형은 다른 사람에 보이지 않는 하나의 엽에서 볼 수있다. 또한, 조직 학적 분석을 위해,이 프로토콜은 순수한 전립선 조직의 최대 양 단면에 존재하는 다른 비뇨 기관 조직없이 절편 염색 될 수 있다는 것을 보장한다. 마지막으로, 단일 세포 실험이 프로토콜은 거의 순수한 전립선 세포의 격리를 허용한다. 상피 세포 농축 키트는 더 기질 세포에서 전립선 세포를 정화 할 수 있습니다. 마이크로 해부에 제한은 해부 현미경을 통해 보는 동안 미세 집게를 사용하는 데 필요한 해부 현미경의 사용, 학습 곡선을 포함한다. 대안 적으로, 전립선 조직은 미세 해부 불필요한 만드는 UGT의 일부로 조직학을 위해 절단 될 수있다. 그러나, 전체 UGT를 절편의 단점은 것입니다다른 조직은 깨끗하지 만드는 부분에 존재한다. 또한, 단일 전립선 세포 집단을 생성하기위한 상기 돌출부는 오염을 방지하기 위해 UGT로부터 분리되어야한다. 수술 거세는 많은 전립선 연구소에 대한 근본적인 수술과 전립선 개발 및 질병에 테스토스테론의 영향에 대한 연구에 필수적이다. 이 프로토콜은 (숙련 된 사용자를위한 수술의 일반적인 시간은 약 5 분입니다) 빠르게 순환에서 테스토스테론의 거의 100 % (그림 3)을 제거합니다. 참고로, 쥐에서 테스토스테론 수치는 유의 한 차이가, 마우스 (10) 마우스에서만큼 30 배에 따라 다를 수 있습니다. 거세는이 변화를 제거합니다. 거세 후, 연구진은 전립선 (- 4 그림 3)를 재생하기 위해 다시 테스토스테론을 추가하는 결정할 수 있습니다. 이는 같은 삼투 펌프, 테스토스테론 같은 남성 호르몬의 소스를 주입하는 피하하여 수행 할 수 있습니다펠릿, 분말 또는 테스토스테론 (8)를 포함하는 반투과성 실라 스틱 튜브. 추가 테스토스테론의 양에 따라,이 절차는 순환 (도 3)에서의 테스토스테론 수준 superphysiological 생리을 제공 할 수있다. 이 프로토콜은 또한 전립선 세포 계통 연구 및 세포 생물학 (11)를 막기 위해 사용될 수있다. 또 다른 옵션은 두타 스테 리드 (12) 테스토스테론의 생성을 억제하는 화합물, 생쥐의 처리를 통해 화학적 거세, 안드로겐 결핍 또는 치료이다. 이는 또한 외과 적 거세 거의없는 전립선 암 환자의 일반적인 치료를 모방. 그러나, 수술 거세 거의 모든 테스토스테론의 제거를위한 신뢰할 수있는 영구적 인 방법을 제공한다. 이 부신에도 불구하고, 고환에 비해 훨씬 더 적은 양을 테스토스테론으로 전환시킬 수있다 안드로 스텐 디온 및 데히드 등의 안드로겐 종을 합성하는 것으로 고려하는 것이 중요이 과정은 더 어렵지만 (13). 일부 경우, 부신도 수술을 제거 할 수있다. 전반적으로,이 두 프로토콜은 전립선 질환에 대한 연구의 무수한뿐만 아니라 호르몬 연구에 유용하다. 이러한 프로토콜은 거세, 호르몬 정상, 또는 호르몬 재생 조건에서 전립선 생물학을 분석 할 수있는 안정적이고 일관성있는 방법입니다.

