Ci dedichiamo a stabilire un modello affidabile della sindrome dell'occhio secco. Abbiamo replicato con successo lo stato patologico della secchezza oculare da deficit acquoso rimuovendo ELG e ILG dagli occhi. A causa della posizione anatomica profonda dell'ILG, l'escissione combinata di ELG e ILG è più impegnativa e invasiva.
È anche in grado di causare sanguinamento durante l'operazione, il che mette a dura prova la nostra capacità operativa. Il nostro modello ha indotto con successo un significativo occhio secco con deficit di umore acqueo con danni minimi all'animale e una significativa semplificazione della procedura chirurgica. Il modello murino costruito è molto simile alla sindrome dell'occhio secco grave, come la sindrome di Sjogren e la sindrome di Stevens-Johnson, che fornisce un forte supporto per la ricerca correlata.
Il metodo evita gli effetti dell'iniezione sistematica, affronta la scarsa durata dell'effetto dell'iniezione locale, supera le carenze del modello dell'occhio secco e semplifica il processo sperimentale eliminando la necessità di un ambiente animale dedicato. Per iniziare, posizionare il topo anestetizzato in posizione di decubito laterale ed esporre l'area chirurgica al microscopio operatorio. Usando una pinza dentata, clamp la pelle sul lato destro del viso del topo.
Fai un'incisione nel punto medio della linea, intersecando l'oracolo esterno e la linea mandibolare all'angolo interno dell'occhio. Quindi esporre il tessuto muscolare e rimuovere con cura l'ELG situato sul muscolo. Ora estendi l'incisione cutanea fino all'angolo interno dell'occhio.
Separare bruscamente il muscolo e individuare la ghiandola rosso chiaro sotto il muscolo. Quindi staccare e rimuovere l'ILG. Sutura l'incisione utilizzando suture 5-0 con portaaghi, forbici chirurgiche oftalmiche e pinze.
Applicare l'unguento ofloxacina alla fine dell'operazione per prevenire l'infezione. Dopo aver rimosso l'ELG e l'ILG unilaterali, posizionare i topi in un ambiente con un ciclo ritmico di luce-buio di 12 ore e libero accesso a cibo e acqua. Prendi un filo rosso fenolo ben confezionato per la misurazione delle lacrime.
Dopo aver anestetizzato il topo con carenza acquosa di occhio secco, tirare delicatamente verso il basso la palpebra inferiore dell'occhio da misurare. Posizionare la parte superiore del filo rosso fenolo nei terzi interno ed esterno della palpebra inferiore e avviare prontamente il timer. Trascorso il tempo assegnato, ritrarre con cautela la palpebra inferiore e rimuovere con cautela il filo rosso fenolo verso il basso.
Utilizzare la scala fornita sulla busta esterna del filo rosso fenolo per misurare dalla parte superiore del filo all'intera parte rossa. Utilizzare un cronometro elettronico per registrare con precisione la durata del test. Per preparare le fette di tessuto per la colorazione, prendere i bulbi oculari estratti dal topo soppresso.
Quindi incorporare i bulbi oculari in un composto a temperatura di taglio ottimale e utilizzare un microtomo congelato per ottenere fette di tessuto congelate di cinque o sette micrometri di spessore. Per l'estrazione dell'mRNA corneale, utilizzare forbici e pinze per tagliare il bulbo oculare dal polo posteriore al microscopio. Separare la lente e pulire la sclera e l'iride in eccesso, ma lasciare la sclera bianca da 0,5 millimetri e l'intera cornea.
Dopo un periodo di due settimane dopo la resezione della ghiandola lacrimale, la secrezione lacrimale nei topi con occhio secco è notevolmente diminuita rispetto al gruppo normale. Metaplasia squamosa e accumulo di cellule infiammatorie sono state osservate nell'epitelio corneale e nello strato stromale del gruppo dell'occhio secco. L'espressione della cheratina 12 era significativamente più bassa nelle cellule epiteliali corneali del gruppo dell'occhio secco rispetto al gruppo normale.
L'espressione di Pax6 era significativamente ridotta nelle cellule epiteliali corneali del gruppo dell'occhio secco rispetto al gruppo normale. L'espressione di Sprr1b, un marcatore di cellule epiteliali corneali anormalmente differenziate, era significativamente più alta nel gruppo occhio secco rispetto al gruppo normale.
