Un metodo visivo sensibile per la rilevazione di batteri che producono idrogeno solforato

I batteri che producono idrogeno solforato possono utilizzare aminoacidi e proteine contenenti zolfo per produrre idrogeno solforato. Qui, abbiamo stabilito un metodo sensibile e semplice per rilevare l'idrogeno solforato nei batteri. Questo metodo è una versione modificata della precipitazione del solfuro di bismuto che utilizzava piastre di microtitolazione trasparenti a 96 pozzetti.

La coltura batterica è stata combinata con una soluzione di bismuto contenente L-cisteina e coltivata per 20 minuti, al termine della quale è stato osservato un precipitato nero. A dimostrare le procedure sarà Wei Zhu, un assistente di ricerca del nostro laboratorio. Inizia trasferendo le colonie batteriche da una piastra di agar Luria-Bertani o LB a 100 millilitri di mezzo LB e coltiva a 37 gradi Celsius per 12-16 ore fino a quando la concentrazione batterica è di circa 1 miliardo di cellule per millilitro.

Trasferire una colonia batterica di Fusobacterium nucleatum e Proteus vulgaris dal brodo di soia Trypticase o dalle piastre di agar TSB a 100 millilitri di terreno TSB e coltivare a 37 gradi Celsius anaerobicamente per 24 ore fino a quando la concentrazione batterica è di circa 1 miliardo di cellule per millilitro. Mescolare 100 microlitri di coltura batterica con 100 microlitri di soluzione di bismuto appena preparata nelle piastre di microtitolazione a 96 pozzetti e coltivare per 20 minuti a 37 gradi Celsius. Per ogni ceppo batterico, eseguire l'analisi in triplice copia.

Dopo 20 minuti, controlla il cambio di colore. Se il colore della soluzione cambia da giallo chiaro a nero, ciò indica che i batteri sono in grado di produrre idrogeno solforato o H2S. Ripeti questa misurazione tre volte.

Determinare la sensibilità del metodo utilizzando diverse concentrazioni di idrosolfuro di sodio miscelato con soluzione di solfuro di bismuto. Infine, determinare la presenza di ioni bisolfuro e solfuro osservando la formazione di un precipitato di solfuro di bismuto nero. Assegna un punteggio al colore dei pozzetti utilizzando una scala visiva da nessuna produzione di colori alla produzione di colore nero più scuro.

Le prestazioni del test dell'idrogeno solforato sono state studiate utilizzando colture pure di ceppi batterici selezionati. I risultati hanno indicato che Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Proteus vulgaris possono produrre idrogeno solforato con precipitato di solfuro di bismuto nero. Mentre Salmonella paratyphi A, Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila, e Klebsiella pneumoniae non hanno mostrato alcun precipitato nero.

Il vantaggio principale di questo metodo è che è facile da replicare e non richiede attrezzature specializzate.