전립선은 미국에서 남성 암의 가장 흔한 사이트입니다. 매년 전립선 암으로 진단됩니다 거의 220,000 남자, 약 27,000 남자는 질병 일에 굴복한다. 남성은 미국 1에서 전립선 암 진단 1 7 일생 위험이 있습니다. 양성 전립선 비대증 (BPH), 전립선의 연령과 관련된 비 암성 확대는 80 이상이 남성의 80 %에 영향을 미치는, 또한 광범위한 조건이다. 이와 같이, 전립선은 많은 연구의 초점이다. 마우스 모델은 3 전립선 질환을 연구하기 위해 널리 사용되어왔다. 전체 마우스 인간 전립선 선 (4)의 우수한 대표하지만, 유사성과 마우스 및 인간 전립선 해부학 생리학 (5) 사이의 차이가있다. 두 종에서 전립선은 요도를 둘러싸고, 방광의 기지에 위치해 있습니다. 인간의 전립선은 단일 보라입니다중앙, 전환, 주변 장치 및 전방 fibromuscular 기질 : 네 개의 구역으로 분할합니다. 전방, 복부 및 배면 측면 : 반대로 마우스 전립선 요도 주위의 상이한 위치에서 세 쌍의 돌출부로 구성된다. 세포 수준에서의 주된 차이점은 인체 내강의 셀 비율은 기저 세포가 1인지 : 1이지만 1 : 생쥐 6 4. 뮤린 기질은 인간에 대해 생쥐에서 다르다 - 근육 층 쥐 전립선 훨씬 얇다 동안 인간은, 더 광범위한 평활근있다. 마우스 전립선의 적절한 식별, 해부, 취급 마우스 전립선 연구에 필수적이다. 호르몬 대폭 인간 및 마우스 모두에서 전립선의 발달 및 항상성에 영향을 미친다. 에스트로겐 전립선 개발 7 역할을 보이는 반면, 전립선 암에서 가장 중요한 호르몬 테스토스테론이다. 테스토스테론은 선의 개발을 위해 필수적이다D 관리. 중 물리적 또는 화학적 거세에 따라, 약 90 성인 전립선 apoptose의 내강 세포의 %, 그리고 선이 줄어 듭니다. 테스토스테론은 거세 조건 하에서 개별적으로 재 도입되는 경우, 전립선 전체 용량 자체를 다시 생성 할 수있다. 테스토스테론은 남성 호르몬 결핍의 치료에 일반적으로 사용되는 치료 전략 이유 전립선 암을 유도하는 것으로 보인다. 그러나 많은 전립선 암은 안드로겐 박탈에 저항하게된다. 또한, 전립선 암의 안드로겐 결핍 치료 요법을받은 남성 거세 및 재생 조건이 사이클을 겪는다. 마우스에서 수술 거세는 남성 호르몬을 재 도입하여 전립선의 호르몬 재생과 함께 거세 저항성 전립선에 테스토스테론 순환의 효과를 연구 할 수있는 중요한 도구입니다. 이 글에서, 우리는 토론하고 locat입니다하기로 적절한 기술을 시연 할 예정이다전자 마이크로 해부 마우스 전립선뿐만 아니라 마우스를 외과 적 거세하기.

<table><tbody><tr><td>Surgical tools</td><td>Roboz</td><td>Various</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT medium</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>Also available from vendors online</td></tr><tr><td>Cautery Pen</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>Silk suture</td><td>AD Surgical</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Wound Clips</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

