Creazione in Situ Circuito Chiuso Perfusione di Organi Addominali Inferiori e Arti Hind in Topi

Questo protocollo può essere utilizzato per rispondere a domande sul parto dei farmaci e sulle interazioni immunitarie all'interno degli organi inclusi nel nostro circuito. Questa tecnica consente la perfusione di organi che non sono possibili perfondere con i metodi ex-vivo tradizionali, evitando al contempo i principali organi di clearance. Prima di iniziare l'intervento chirurgico, impostare un bagno d'acqua circolante e tutti i componenti con giacca ad acqua, a 37 gradi Celsius.

Verificare che il tubo sia pulito e utilizzare una trappola a bolle all'interno di una camera umida come serbatoio perfusato per limitare il volume perfusato. Per eseguire la procedura di cateterizzazione, confermare la mancanza di risposta al riflesso del pedale, in una lampadina anestetizzata maschile di otto-10 settimane vedere il mouse. E posizionare il mouse in posizione supina su una tavola stirolo, con la testa a ore sei.

Immobilizzare gli arti degli animali con del nastro adesivo e pulire l'addome con alcol isopropile. Fai un'incisione a forma di T nell'addome, usando l'elettro coagulazione per fermare qualsiasi sanguinamento intorno al bordo dell'incisione. Spingere lo stomaco, il giunone e il colon sul lato destro dell'addome, per rivelare l'aorta addominale, la vena cava e le comuni arterie e vene iliac e iliolumbar.

Al microscopio a dissezione, localizzare e ligare le arterie e le vene ovarica e iliombare con suture di seta 4-O. Innesta due suture di seta 4-O sotto l'aorta addominale e la vena cava inferiore di circa un centimetro sopra l'arteria e la vena iliaca, a un millimetro di distanza l'una dall'altra. Quindi fai un crono sciolto nella sutura più vicina ai vasi iliac.

Utilizzare un portaaghi per allineare e allungare orizzontalmente sia la vena cava inferiore che l'aorta addominale. E, tenendo i vasi allungati, usa un catetere IV a scudo alato calibro 24 per forare l'aorta addominale. Non appena l'ago penetra di circa un millimetro nel recipiente, deprimere il pulsante per ritrarre il nucleo dell'ago e inserire il catetere di circa cinque millimetri nel vaso.

Inserire un catetere di cinque millimetri nella vena cava inferiore, allo stesso modo. E legare entrambe le suture intorno ai vasi cateterizzati. Quindi applicare la colla istantanea per immobilizzare i cateteri all'eretore girare a e sostituire gli organi addominali.

Per impostare il sistema di perfusione, posizionare il mouse su un cuscinetto di silicio nella camera umida con giacca ad acqua e immobilizzare le ali del catetere sul pad con aghi calibro 19. Riempire l'ingresso del catetere arterioso, con tampone di perfusione preri warmed. Utilizzare pinze emostatiche e un connettore avvitato per collegare l'ingresso del catetere al tubo e immobilizzare i tubi perfusione di ingresso con nastro adesivo.

Regolare la portata peristaltica a 0,6 millilitri al minuto e mantenere aperto il deflusso di perfusione per cinque-10 minuti, per lavare il sangue attraverso il catetere venoso. Alcuni coaguli saranno presenti nel catetere di uscita, sciacquare i coaguli con tampone perfusato e utilizzare una vite sul connettore per attaccare all'estremità del catetere venoso al tubo di uscita per chiudere il circuito. Quindi coprire la camera umida con un coperchio pre-riscaldato per un massimo di due ore di perfusione, controllando periodicamente il livello di perfusato.

Qui vengono mostrate immagini confocali dopo perfusione con soluzione di suoneria contenente Hoechst 33342 e Lectin DyLight-649. Il muscolo, il midollo osseo, i teste, la vescica, la prostata e la pelle del piede dimostrano tipicamente un'efficiente colorazione nucleare e vascolare. La colorazione di ematossilina ed eosina di questi tessuti dopo tre ore di normale perfusione termica, rivela un efficace lavaggio degli organi, senza lesioni tissutali apparenti.

Questo modello può essere utilizzato per comprendere i percorsi di assorbimento dei farmaci, nell'ambiente fisiologico irrilevante. Ad esempio, per comprendere il ruolo dei componenti del siero nell'accumulo di farmaci. Stiamo usando il sistema, per capire il meccanismo dell'accumulo di liposomio nella pelle.