إنشاء الدائرة المغلقة في الموقع perfusion من أعضاء البطن السفلي وأطراف هند في الفئران

يمكن استخدام هذا البروتوكول للإجابة على أسئلة حول توصيل الأدوية والتفاعلات المناعية داخل الأعضاء المدرجة في دائرتنا. هذه التقنية تسمح لقذف الأعضاء التي لا يمكن أن تضخ بالطرق التقليدية السابقين في الجسم الحي، مع تجنب أجهزة إزالة الرئيسية. قبل البدء في الجراحة، تعيين حمام المياه المتداولة وجميع المكونات ذات السترات المائية، إلى 37 درجة مئوية.

تأكد من تنظيف الأنبوب، واستخدم مصيدة فقاعة داخل غرفة رطبة كخزان مُضجر للحد من حجم الزّمن. لتنفيذ إجراء القسطرة، تأكيد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس، في ثمانية إلى 10 أسبوع من العمر لمبة تخدير الذكور انظر الماوس. ووضع الفأر في موقف سوبين على لوحة الستايروفوم، مع الرأس في الساعة السادسة.

شل حركة الحيوانات أطرافها مع الشريط، ومسح البطن مع الكحول ايزوبروبيل. إجراء شق على شكل حرف T في البطن، باستخدام التخثر الكهربائي لوقف أي نزيف حول حافة الشق. دفع المعدة، jejunum والقولون إلى الجانب الأيمن من البطن، للكشف عن الشريان الأورطي البطني، الوريدي كافا وشرايين الوريدي والأوليومبار المشتركة.

تحت مجهر تشريح، وتحديد موقع وligate الشرايين والأوردة المبيض والأليوlumbar مع خياطة الحرير 4-O. حلقة اثنين 4-O خياطة الحرير تحت الشريان الأورطي البطني وسفين الكافا السفلية حوالي سنتيمتر واحد فوق الشريان الحرقفي والوريد، ملليمتر واحد على حدة. ثم جعل إيماءة فضفاضة في خياطة الأقرب إلى الأوعية الحرقفية.

استخدام حامل إبرة لمحاذاة أفقيا وتمتد كل من الوريد السفلي cava والأبهر أورطيا البطن. و، والحفاظ على الأوعية امتدت، واستخدام 24 قياس مجنحة درع الرابع القسطرة لثقب الشريان الأورطي البطن. بمجرد أن تخترق الإبرة حوالي ملليمتر واحد في الوعاء ، اِكِبِس الزر لسحب قلب الإبرة ، وأدخل القسطرة حوالي خمسة ملليمترات في الوعاء.

أدخل قسطرة خمسة ملليمترات في الوريد السفلي الكافا، بنفس الطريقة. وربط كل من الغرز حول الأوعية القسطرة. ثم تطبيق الغراء الفورية لشل القسطرة إلى منتصب تدور، واستبدال أعضاء البطن.

لإقامة نظام التسريب، ضع الماوس على وسادة سيليكون في غرفة رطبة ذات سترة ماء، وشلّل أجنحة القسطرة إلى الوسادة بإبر قياس 19. ملء مدخل القسطرة الشريانية، مع العازلة التسخن قبل الانفعال. استخدام ملقط hemostatic، وموصل المسمار على إرفاق مدخل القسطرة إلى الأنابيب، وشل أنابيب مدخل الضخ مع الشريط.

ضبط معدل التدفق ال peristaltic إلى 0.6 ملليلتر في الدقيقة الواحدة، والحفاظ على تدفق الضخ مفتوحة لمدة خمس إلى 10 دقائق، لغسل الدم من خلال القسطرة الوريدية. وسوف تكون بعض الجلطات موجودة في القسطرة منفذ، طرد الجلطات مع المخزن المؤقت perfusate، واستخدام المسمار على موصل لإرفاق إلى نهاية القسطرة الوريدية إلى أنابيب منفذ لإغلاق الدائرة. ثم تغطية غرفة رطبة مع غطاء ما قبل الدافئة لمدة تصل إلى ساعتين من الضخ، والتحقق دوريا على مستوى perfusate.

هنا، يتم عرض الصور confocal بعد التسريب مع حل الرنين التي تحتوي على Hoechst 33342 و DyLight-649 الليكتان. العضلات, نخاع العظام, الخصيات, المثانة, البروستاتا وجلة القدم عادة ما يدل على وجود تلطيخ فعال النووية والأوعية الدموية. Hematoxylin وeosin تلطيخ هذه الأنسجة بعد ثلاث ساعات من القذف الحراري العادي ، يكشف عن تدفق ناجح للأعضاء ، مع عدم وجود إصابة واضحة في الأنسجة.

يمكن استخدام هذا النموذج لفهم مسارات امتصاص الدواء ، في البيئة الفسيولوجية غير ذات الصلة. على سبيل المثال ، لفهم دور مكونات المصل في تراكم المخدرات. نحن نستخدم النظام، لفهم آلية تراكم الليبوسومات في الجلد.