여섯 전립선 로브는 전립선의 미세 절개를 통해 마우스 (그림 1)에서 제거되었습니다. 전체 비뇨 기관 (UGT)은 모든 전립선 로브 방광, 정낭, 요도 (도 1a)로 구성된다. 정관 요도에 부착하지만, 전립선 미세 해부 불필요하며, 따라서 요도 (도 1b 내지도 1c)를 절단하여 UGT의 제거 전에 분리 될 수있다. 비뇨 생식 기관이 함께 남아 한 번 복부 (그림 1D)에서 제거됩니다. 이 시점에서, 전립선은 UGT 로브 (도 1E)에 접근하기 위해 제거 될 필요가 지방 조직에 덮여 유지. 여섯 개의 돌출부 (복부, 전방 및 배면 측면 쌍) 방광 기지 요도 주변을 알 수있다. 순수 전립선 조직이어서 (도 1F) 상기 프로토콜 다음 제거 될 수있다. 이 로브 할 수있다추가 분석을 위해 적절한 중간에 배치 될 수있다. 거세 테스토스테론의 주요 생산자 고환의 제거이다. 거세되는 전립선 (도 2a)를 회귀 가리 발생까지 테스토스테론 마우스에 존재한다. 테스토스테론의 재 도입을 통해 호르몬 재생이 거세 (그림 2b)을 수행 할 수 있습니다. 우리는 호르몬 재생의 2 사이클 다음에, 거세를 수행하고, 테스토스테론 수준은 ELISA (그림 3)에 의해 마우스 혈청에서 관찰 하였다. 거세 조건 테스토스테론 수준 사실상 사라진다. 대안 적으로, 타목시펜 (선택적 에스트로겐 수용체 조절제)는 호르몬 정상 상태에 큰 차이를 보이지 않는다. 거세 후, 테스토스테론은 테스토스테론 수준을 극적으로 (도 3) 스파이크 유발 마우스에 다시 도입 하였다. 우리는 그 다음 전립선 리터를 마이크로 해부쥐의 유체 이탈 경험과 개별 전방 로브 (그림 4a)로 군데. 우리는 또한 포르말린 고정 파라핀 - 임베디드 및 조직을 절단.도 4b 정상에서 헤 마톡 실린 및 에오신 스테인드 전방 전립선 조직을 보여줍니다 거세 및 조건을 재생. 거세 전립선 로브는 십분 정상적인 전립선의 크기를 대략 축소, 그리고 호르몬의 재생은 원래 크기로 전립선을 복원합니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53984/53984fig1.jpg" /> 그림 1 : 전립선 마이크로 해부 프로토콜의 총 조직학. (a) 쥐 복부에 노출 된 천연 상태에서 비뇨 기관 (UGT). 점선 ()는 전방 전립선 (AP) 및 복부 전립선 (VP 여기에서 볼 수 있습니다) 정낭 (SV), 전립선 로브를 포함하여 UGT의 다양한 부분을 포함 (위치 ​​수, 방광 (B), 및 요도) 블래 노라. 정관 (VD)도 볼 수 있습니다. (b) 정관이 제거되었다. 정관이 제거 된 영​​역에있는 화살표를 가리킨다. (c) 상기 UGT는 복측 전립선 돌출부 아래 요도를 절단하여 복부에서 제거되었다. (d)를 UGT는 PBS에 배치되었으며, 해부 현미경 아래에서 볼 수있다. (마) 지방은 전립선의 여섯 로브의 가시성에 대한 허용하는 UGT에서 제거되었습니다. 화살표는 두 전방 로브 복부 로브 및 배면 측면 로브 가리. (바) 모든 여섯 개인 전립선 로브가 제거되었습니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53984/53984fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/53984/53984fig2.jpg" /> 그림 2 : 팀테스토스테론이 사라질 때 거세 및 호르몬 재생을위한 엘린. 테스토스테론이 거세까지 생리 학적 수준에서 존재 (a)는, 전립선의 회귀가 시작됩니다. 테스토스테론이 재 도입 될 때까지 (b)는 거세는 전립선의 호르몬 재생을 일으키는 원인이 테스토스테론을 제거합니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53984/53984fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/53984/53984fig3.jpg" /> 그림 3 :. 아래 각종 호르몬 조건에서 테스토스테론 ELISA 테스토스테론 수준은 호르몬 정상 처리 거세 및 호르몬 조건을 재생 타목시펜. 재생 × 2는 합성 테스토스테론의 두 번째 라운드의 주입에 의해 다음, 주입 및 합성 테스토스테론의 제거를 의미한다. 오차 막대는 스탠을 나타냅니다dard 편차. 이 그림 5에서 수정되었습니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53984/53984fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/53984/53984fig4.jpg" /> 그림 4 : 거세 및 재생 조건 하에서 전립선 외관, 거세 호르몬 정상 및 호르몬 재생 조건에서 전방 전립선 엽 (가) 총 모양.. 재생 × 2는 합성 테스토스테론의 두 번째 라운드의 주입에 의해 다음, 주입 및 합성 테스토스테론의 제거를 의미한다. (b)는 포르말린 고정, 파라핀 포함 된 전방 전립선 엽 절단과 헤 마톡 실린 및 에오신으로 염색. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53984/53984fig4large.jpg" target="_blank">대형을 보려면 여기를 클릭하십시오</a>이 그림의 R 버전입니다.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration at JoVE.com

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

이 원고는 실험실 쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세에 대한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 또한이 프로토콜에 의해 생성 된 대표적인 결과를 도시한다. 마지막으로, 우리는 장점과 이러한 프로토콜의 사용에 대해 설명합니다.

쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

murine-prostate-micro-dissection-and-surgical-castration

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

45.4K 조회수.  Johns Hopkins University.  이 원고는 실험실 쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세에 대한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 또한이 프로토콜에 의해 생성 된 대표적인 결과를 도시한다. 마지막으로, 우리는 장점과 이러한 프로토콜의 사용에 대해 설명합니다. 

비디오: Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

발광 및 형광 Orthotopic Syngeneic Murine 모델 Androgen 종속 및 거세 내성 전립선 암

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

연구

암 연구학

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) for prostate cancer are hampered by tumor heterogeneity and its complex microevolution dynamics. Traditional prostate cancer mouse models include, amongst others, germline and conditional knockouts, transgenic expression of oncogenes, and xenograft models. Generation of de novo mutations in these models is complex, time-consuming, and costly. In addition, most of traditional models target the majority of the prostate epithelium, whereas human prostate cancer is well known to evolve as an isolated event in only a small subset of cells. Valuable models need to simulate not only prostate cancer initiation, but also progression to advanced disease.
Here we describe a method to target a few cells in the prostate epithelium by transducing cells by viral particles. The delivery of an engineered virus to the murine prostate allows alteration of gene expression in the prostate epithelia. Virus type and quantity will hereby define the number of targeted cells for gene alteration by transducing a few cells for cancer initiation and many cells for gene therapy. Through surgery-based injection in the anterior lobe, distal from the urinary track, the tumor in this model can expand without impairing the urinary function of the animal. Furthermore, by targeting only a subset of prostate epithelial cells the technique enables clonal expansion of the tumor, and therefore mimics human tumor initiation, progression, as well as invasion through the basal membrane.
This novel technique provides a powerful prostate cancer model with improved physiological relevance. Animal suffering is limited, and since no additional breeding is required, overall animal count is reduced. At the same time, analysis of new candidate genes and pathways is accelerated, which in turn is more cost efficient.

This protocol describes a newly established method for virus delivery to the murine prostate. Using either CRISPR/Cas9 technology, gene overexpression, or Cre recombinase delivery, the technique allows orthotopic alteration of gene expression and implements a novel mouse model for prostate cancer.

CRISPR의 바이러스 배달 Murine 전립선 유전자 변경에 대 한 가이드

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Identification, Histological Characterization, and Dissection of Mouse Prostate Lobes for In Vitro 3D Spheroid Culture Models

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate cancer (PCa). Understanding the anatomy and histology of the mouse prostate is important for the efficient use and proper characterization of such animal models. The mouse prostate has four distinct pairs of lobes, each with their own characteristics. This article demonstrates the proper method of dissection and identification of mouse prostate lobes for disease analysis. Post-dissection, the prostate cells can be further cultured in vitro for mechanistic understanding. Since mouse prostate primary cells tend to lose their normal characteristics when cultured in vitro, we outline here a method for isolating the cells and growing them as 3D spheroid cultures, which is effective for preserving the physiological characteristics of the cells. These 3D cultures can be used for analyzing cell morphology and behavior in near-physiological conditions, investigating altered levels and localizations of key proteins and pathways involved in the development and progression of a disease, and looking at responses to drug treatments.

Genetically engineered mice are useful models for investigating prostate cancer mechanisms. Here we present a protocol to identify and dissect prostate lobes from a mouse urogenital system, differentiate them based on histology, and isolate and culture the primary prostate cells in vitro as spheroids for downstream analyses.

식별, 조직학 특성화 및 체 외 3D 회전 타원 체 문화 모델에 대 한 마우스 전립선 돌출부의 해 부

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) are a rigorous method for studying mammalian development and disease. Our laboratory has developed several GEMMs of prostate cancer (PCa) that lack expression of one or multiple tumor suppressor genes using the site-specific Cre-loxP recombinase system and a prostate-specific promoter. In this article, we describe our method for necropsy of these PCa GEMMs, primarily focusing on dissection of mouse prostate tumors. New methods developed over the last decade have facilitated the culture of epithelial-derived cells to model organ systems in vitro in three dimensions. We also detail a 3D cell culture method to generate tumor organoids from mouse PCa GEMMs. Pre-clinical cancer research has been dominated by 2D cell culture and cell line-derived or patient-derived xenograft models. These methods lack tumor microenvironment, a limitation of using these techniques in pre-clinical studies. GEMMs are more physiologically-relevant for understanding tumorigenesis and cancer progression. Tumor organoid culture is an in vitro model system that recapitulates tumor architecture and cell lineage characteristics. In addition, 3D cell culture methods allow for growth of normal cells for comparison to tumor cell cultures, rarely possible using 2D cell culture techniques. In combination, use of GEMMs and 3D cell culture in pre-clinical studies has the potential to improve our understanding of cancer biology.&#160;

We show a method for necropsy and dissection of mouse prostate cancer models, focusing on prostate tumor dissection. A step-by-step protocol for generation of mouse prostate tumor organoids is also presented.

전립선암의 유전자 조작 마우스 모델에서 종양 오르가노이드의 생성

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

유전학

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

인간의 전립선 암 전이의 동소 쥐과 모델

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

의학

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

생체공학

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative disease. The manipulation of sex hormone levels in the murine model system allows for the study of their impact on organs/tissues and within disease progression. Orchiectomy - the surgical removal of the testes - and ovariectomy - the surgical removal of the ovaries - provide a method to deplete the endogenous sex hormones so that the precise hormone levels can be provided through drug or other delivery methods. Here, we provide rapid and minimally invasive methods for both orchiectomy and ovariectomy in the murine model system for the reduction of sex hormones. This protocol details the surgical preparation and excision of the testes through the scrotal sac, and excision of the ovaries via two incisions in the right and left lateral dorsum.

This manuscript describes a consistent way to quickly perform survival rodent orchiectomies and ovariectomies.

성호르몬 생성을 줄이기 위한 쥐 고환 절제술 및 난소 절제술

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

Modeling Prostate Cancer in Genetically-engineered Mouse Models: A CRISPR/Cas9-mediated Localized Gene Editing Technique in Mouse Anterior Prostate Lobe Cells

Source: Riedel, M. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/57525" target="_blank">Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration.</a> J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method for editing specific genes in prostate gland cells using an adenovirus-based delivery system. The approach allows for orthotopic and localized alteration of gene expression utilizing CRISPR technology to develop novel mouse models for prostate cancer.

유전자 조작 마우스 모델의 전립선암 모델링: 마우스 전방 전립선 엽 세포에서 CRISPR/Cas9 매개 국소 유전자 편집 기술

Source: Riedel, M. et al. Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration. J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Prostate Cancer

Animal model studies

Intra-prostatic Injection of Cancer Cells: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Orthotopic Prostate Cancer Mouse Model

Source: Anker, J. F. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/57301" target="_blank">Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we demonstrate the procedure for administering intra-prostatic injection of prostate cancer cells into a mouse model. Orthotopic murine models can be used to study the disease origin and response to treatment therapies in a non-invasive and clinically relevant environment.

암세포의 전립선 내 주입: 정소성 전립선 암 마우스 모델을 확립하기 위한 암세포 전달 기술

Source: Anker, J. F. et al. Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate ...