Prior work with regard to susceptibility testing of dalbavancin has been valuable in development of a standardized methods and acknowledgement for this work is given to JMI Laboratories, Robert Rennie and Beth Goldstein.

Nota: fare riferimento ai documenti CLSI M7-A10 e M100-S25 e / o ISO / FDIS 20776-1 per tutti i dettagli del metodo di riferimento microdiluizione in brodo di sensibilità agli antibiotici 2, 3, 4 I metodi di riferimento consentono di opzioni in alcuni dei. specifiche procedure per la preparazione inoculo e pannello MIC di produzione per ottenere lo stesso risultato finale. Il metodo qui descritto si riferisce ad un agente antimicrobico, dalbavancina, e alcuni dei passi rappresentano uno dei diversi modi potenzialmente il metodo di riferimento può essere fatto. Le opportune precauzioni di sicurezza (in coerenza con livello di biosicurezza 2) dovrebbero essere utilizzati 10. Il pannello formato MIC utilizzato ai fini di questa pubblicazione viene proiettato in Tabella 1. 1. Conservare Dalbavancina Polvere <ol><li> Al ricevimento di diagnostica grado dalbavancina in polvere, conservare a -20 ° C in un ambiente essiccato in un congelatore non sbrinamento. Prima dell&#39;uso, la polvere deve equilibrare araggiungere RT prima dell&#39;apertura. </li></ol> 2. Preparare MIC del pannello diluizioni <ol><li> Preparare una soluzione madre non superiore a 1.600 mg / ml di dalbavancina in ordinata (puro) DMSO in tubi di vetro o di plastica sterili, e utilizzare lo stesso giorno di preparazione o conservare a -20 a -60 ° C o al di sotto per un uso futuro in un congelatore non sbrinamento. Prendere in considerazione la potenza di dalbavancina quanto previsto sulla documentazione ricevuta con la polvere, quando si pesa la polvere (vedi equazione 1 per esempio 800 mg / ml di brodo di preparazione). </li><li> Diluire la diluizione azione simile allo schema come mostrato nella colonna 1 (&quot;Sorgente concentrazione&quot;) nella tabella 2 con DMSO pulito in tubi di vetro o di plastica sterili. Utilizzare una pipetta per la misurazione di diluente e un altro pipetta per aggiungere la dalbavancina azione iniziale per il primo tubo. Per ogni successiva concentrazione dalbavancina magazzino usare una nuova pipetta. </li><li> Preparare 100X finale concent pannello MICdiluizioni razione (concentrazioni intermedie) con DMSO pulito. Come mostrato nelle colonne 2-4 della tabella 2, unire volumi appropriati di sorgente e DMSO per ottenere concentrazione intermedia desiderato (volumi da utilizzare dipenderà dal numero di pannelli MIC da effettuare). </li><li> Preparare 0.004% P80: Preparare una soluzione fresca di lavoro stock del 2% P80 con l&#39;aggiunta di 0,1 ml a 4,9 ml P80 dH 2 O. Sterilizzare passando attraverso un filtro e uso soluzione 0,22 micron nello stesso giorno di preparazione. Preparare 0,004% P80 diluente facendo una diluizione 1: 500 del 2% P80 (ad esempio, 0,3 ml di 2% P80 a 149,7 ml di CAMHB). </li><li> Ulteriori diluire le concentrazioni intermedie preparata al punto 2.2 1: 100 in catione regolato Mueller Hinton Broth (CAMHB) supplementato con 0,004% (v / v) polisorbato-80 (-80 P) P-80 e / o LHB (per streptococchi) aggiunto a doppia concentrazione finale per aggiunta di inoculo (passo 4.3) si tradurrà in una diluizione 1: 2. Vedere colonne 6 e 7 nella tabella 2 </strong&gt;. </li></ol> 3. Preparare Pannelli MIC <ol><li> Dispensare 50 ml di ciascuna soluzione dalbavancina preparata al punto 2.3 in appositi pozzi del pannello MIC e includere i supporti in un solo bene (controllo della crescita bene). Una pipetta multicanale con punte sterili può essere utilizzata in questa fase. </li><li> Utilizzare i pannelli immediatamente o sigillare con film plastico, posto in sacchetti di plastica e mettere subito in un congelatore non sbrinamento a ≤-20 ° C (preferibilmente a ≤-60 ° C) fino al momento dell&#39;uso. Se si utilizzano i pannelli congelati, rimuovere sigilli e posizionare i pannelli individuali sul banco di laboratorio per 15-30 minuti (fino al contenuto dei pozzetti siano scongelati) prima di procedere alla inoculazione pannello. </li></ol> 4. Inoculare Pannelli MIC, eseguire la purezza e l&#39;installazione Colony Conte <ol><li> Selezionare alcune colonie ben isolate da un 18-24 ore agar sangue o altra piastra agar non selettivo. Toccare la parte superiore di ogni colonia con un&#39;ansa sterile o tampone e trasferimento a 1-5 ml CAMHB o sAline fino torbidità è equivalente a uno standard McFarland 0,5. Valutare torbidità per confronto visivo al 0,5 McFarland o con un dispositivo fotometrico. </li><li> Entro 15-30 minuti dalla preparazione, diluire l&#39;inoculo 1: 100 in CAMHB (100 ml in 10 ml CAMHB). Per la maggior parte dei batteri testati contro dalbavancina, ad eccezione di S. pneumoniae, questa diluizione fornirà una concentrazione finale di ben 5 x 10 5 CFU / ml (intervallo accettabile è 2-8 x 10 5 CFU / ml). Per S. pneumoniae, concentrazione batterica basata sul confronto di torbidità a 0,5 McFarland è tipicamente molto meno, quindi, diluire l&#39;inoculo 1:25 (400 ml in 10 ml CAMHB + 10% + LHB). </li><li> Entro 15 minuti dopo la preparazione dell&#39;inoculo, trasferire 50 ml di inoculo finale in ciascun pozzetto (ad eccezione del controllo di sterilità e) del pannello MIC preparato al punto 3. pipetta multicanale con punte sterili può essere utilizzata in questa fase. </li><li> Eseguire un controllo di purezzatrasferendo e diffondendo un&#39;aliquota 1-10 microlitri dal controllo della crescita positivo anche utilizzando un&#39;ansa sterile per un agar non selettivo (per esempio, TSA con il 5% di sangue di montone). </li><li> Configurazione conteggio delle colonie prelevando 10 microlitri dal controllo della crescita e con un singolo canale pipetta e punta sterile e trasferimento a 10 ml di soluzione salina (1: 1.000 diluizione). Mescolare e trasferire 100 ul con un singolo canale pipetta e punta sterile per un mezzo adatto non selettivo agar (ad esempio, TSA con il 5% di sangue di montone) e si sviluppa su tutta la superficie agar con un&#39;ansa sterile, ripetendo due volte in diverse direzioni per assicurare una distribuzione uniforme del inoculo (diluizione 1:10). </li></ol> 5. Pannelli Incubare MIC, Colonia di Conte e piastre Purezza <ol><li> Sigillare ogni pannello MIC o una pila di non più di 4 pannelli in un sacchetto di plastica, con nastro di plastica o con un coperchio di plastica aderente prima incubazione. In alternativa, inserire pannello MIC vuoto sul top di pila di non più di 4 pannelli MIC, mettere un tovagliolo di carta umida in un contenitore di plastica, pannelli luogo MIC nel contenitore di plastica e nei pressi del contenitore in modo sicuro con coperchio. </li><li> Incubare pannelli MIC in un incubatore ambiente a 35 ° C ± 2 ° C per 16-20 ore (stafilococchi ed enterococchi) e 20-24 ore (streptococchi) entro 30 min di inoculazione. Incubare il conteggio delle colonie e le piastre di purezza nelle stesse condizioni, tranne streptococchi incubare in un incubatore CO 2 al 5%. </li></ol> 6. Leggere il MIC e Colonia Conte Piatti; Controllare Purezza Piastra <ol><li> Leggere il MIC come concentrazione minima che inibisce completamente la crescita batterica nei pozzetti rilevate tramite occhio nudo. </li><li> Contare le colonie sulla piastra conta delle colonie. Moltiplicare ogni colonia fattore di diluizione (1: 10.000) (ad esempio, 50 colonie è equivalente a 5 x 10 5 CFU / ml). Un intervallo accettabile è 20-80 colonie (2-8 x 10 5 CFU / ml) e viene utilizzato come approguida ximate. </li><li> Controllare piatto purezza. Se tutte le colonie sono simili alle colonie utilizzati nel passaggio 4.1, quindi l&#39;inoculo può essere considerato puro. Se ci sono altre colonie presenti, allora esiste la possibilità di un contaminante di essere presente nel pannello MIC e il test deve essere ripetuto. </li></ol> 7. controllo di qualità Risultati. <ol><li> Fare riferimento alla Tabella 3 per i range attesi di ceppi di controllo qualità CLSI. Riportare i risultati di prova solo se isolati di risultati MIC dalbavancina per organismo di controllo della qualità (s) sono all&#39;interno del range atteso. </li><li> Se si ottiene una MIC di ≥0.25 ug / ml per ogni S. clinica aureus isolare, ripetere il test dalbavancina MIC e / o inviare ad un laboratorio di riferimento per la verifica. </li></ol>

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	<li>Boucher, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Once-weekly+dalbavancin+versus+daily+conventional+therapy+for+skin+infection.">Once-weekly dalbavancin versus daily conventional therapy for skin infection.</a> The New England journal of medicine. 370, 2169-2179 (2014).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> M07-A10. Methods for Dilution Antimicrobial Tests for Bacteria that Grow Aerobically.: Approved Standard. , (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> M100-S25. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-Fifth Informational Supplement. , (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+laboratory+testing+and+in+vitro+diagnostic+test+systems+--+Susceptibility+testing+of+infectious+agents+and+evaluation+of+performance+of+antimicrobial+susceptibility+test+devices+--+Part+1:+Reference+method+for+testing+the+in+vitro+activity+of+antimicrobial+agents+against+rapidly+growing+aerobic+bacteria+involved+in+infectious+diseases.">Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems -- Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices -- Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases.</a> ISO/FDIS. 20776-1, (2006).</li><li>Jones, R. N., Farrell, D. J., Flamm, R. K., Sader, H. S., Dunne, M. W., Mendes, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surrogate+analysis+of+vancomycin+to+predict+susceptible+categorization+of+dalbavancin.">Surrogate analysis of vancomycin to predict susceptible categorization of dalbavancin.</a> Diagn Microbiol Infect Dis. , (2015).</li><li>Turnidge, J., Paterson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Setting+and+revising+antibacterial+susceptibility+breakpoints.">Setting and revising antibacterial susceptibility breakpoints.</a> Clinical microbiology reviews. 20, 391-408 (2007).</li><li>Rennie, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+broth+microdilution+antimicrobial+susceptibility+test+results+for+dalbavancin,+a+new+glycopeptide+agent.">Factors influencing broth microdilution antimicrobial susceptibility test results for dalbavancin, a new glycopeptide agent.</a> Journal of clinical microbiology. 45, 3151-3154 (2007).</li><li>Arhin, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+polysorbate+80+on+oritavancin+binding+to+plastic+surfaces:+implications+for+susceptibility+testing.">Effect of polysorbate 80 on oritavancin binding to plastic surfaces: implications for susceptibility testing.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 52, 1597-1603 (2008).</li><li>Farrell, D. J., Mendes, R. E., Rhomberg, P. R., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+reference+broth+microdilution+method+for+testing+telavancin:+effect+on+MIC+results+and+correlation+with+other+testing+methodologies.">Revised reference broth microdilution method for testing telavancin: effect on MIC results and correlation with other testing methodologies.</a> Antimicrobial agents and chemotherapy. 58, 5547-5551 (2014).</li><li>Ribbon Panel, B. l. u. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+Safe+Work+Practices+in+Human+and+Animal+Medical+Diagnostic+Laboratories.">Guidelines for Safe Work Practices in Human and Animal Medical Diagnostic Laboratories.</a> MMWR Supplements. 61 (01), 1-101 (2012).</li><li>Anderegg, T. R., Biedenbach, D. J., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+quality+control+evaluations+for+susceptibility+testing+of+Dalbavancin+(BI397),+an+investigational+glycopeptide+with+potent+gram-positive+activity.">Initial quality control evaluations for susceptibility testing of Dalbavancin (BI397), an investigational glycopeptide with potent gram-positive activity.</a> Journal of clinical microbiology. 41, 2795-2796 (2003).</li><li>Koeth, L. M., Windau, A. R., Goldstein, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Broth+Microdilution+and+Agar+Dilution+Dalbavancin+and+Vancomycin+MIC+Results+for+42+Aerobic+Gram-positive+Bacteria.+Poster+132.">Comparison of Broth Microdilution and Agar Dilution Dalbavancin and Vancomycin MIC Results for 42 Aerobic Gram-positive Bacteria. Poster 132.</a> ASM. , (2012).</li><li>Fritsche, T. R., Rennie, R. P., Goldstein, B. P., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+dalbavancin+MIC+values+determined+by+Etest+(AB+BIODISK)+and+reference+dilution+methods+using+gram-positive+organisms.">Comparison of dalbavancin MIC values determined by Etest (AB BIODISK) and reference dilution methods using gram-positive organisms.</a> Journal of clinical microbiology. 44, 2988-2990 (2006).</li><li>Mushtaq, S., Warner, M., Johnson, A. P., Livermore, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+dalbavancin+against+staphylococci+and+streptococci,+assessed+by+BSAC+and+NCCLS+agar+dilution+methods.">Activity of dalbavancin against staphylococci and streptococci, assessed by BSAC and NCCLS agar dilution methods.</a> The Journal of antimicrobial chemotherapy. 54, 617-620 (2004).</li><li>Jones, R. N., Flamm, R. K., Sader, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+of+dalbavancin+potency+and+spectrum+in+the+United+States+(2012).">Surveillance of dalbavancin potency and spectrum in the United States (2012).</a> Diagnostic microbiology and infectious disease. 76, 122-123 (2013).</li></ol>

Sandra McCurdy è un dipendente di Durata Therapeutics; Specialisti del laboratorio, Inc., datore di lavoro di Laura Koeth e Jeanna Fisher, è stata incaricata da Durata Therapeutics per preparare il manoscritto. Spese di pubblicazione per questo articolo sono stati versati dagli specialisti del laboratorio, Inc.

I seguenti dettagli di metodo sono presentati per ulteriori considerazioni durante la preparazione per i test dalbavancina MIC. Il disegno del pannello MIC dipenderà dal numero di agenti antimicrobici da testare (es., Da solo o più agenti dalbavancina) e le specie di batteri da testare. Le concentrazioni Dalbavancina dovrebbero comprendere i punti di interruzione interpretative per tutte le specie batteriche da testare e l&#39;intera gamma di diluizioni previste per almeno un ceppo di controllo di qualità. La serie di diluizioni antimicrobico può essere organizzata in righe o colonne a seconda del numero di agenti antimicrobici e / o isolati / piastra e metodo di inoculazione. Il volume di dalbavancina in polvere e il brodo deve essere calcolata per assicurare che quantità ottimali vengono prodotti e rifiuti è minima. Per l&#39;esempio utilizzato in questa pubblicazione, volumi si basano sui preparazione di due pannelli MIC. Cation regolato Mueller Hinton brodo deve essere preparata e sterilizzato in autoclave secondo uomole istruzioni e la sterilità dei mezzi di comunicazione di produttori di realizza- verificati. MIC pannelli possono essere realizzati ed utilizzati sullo stesso giorno di preparazione oppure possono essere testati con microrganismi di controllo di qualità e pannelli convalidati conservati congelati per un uso futuro. È importante utilizzare tecniche sterili durante tutta la procedura. Non ci sono criteri rigorosi per la verifica della concentrazione di inoculo con conta delle colonie. Conta delle colonie possono essere controllati inizialmente per ciascuna specie testate e / o periodicamente per convalidare il passo diluizione effettuata al punto 4.2. È importante che la validità dello standard 0,5 McFarland viene anche controllato regolarmente con E. coli ATCC 25922 utilizzando una procedura analoga al punto 4.5. Se i risultati non sono equivalenti a 1-2 x 10 8 UFC / ml, un nuovo standard McFarland 0,5 dovrebbe essere ottenuto. Se i conteggi delle colonie dai pozzi MIC sono al di fuori del range accettabile (2-8 x 10 5 CFU / ml consente e MIC per l&#39;isolato clinica (s) variano da the atteso distribuzione normale (ad es. 0,03-0,12 ug / ml per S. aureus) e / o risultati MIC per isolare il controllo della qualità (s) sono al di fuori del range attesi, test di convalida è necessario e metodo di modifica può essere giustificata. Si suggerisce che una convalidato 0.5 standard di McFarland viene utilizzato per ripetere il conteggio delle colonie (s) e se i risultati sono ancora una volta al di fuori dei risultati attesi, la diluizione inoculo eseguito nella fase 4.2 deve essere regolato di conseguenza e il MIC ripetuto. Si noti che un controllo della purezza è necessaria anche se si esegue un conteggio delle colonie perché la procedura conteggio delle colonie utilizza un volume diluito che non necessariamente rilevare concentrazioni minori di organismi contaminanti. Per un test MIC può essere considerata valida, la crescita accettabile deve avvenire nel controllo della crescita bene. Per la maggior parte dei batteri che saranno testati contro dalbavancina (es., Stafilococchi, streptococchi ed enterococchi, la crescita sarà visto come un pulsante (tipicamente&gt; 2 mm) e meno frequently, la crescita può apparire come torbidità nel pozzo. A differenza di alcuni agenti antimicrobici che possono presentare effetti di trascinamento come aumentano le concentrazioni, gli endpoint dalbavancina sono in genere ben definiti. Ci sono vari dispositivi di visualizzazione allo scopo di favorire la lettura microdiluizione test, che possono essere utilizzati per leggere Dalbavancina piastre contenenti fino a quando non vi è alcun compromesso nella capacità di discernere crescita nei pozzetti. Le fasi critiche all&#39;interno del protocollo riguardano le parti del procedimento che sono legati alla solubilità di dalbavancina e l&#39;aggiunta di P80. È importante che la concentrazione massima di dalbavancina utilizzato è non superiore a 1,600 g / ml, che DMSO viene utilizzato come solvente e che concentrazioni intermedie sono preparati in DMSO prima di effettuare le diluizioni brodo in modo che la concentrazione finale di DMSO in MIC Pannello pozzi non è maggiore di 1%. DMSO è igroscopico e quindi, l&#39;uso di bottiglie precedenti di DMSO era un consideration per quanto riguarda la dalbavancina solubilità. Tuttavia, mentre un piccolo studio BMD con ceppi di controllo di qualità ha dimostrato che questo non essere una variabile importante (vedi la sezione risultati), è buona norma utilizzare bottiglie nuovi o di recente apertura di DMSO. E &#39;anche importante che P80 viene aggiunto al brodo nella fase finale di preparazione di diluizione del farmaco ed è ad una concentrazione finale di 0,002% in MIC bene. La procedura BMD qui incluso utilizza preparazione di pannelli MIC utilizzando 50 microlitri / pozzetto a dalbavancina e P-80 concentrazioni due volte la concentrazione finale dell&#39;inoculo con aggiunta di 50 microlitri / pozzetto in modo che il volume finale / pozzetto è di 100 microlitri. Questo metodo consente un formato del pannello MIC da produrre per la sperimentazione di entrambi S. aureus e S. pneumoniae perché il sangue lisato di cavallo può essere aggiunto al inoculo. Metodi alternativi per la preparazione di pannelli MIC utilizzando 100 microlitri / pozzetto con aggiunta di fino a 10 microlitri / pozzetto sono descritti nelProcedure CLSI e ISO. Il punto di interruzione suscettibile dalbavancina per S. aureus è ≤0.12 mg / ml (FDA foglietto illustrativo). Come mostrato in recente sorveglianza, la maggior parte degli isolati sono inibiti dalla Dalbavancina a livelli di 0,06 mg / ml 15. Con un punto di interruzione suscettibile vicino alla MIC modale, qualsiasi variazione di MIC come risultato di differenze metodo può influenzare i tassi di suscettibilità. Poiché la procedura BMD per dalbavancina include alcuni passaggi unici (in particolare, l&#39;uso di DMSO in preparazione del magazzino e diluizioni di droga intermedi e 0,002% P80 nel MIC bene, è imperativo che il metodo è seguito esattamente. L&#39;organismo S. aureus QC (ATCC 29213) con un chiaro MIC dalbavancina modale di 0,06 mg / ml, è stato un buon indicatore di variazione metodo e deve essere usata come metodo per validare il metodo BMD. Se i risultati MIC sono con il range atteso di ,03-,12 mg / ml, ma sono trend sia al basso o high lato di questa gamma, un&#39;ulteriore validazione del metodo è garantito. L&#39;aggiunta di 0,002% P80 è raccomandato per tutti gli organismi pertinenti Gram-positivi (staphylococcci, enterococchi e streptococchi.) Tuttavia, è da notare che è stato dimostrato che lisato sangue di cavallo agisce simile a P-80 rispetto al suo anti-binding capacità e che l&#39;aggiunta di P-80 a CAMHB + LHB ha alcun effetto aggiuntivo sulla dalbavancina streptococchi risultati MIC. Non vi è alcun metodo di diffusione del disco per il test dalbavancina e per la scarsa correlazione tra BMD e risultati AD, test di sensibilità della dalbavancina con il metodo AD non è raccomandato 12, 14. Il metodo BMD deve essere usato per la futura valutazione dalbavancina suscettibilità e come standard di riferimento per lo sviluppo di test di sensibilità antimicrobici commerciali.

Dalbavancina è un lipoglycopeptide semi-sintetico che è stato approvato dalla FDA nel maggio 2014 per il trattamento delle infezioni della pelle e pelle struttura batteriche acute causate da Gram-positivi 1. L&#39;obiettivo primario di dettagliare questo metodo in un formato video è quello di fornire indicazioni chiare agli laboratorio e di ricerca gli scienziati clinici per i test e la comunicazione dei risultati dalbavancina suscettibilità accurati e riproducibili. La determinazione di un agente antimicrobico MIC con metodi commerciali è eseguita di routine in laboratori clinici per la valutazione dell&#39;attività di un agente in vitro contro i batteri patogeni. Il metodo qui descritto è il metodo di microdiluizione brodo, come raccomandato dal CLSI e ISO 2,3,4. Dal momento che la dalbavancina metodi suscettibilità commerciali non sono attualmente disponibili (al momento della pubblicazione) e la diffusione del disco e dei metodi di diluizione in agar non sono attualmente Fo dalbavancina, metodi di diluizione riferimento brodo sono le opzioni attualmente disponibili 12,14. Dato che questo metodo di riferimento non è un commerciale e approvato dalla FDA metodo diagnostico in vitro, laboratori clinici negli Stati Uniti che utilizzano questa procedura per il test del paziente devono rispettare i requisiti normativi per un test sviluppato in laboratorio (LDT). Si prevede che come l&#39;uso dalbavancina aumenta, più laboratori avranno necessità di testare questo composto. Test Vancomicina come surrogato per la determinazione di dalbavancina sensibilità di S. aureus è stato convalidato 5. Tuttavia, la dalbavancina può essere attiva contro vancomicina intermedio S. aureus (VISA) e, quindi, i medici possono richiedere i risultati dalbavancina MIC. Inoltre, i risultati MIC per altre specie batteriche possono essere richiesti. Il punto di interruzione suscettibile FDA per la dalbavancina contro S. aureus è stato istituito a ≤0.12 mg / ml. FDA assegnato solo suscettibilitàcategoria bile a causa della mancanza di dati sulla isolati resistenti. La distribuzione normale MIC tra wild type S. aureus isolati è tra 0,03-,12 mcg / ml, con una chiara MIC modale di 0,06 mg / ml. Una leggera variazione nei risultati MIC causa della differenza di metodo, oltre alla variazione intrinseca BMD di ± una diluizione, potrebbe potenzialmente avere un impatto significativo sui tassi di suscettibilità. 6 Simile ad altri agenti lipoglycopeptide, test di sensibilità la dalbavancina può essere difficile a causa solubilità e le dimensioni relativamente grandi della molecola e le sue proprietà di legame 7,8,9. Il metodo BMD riferimento qui descritto comprende due passaggi specifici che sono unici per agenti insolubili e / o agenti lipoglycopeptide: (1) l&#39;uso di DMSO per la preparazione delle soluzioni madre e (2) aggiunta di 0,002% P-80 nel pannello MIC finale diluizioni. L&#39;obiettivo di questa pubblicazione è quello di fornire il video chiarezza al metodo BMD dalbavancina e per SPECIFICHElly concentrarsi su questi passaggi chiave, per garantire risultati accurati e riproducibili MIC.

<table><tbody><tr><td>Dalbavancin</td><td>Metrics, Inc.</td><td>Greenville, NC</td><td>BI-397</td></tr><tr><td>Vancomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>St. Louis, MO</td><td>C5793</td></tr><tr><td>Cation Adjusted Mueller Hinton Broth</td><td>Becton Dickinson</td><td>Sparks, MD</td><td>212322</td></tr><tr><td>Lysed horse blood</td><td>Cleveland Scientific</td><td>Bath, OH</td><td></td></tr><tr><td>Dose-it peristaltic pump</td><td>Integra Biosciences</td><td>Hudson, NH</td><td></td></tr><tr><td>Multi-channel pipet (Viaflo II)</td><td>Integra</td><td>Hudson, NH</td><td>4164</td></tr><tr><td>12 channel pipet (Matrix)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>Single channelpPipets (Ovation 10 &amp;micro;l - 100 &amp;micro;l)</td><td>VistaLab</td><td>Brewster, NY</td><td></td></tr><tr><td>96 well microplate</td><td>Greiner Bio-one</td><td>Monroe, NC</td><td>650161</td></tr><tr><td>50 ml flat cap conical bottom centrifuge tubes</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>16x125 mm disposable glass tubes</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>12x17 mm snap cap, polystyrene tubes</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>16 ml centrifuge tubes</td><td>BioExpress</td><td>Kaysville, UT</td><td>C-3394-2</td></tr><tr><td>Reagent reservoirs</td><td>Integra Biosciences</td><td>Hudson, NH</td><td>4312</td></tr><tr><td>Disposable sterilelLoops (1 &amp;micro;l &amp;amp; 10 &amp;micro;l)</td><td>Biologix</td><td>Lenexa, KA</td><td>65-0001,65-0010</td></tr><tr><td>Tryptic soy agar + 5% sheep blood</td><td>Becton Dickinson</td><td>Sparks, MD</td><td></td></tr><tr><td>Incubator (ambient)</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubator (5% CO2)</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analytical balance&amp;nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Waltham, MA</td><td></td></tr><tr><td>Gloves</td><td>Kimberly-Clark</td><td></td><td>52817</td></tr><tr><td>Lab coats</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

a reference broth microdilution method for dalbavancin in vitro susceptibility testing of bacteria that grow aerobically

Test di sensibilità antimicrobica (AST) viene effettuata per valutare l&#39;attività in vitro di agenti antimicrobici contro vari batteri. I risultati AST, che sono espressi come in concentrazioni minime inibenti (MIC) sono utilizzati nella ricerca per lo sviluppo antimicrobica e monitorare lo sviluppo di resistenza e in ambito clinico per l&#39;orientamento terapia antimicrobica. Dalbavancina è un lipoglycopeptide semi-sintetico agente antimicrobico che è stato approvato maggio 2014 dalla Food and Drug Administration (FDA) per il trattamento delle infezioni della pelle e pelle struttura batteriche acute causate da Gram-positivi. Il vantaggio di dalbavancina rispetto agli attuali terapie anti-stafilococco è la sua lunga emivita, che permette il dosaggio una volta alla settimana. Dalbavancina ha attività contro Staphylococcus aureus (inclusi sia S. aureus [MSSA] e meticillino-resistente Staphylococcus aureus [MRSA] sensibile alla meticillina), stafilococchi coagulasi-negativi, <em&gt; Streptococcus pneumoniae, Streptococcus gruppo anginosus, β-emolitici streptococchi e vancomicina enterococchi sensibili. Simile ad altri agenti lipoglycopeptide recenti, l&#39;ottimizzazione di CLSI e ISO brodo metodi di test di sensibilità comprende l&#39;uso di dimetilsolfossido (DMSO) come solvente nella preparazione soluzione madre e polisorbato 80 (P80) per alleviare l&#39;adesione dell&#39;agente di plastica. Prima degli studi clinici e durante lo sviluppo iniziale di dalbavancina, studi di sensibilità non sono stati effettuati con l&#39;uso di P-80 e MIC risultati tendevano ad essere 2-4 volte maggiore e similmente superiore MIC risultati sono stati ottenuti con il metodo della diluizione suscettibilità agar. Dalbavancina era prima incluso nell&#39;aggiornamento microdiluizione in brodo CLSI tabelle metodologia nel 2005 e modificato nel 2006 per chiarire l&#39;uso di DMSO e P-80. La procedura di microdiluizione brodo (BMD) mostrato qui è specifico per dalbavancina ed è in conformità con i metodi CLSI e ISO, con particolare step-by-step e focnoi sui passaggi critici aggiunto per chiarezza.

Metodi MIC standardizzati sono necessari al fine di monitorare lo sviluppo di resistenza, un obiettivo importante di vari programmi di sorveglianza antimicrobici. Risultati Dalbavancina MIC per isolati raccolti in Europa e Stati Uniti nel 2011-2013 erano &lt;0,25 mg / ml per il 99,9% di S. aureus e il 100% di streptococchi (tabella 4). Per valutare l&#39;importanza di utilizzare fresca (sigillato) DMSO, test triplicato di MIC dalbavancina BMD per QC ceppi di S. aureus ATCC 29213, ed E. faecalis ATCC 29212 e duplicare test per S. pneumoniae ATCC 49619 è stata effettuata utilizzando (1) DMSO da fiale sigillate, (2) DMSO da una bottiglia 1 L che era entro la data di scadenza ed era stato precedentemente utilizzato per 2 anni e (3) una aliquota di DMSO dallo stesso 1 L bottiglia (campione 2) che è stato permesso di sedere in una coppa aperta per 72 ore prima dell&#39;uso. Dalbavancina risultati MIC con pannelli realizzati con tutti e tre i campioni DMSO erano simili e well&#39;ambito gamme QC accettabili (Tabella 5). La perdita di attività dalbavancina dopo esposizione della soluzione di riserva di plastica e senza l&#39;aggiunta di P-80 è stata ben documentata 7. In 2 ulteriori studi, l&#39;aggiunta di P-80 per le soluzioni madre iniziali e intermedie (Tabella 6) e l&#39;uso di tubi di vetro o di plastica per la preparazione delle soluzioni madre iniziali e intermedie (Tabella 7) non ha avuto effetto sulla i risultati dalbavancina MIC. C&#39;era anche alcun effetto sui risultati MIC dalbavancina quando polipropilene e polistirene piatti provenienti da tre produttori sono stati utilizzati (tabella 7). La presenza di sangue di cavallo lisato nei brodi di collaudo di streptococchi ha dimostrato di avere un&#39;attività tensioattivo simile, paragonabile a P-80 7, 8. Il metodo di riferimento dalbavancina per streptococco include sia P-80 e lisato cavallo sangue ,tuttavia, a differenza di stafilococchi ed enterococchi, risultati dalbavancina MIC per streptococchi sono simili (entro +/- 1 diluizione) con e senza l&#39;aggiunta di P-80. Come è stato precedentemente presentato e illustrato in figura 1, la diluizione dalbavancina agar (AD) microfoni sono tipicamente 2-8 volte superiore rispetto al riferimento di corrente BMD 12, 13, 14. Diversamente BMD, l&#39;aggiunta di 0,002% P-80 non fa influenzare la dalbavancina AD MIC risultati 12. <img alt="Equazione 1" src="/files/ftp_upload/53028/53028eq1.jpg" /> Equazione 1: Esempio di Dalbavancina soluzione madre Preparazione fasi di preparazione per 25 ml di 800 mg / ml soluzione dalbavancina.. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53028/53028fig1.jpg" /> Figura 1. Confronto tra Dalbavancina e Vancomicina BMD a AD. I risultati dello studio che ha confrontato dalbavaNCIN e vancomicina BMD e AD MIC risultati per selezionare isolati batterici Gram-positivi. Media (A) Dalbavancina e (B) Vancomicina microdiluizione in brodo e agar diluizione MIC risultati in mg / ml per 15 Staphylococcus aureus, 8 coagulasi negativi stafilococchi (CNS), 5 Enterococcus faecalis e 14 Streptococchi (Gruppi A, B, e C). <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53028/53028fig1highres.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 11 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> La </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL; 0.06 </td><td> DAL 0,12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> B </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0,06 </td><td> DAL 0,12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> C </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0,06 </td><td> DAL0.12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> D </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0,06 </td><td> DAL 0,12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> E </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0,06 </td><td> DAL 0,12 </td><td> DAL 0.25 </td&gt; <td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> F </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0,06 </td><td> DAL 0,12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> Sol </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0,06 </td><td> DAL 0,12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td> H </td><td> DAL 0,002 </td><td> DAL 0,004 </td><td> DAL 0,008 </td><td> DAL 0,015 </td><td> Dal 0.03 </td><td> DAL 0,06 </td><td> DAL 0,12 </td><td> DAL 0.25 </td><td> DAL 0.5 </td><td> DAL 1 </td><td> DAL 2 </td><td> Pos Ctrl. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> DAL </td><td colspan="2"> Dalbavancina </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td&gt; </td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="12"> Le concentrazioni sono espressi in mg / ml dopo 50 microlitri / pozzetto inoculazione </td></tr></tbody></table> Tabella 1. MIC Piatto Formato. La mostra posizione 96 formato pozzetti di diluizioni Dalbavancina e pozzetti di controllo positivi utilizzato come esempio in questa pubblicazione il video <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Fonte Conc. (mg / ml) </td><td> Volume Fonte (ml) </td><td> Volume DMSO (ml) </td><td> Intermedio Conc. in DMSO (mg / ml) </td><td> Volume Intermedio Conc. (ml) </td><td> Volume CAMHB + 0,004% P80 * (ml) </td><td> 2X Conc. Dopo diluizione 1: 100 in CAMHB (mg / ml) </td><td> Finale Pannello Conc. Messaggio inoculazione (mg / ml) </td></tr><tr><td> 800 </td><td> 1.0 </td><td>1.0 </td><td> 400 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 4 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 200 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 2 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 100 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 1 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td> 400 </td><td> 0.5 </td><td> 3.5 </td><td> 50 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.5 </td><td> 0.25 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 25 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.25 </td><td> 0,125 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 12.5 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0,125 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 0.5 </td><td> 3.5 </td><td> 6.25 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 &lt;/ td&gt; <td> 0.5 </td><td> 3.13 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 </td><td> 1.5 </td><td> 1.5 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0,015 </td><td> 0,008 </td></tr><tr><td> 6.25 </td><td> 0.5 </td><td> 3.5 </td><td> 0.8 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0,008 </td><td> 0,004 </td></tr><tr><td> 0.8 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td><td> 0.4 </td><td> 0.02 </td><td> 1.98 </td><td> 0,004 </td><td> 0,002 </td></tr><tr><td colspan="5"> Questa tabella è stata modificata da CLSI M100-S25, Tabella 8B 3 </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 2. Schema per la preparazione in diluizione agenti antimicrobici insolubili in acqua da Usato in brodo diluizione test di suscettibilità. I volumi di soluzioni di lavoro dalbavancina e diluenti per la preparazione di MIC finalesoluzioni Dalbavancina di ,002-2 mg / ml. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Controllo Qualità Strain </td><td> Previsto Dalbavancina MIC (mg / ml) </td></tr><tr><td> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 0,03-0,12 </td></tr><tr><td> E. faecalis ATCC 29212 </td><td> 0,03-0,12 </td></tr><tr><td> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 0,008-0,03 </td></tr></tbody></table> Tabella 3. Previsto Dalbavancina MIC Risultati per ceppi di controllo di qualità di 3, 11 risultati dei controlli qualità. CLSI per ceppi suggerite per essere testati con isolati clinici al fine di verificare la corretta metodologia <img alt="Tabella 4" src="/files/ftp_upload/53028/53028table4.jpg" /> Tabella 4. Distribuzione delle Dalbavancina Risultati MIC (numero ad ogni MIC) da USA ed europea 2011-2013 SurveillANCE Studio 15. Dalbavancina MIC risultati di uno studio pubblicato di recenti isolati clinici come indicatore della dalbavancina corrente attività in vitro. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><colgroup></colgroup><tbody><tr><td rowspan="2"> Isolare # </td><td colspan="3"> Dalbavancina MIC (mg / ml) </td></tr><tr><td> DMSO 1 </td><td> DMSO 2 </td><td> DMSO 3 </td></tr><tr><td rowspan="3"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 0.12 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.12 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td rowspan="3"> E. faecalis ATCC 29212 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td rowspan="2"><em&gt; S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td colspan="4"> DMSO 1 = fiamma non aperto sigillato 10 ml fiale </td></tr><tr><td colspan="2"> DMSO 2 = bottiglia 1L aperto frequenti </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> DMSO 3 = bottiglia 1L aperto frequenti - seduto su una panchina nel bicchiere scoperto per 72 ore </td></tr></tbody></table> Tabella 5. Dalbavancina MIC Risultati (mg / ml) con DMSO Archivio e intermedio diluizioni preparazione con DMSO da 3 fonti. I risultati di uno studio che ha confrontato MIC dalbavancina effetto dell&#39;utilizzo di diversi solventi DMSO in preparazione dello stock dalbavancina e diluizioni intermedie. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="2"> Isolare Numero </td><td rowspan="2"> Replicare Numero </td><td colspan="2"> Dalbavancina MIC (mg / ml) </td></tr><tr><td> DALB w / P80 in DMSO </td><td> DALB w / o P80 in DMSO </td></tr><tr><td rowspan="4"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> S. aureus DP80-002SA clinica </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> S. aureus ATCC 700.699 </td><td> 1 </td><td> 0.5 </td><td> 0.5 </td></tr><tr><td rowspan="4"> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td>S. pyogenes clinici: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-004PY </td><td> 1 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> DP80-005PY </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> DP80-006PY </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> DP80-007PY </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> DP80-008PY </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> S. agalactiae clinica: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-009AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.12 </td></tr><tr><td> DP80-010AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> DP80-011AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> DP80-012AG </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> S. dysgalactiae clinical DP80-013DY </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> S. pneumoniae clinica: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DP80-014SP </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> DP80-015SP </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> DP80-016SP </td><td> 1 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> DP80-017SP </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td></tr></tbody></table> Tabella 6. Dalbavancina MIC risultati utilizzando DMSO Archivio e intermedio diluizioni preparazione con e senza 0.002% P-80. I risultati di uno studio che ha confrontato MIC dalbavancina effetto di aggiungere 0.002% P-80 a dalbavancina magazzino e diluizioni intermedie. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="3"> Isolare </td><td rowspan="3"> Replicare Numero </td&gt; <td colspan="4" rowspan="2"> Diluizione della Tubi </td><td colspan="4"> Micropiastra (Tipo di plastica) </td></tr><tr><td rowspan="2"> Poly-propilene, Greiner </td><td colspan="3"> Polistirolo </td></tr><tr><td> Bicchiere </td><td> Plastico </td><td> 1 ora di plastica </td><td> 1h Plastica / Intermedio 1 ora </td><td> Greiner </td><td> Corning </td><td> Nunc </td></tr><tr><td rowspan="3"> S. aureus ATCC 29213 </td><td> 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.06 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td rowspan="3"> E. faecalis ATCC 29212 </td><td&gt; 1 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td><td> 0.03 </td><td> 0.06 </td><td> 0.03 </td></tr><tr><td rowspan="2"> S. pneumoniae ATCC 49619 </td><td> 1 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td><td> 0,008 </td><td> 0,008 </td><td> 0,008 </td><td> 0,008 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td><td> 0,015 </td><td> 0,008 </td><td> 0,015 </td><td> 0,008 </td><td> 0,008 </td></tr><tr><td colspan="10"> Vetro = azione iniziale fatta in bottiglia di vetro, utilizzato immediatamente per rendere concentrazione intermedias in tubi di plastica, utilizzati immediatamente per fare diluizioni brodo. </td></tr><tr><td colspan="10"> Plastica = stock iniziale fatto in provetta da centrifuga di plastica, usato immediatamente per rendere concentrazioni intermedie in tubi di plastica, utilizzate immediatamente per effettuare diluizioni brodo. </td></tr><tr><td colspan="10"> 1 hr plastica = azione iniziale fatto in provetta da centrifuga di plastica, per non sedersi sulla panchina per 1 ora poi usato per fare concentrazioni intermedie in tubi di plastica, utilizzati immediatamente per fare le concentrazioni in brodo. </td></tr><tr><td colspan="10"> Plastica 1 ora / Intermedio 1 hr = azione iniziale fatto in provetta da centrifuga di plastica, per non sedersi sulla panchina per 1 ora poi usato per fare concentrazioni intermedie in tubi di plastica, per non sedersi sulla panchina per 1 ora poi usato per fare le concentrazioni in brodo. </td></tr></tbody></table> Tabella 7. Dalbavancina MIC risultati utilizzando diluizioni della preparazione in plastica e vetro Tubi e tipi di lastre in plastica MIC. Risultati ofa la dalbavancina studio MIC che ha confrontato effetto dell&#39;utilizzo tubi di plastica o di vetro durante la preparazione le soluzioni madre e anche effetto di utilizzare diverse fonti e tipi di plastica per micropiastre.

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A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Here, we present a protocol for determination of dalbavancin susceptibility of clinically relevant Gram-positive bacteria using a broth microdilution reference methodology.

Un riferimento brodo di microdiluizione per Dalbavancina<em&gt; In Vitro</em&gt; Test della Sensibilità di batteri che crescono aerobico

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

a-reference-broth-microdilution-method-for-dalbavancin-vitro

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

28.9K Views.  Laboratory Specialists, Inc. Here, we present a protocol for determination of dalbavancin susceptibility of clinically relevant Gram-positive bacteria using a broth microdilution reference methodology. 

Video: A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). Antimicrobial susceptibility testing (AST) of Mtb has traditionally been performed by the agar method of proportion or by 
macrobroth testing on an instrument such as the BACTEC (Becton Dickinson, Sparks, MD), VersaTREK (TREK Diagnostics, Cleveland, OH) or BacT/ALERT (bioM&eacute;rieux, Hazelwood, MO). The agar proportion method, while considered the &#x201C;gold&#x201D; standard of AST, is labor intensive and requires calculation of resistance by performing colony counts on drug-containing agar as compared to drug-free agar. If there is &ge;1% growth on the drug-containing medium as compared to drug-free medium, the organism is considered resistant to that drug. The macrobroth methods require instrumentation and test break point ("critical") drug concentrations for the first line drugs (isoniazid, ethambutol, rifampin, and pyrazinamide). The method described here is commercially available in a 96 well microtiter plate format [MYCOTB (TREK Diagnostics)] and contains increasing concentrations of 12 antimicrobials used for treatment of tuberculosis including both first (isoniazid, rifampin, ethambutol) and second line drugs (amikacin, cycloserine, ethionamide, kanamycin, moxifloxacin, ofloxacin, para-aminosalicylic acid, rifabutin, and streptomycin). Pyrazinamide, a first line drug, is not included in the microtiter plate due to its need for acidic test conditions. Advantages of the microtiter system include both ease of set up and faster turn around time (14 days) compared with traditional agar proportion (21 days). In addition, the plate can be set up from inoculum prepared using either broth or solid medium. Since the microtiter plate format is new and since Mtb presents unique safety challenges in the laboratory, this protocol will describe how to safely setup, incubate and read the microtiter plate.

Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis is challenging but critical for patient care. This microtiter plate format offers testing of 12 antimycobacterial drugs and provides minimum inhibitory concentration (MIC) values, which will aid in appropriate treatment.

Test di suscettibilità antimicrobica del complesso Mycobacterium tuberculosis delle droghe prima e seconda linea per diluizione brodo in un formato micropiastra

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

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Immunologia e infezioni

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

Uso di un terreno dell&#39;espettorato artificiale per testare l&#39;efficacia degli antibiotici contro<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; In condizioni più rilevanti al polmone Fibrosi Cistica

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Visualization of the Charcoal Agar Resazurin Assay for Semi-quantitative, Medium-throughput Enumeration of Mycobacteria

There is an urgent need to discover and progress anti-infectives that shorten the duration of tuberculosis (TB) treatment. Mycobacterium tuberculosis, the etiological agent of TB, is refractory to rapid and lasting chemotherapy due to the presence of bacilli exhibiting phenotypic drug resistance. The charcoal agar resazurin assay (CARA) was developed as a tool to characterize active molecules discovered by high-throughput screening campaigns against replicating and non-replicating M. tuberculosis. Inclusion of activated charcoal in bacteriologic agar medium helps mitigate the impact of compound carry-over, and eliminates the requirement to pre-dilute cells prior to spotting on CARA microplates. After a 7-10 day incubation period at 37 &#176;C, the reduction of resazurin by mycobacterial microcolonies growing on the surface of CARA microplate wells permits semi-quantitative assessment of bacterial numbers via fluorometry. The CARA detects approximately a 2-3 log10 difference in bacterial numbers and predicts a minimal bactericidal concentration leading to &#8805;99% bacterial kill (MBC&#8805;99). The CARA helps determine whether a molecule is active on bacilli that are replicating, non-replicating, or both. Pilot experiments using the CARA facilitate the identification of which concentration of test agent and time of compound exposure require further evaluation by colony forming unit (CFU) assays. In addition, the CARA can predict if replicating actives are bactericidal or bacteriostatic.

The charcoal agar resazurin assay (CARA) is a semi-quantitative, medium-throughput method to assess activity of test agents against mycobacteria that are replicating, non-replicating, or both. The CARA permits rapid evaluation of time- and concentration-dependent activity and identifies parameters to pursue by colony forming unit (CFU) assays.

Visualizzazione del carbone Agar resazurina Assay per semi-quantitativa, medio-throughput enumerazione dei micobatteri

There is an urgent need to discover and progress anti-infectives that shorten the duration of tuberculosis (TB) treatment. Mycobacterium tuberculosis, the ...

Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method

As rates of multidrug-resistant (MDR) pathogens continue to rise, outpacing the development of new antimicrobials, novel approaches to treatment of MDR bacteria are increasingly becoming a necessity. One such approach is combination therapy, in which two or more antibiotics are used together to treat an infection against which one or both of the drugs may be ineffective alone. When two drugs, in combination, exert a greater than additive effect, they are considered synergistic. In vitro investigation of synergistic activity is an important first step in evaluating the possible efficacy of drug combinations. Two main in vitro synergy testing methods have been developed: the checkerboard array and the time-kill study. In this paper, we present an automated checkerboard array method that makes use of inkjet printing technology to increase the efficiency and accuracy of this technique, as well as a standard manual time-kill synergy method. The automated checkerboard array can serve as a high-throughput screening assay, while the manual time-kill study provides additional, complementary data on synergistic activity and killing.
The checkerboard array is a modification of standard minimum inhibitory concentration (MIC) testing, in which bacteria are incubated with antibiotics at different concentration combinations and evaluated for growth inhibition after overnight incubation. Manual performance of the checkerboard array requires a laborious and error-prone series of calculations and dilutions. In the automated method presented here, the calculation and dispensing of required antibiotic stock solution volumes are automated through the use of inkjet printer technology. In the time-kill synergy assay, bacteria are incubated with the antibiotics of interest, both together and individually, and sampled at intervals over the course of 24 h for quantitative culture. The results can determine whether a combination is synergistic and whether it is bactericidal, and provide data on inhibition and killing of bacteria over time.

Antimicrobial synergy testing is used to evaluate the effect of two or more antibiotics used in combination and is typically performed by one of two methods: the checkerboard array or the time-kill assay. Here, we present an automated, inkjet printer-assisted checkerboard array synergy technique and a classic time-kill synergy study.

Antimicrobica sinergia test di stampante a getto d'inchiostro-assistita Checkerboard automatizzato matrice e il metodo di Time-kill manuale

As rates of multidrug-resistant (MDR) pathogens continue to rise, outpacing the development of new antimicrobials, novel approaches to treatment of MDR ...

Deferred Growth Inhibition Assay to Quantify the Effect of Bacteria-derived Antimicrobials on Competition

Competitive exclusion can occur in microbial communities when, for example, an inhibitor-producing strain outcompetes its competitor for an essential nutrient or produces antimicrobial compounds that its competitor is not resistant to. Here we describe a deferred growth inhibition assay, a method for assessing the ability of one bacterium to inhibit the growth of another through the production of antimicrobial compounds or through competition for nutrients. This technique has been used to investigate the correlation of nasal isolates with the exclusion of particular species from a community. This technique can also be used to screen for lantibiotic producers or potentially novel antimicrobials. The assay is performed by first culturing the test inhibitor-producing strain overnight on an agar plate, then spraying over the test competitor strain and incubating again. After incubation, the extent of inhibition can be measured quantitatively, through the size of the zone of clearing around the inhibitor-producing strain, and qualitatively, by assessing the clarity of the inhibition zone. Here we present the protocol for the deferred inhibition assay, describe ways to minimize variation between experiments, and define a clarity scale that can be used to qualitatively assess the degree of inhibition.

The deferred growth inhibition assay can be used to assess the competition effect by one bacterial isolate on another. Inhibition is quantified by measuring the zone of clearing around the inhibitor-producing isolate, or qualitatively assessed by determining the visible extent of inhibition.

Crescita differita Inibizione test per quantificare l&#39;effetto di antimicrobici batteri derivati ​​sulla concorrenza

Competitive exclusion can occur in microbial communities when, for example, an inhibitor-producing strain outcompetes its competitor for an essential ...

Biologia

Broth Microdilution In Vitro Screening: An Easy and Fast Method to Detect New Antifungal Compounds

Fungal infections have become an important medical condition in the last decades, but the number of available antifungal drugs is limited. In this scenario, the search for new antifungal drugs is necessary. The protocol reported here details a method to screen peptides for their antifungal properties. It is based on the broth microdilution susceptibility test from the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) M27-A3 guidelines with modifications to suit the research of antimicrobial peptides as potential new antifungals. This protocol describes a functional assay to evaluate the activity of antifungal compounds and may be easily modified to suit any particular class of molecules under investigation. Since the assays are performed in 96-well plates using small volumes, a large-scale screening can be completed in a short amount of time, especially if carried out in an automation setting. This procedure illustrates how a standardized and adjustable clinical protocol can help the bench-work pursuit of new molecules to improve the therapy of fungal diseases.

Broth Microdilution In Vitro Screening: An Easy and Fast Method to Detect New Antifungal Compounds

An easy and adaptable broth microdilution method for screening antifungal compounds and extracts.

Microdilution del brodo In Vitro Screening: un metodo facile e veloce per rilevare nuovi composti Antifungini

Fungal infections have become an important medical condition in the last decades, but the number of available antifungal drugs is limited. In this ...

Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing by Stimulated Raman Scattering Imaging of Deuterium Incorporation in a Single Bacterium

To slow and prevent the spread of antimicrobial resistant infections, rapid antimicrobial susceptibility testing (AST) is in urgent need to &#65279;quantitatively determine the &#65279;antimicrobial effects on pathogens. &#65279;It typically takes days to complete the AST by conventional methods based on the long-time culture, and they do not work directly for clinical samples. Here, we report a rapid AST &#65279;method enabled by stimulated Raman scattering (SRS) imaging of deuterium oxide (D2O) metabolic incorporation. Metabolic incorporation of D2O into biomass and the metabolic activity inhibition upon exposure to antibiotics at the single bacterium level are monitored by SRS imaging. The&#65279; single-cell metabolism inactivation concentration (SC-MIC) of bacteria upon exposure to antibiotics can be obtained after a total of 2.5 h of sample preparation and detection. Furthermore, this rapid AST method is directly applicable to bacterial samples in complex biological environments, such as urine or whole blood. SRS metabolic imaging of deuterium incorporation is transformative for rapid single-cell phenotypic AST in the clinic.

This protocol presents rapid antimicrobial susceptibility testing (AST) assay within 2.5 h by single-cell-stimulated Raman scattering imaging of D2O metabolism. This method applies to bacteria in the urine or whole blood environment, which is transformative for rapid single-cell phenotypic AST in the clinic.

Test rapidi di sensibilità antimicrobica mediante imaging Raman scattering stimolato dell'incorporazione del deuterio in un singolo batterio

To slow and prevent the spread of antimicrobial resistant infections, rapid antimicrobial susceptibility testing (AST) is in urgent need to ...

Evaluating the Effectiveness of a Test Compound against Mycobacteria in Broth

Source: Zheng, X., et al. <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/55273">System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis.</a> J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates an in-broth assay to determine antibiotic efficacy against Mycobacterium tuberculosis. The bacterial culture is incubated with different concentrations of a bactericidal antibiotic. The bactericidal efficacy is measured by assessing the presence of viable bacteria using a resazurin assay.

Valutazione dell'efficacia di un composto di prova contro i micobatteri in brodo

1. Bacterial Strain and Growth Medium

	Make albumin dextrose and salt stock solution (ADS) by solubilizing 25 g of bovine serum albumin, 10.0 g of ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunology

Immunodiagnostics

Specialized Assays

A Deferred Growth Inhibition Assay to Evaluate the Effect of Bacteria-Derived Antimicrobial Compounds

Source: Moran, J. C. et al., <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/54437">Deferred Growth Inhibition Assay to Quantify the Effect of Bacteria-derived Antimicrobials on Competition.</a> J. Vis. Exp.&#160;(2016)
This video showcases the deferred growth inhibition assay, used to investigate how antimicrobial compounds produced by one type of bacteria affect another competing bacterial strain.

Un saggio di inibizione della crescita differita per valutare l'effetto dei composti antimicrobici derivati da batteri

The following method is adapted&#160;to test competitor strains with inhibitor-producing strains.
NOTE: This protocol involves aerosol generation with ...

A Microtiter Plate Method to Assess the Minimum Inhibitory Concentration of an Antibiotic

Source: Ketelboeter, L. M., et al. <a href="https://app-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/53105">Methods to Inhibit Bacterial Pyomelanin Production and Determine the Corresponding Increase in Sensitivity to Oxidative Stress.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video demonstrates a microtiter plate-based method for determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of test antibiotics against bacteria. Upon adding a suspension of the bacterial pathogen Pseudomonas aeruginosa to a microtiter plate containing serial dilutions of a test antibiotic, and an inhibitor of the production of pyomelanin by the bacteria, the optical density of the wells is measured to compute the minimum inhibitory concentration of the antibiotic, and the impact of the pyomelanin production inhibitor the antibiotic sensitivity of the bacteria.

Un metodo di micropiastra per valutare la concentrazione inibitoria minima di un antibiotico

1. Antibiotic Minimum Inhibitory Concentration (MIC) Assay in 96-well Plates

	Set up overnight cultures of the strains to be tested in LB (Luria-Bertani) ...

Un riferimento brodo di microdiluizione per Dalbavancina

Riepilogo

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Capitoli in questo video

Test di suscettibilità antimicrobica del complesso Mycobacterium tuberculosis delle droghe prima e seconda linea per diluizione brodo in un formato micropiastra

Uso di un terreno dell'espettorato artificiale per testare l'efficacia degli antibiotici contro

Visualizzazione del carbone Agar resazurina Assay per semi-quantitativa, medio-throughput enumerazione dei micobatteri

Antimicrobica sinergia test di stampante a getto d'inchiostro-assistita Checkerboard automatizzato matrice e il metodo di Time-kill manuale

Crescita differita Inibizione test per quantificare l'effetto di antimicrobici batteri derivati sulla concorrenza

Microdilution del brodo In Vitro Screening: un metodo facile e veloce per rilevare nuovi composti Antifungini

Test rapidi di sensibilità antimicrobica mediante imaging Raman scattering stimolato dell'incorporazione del deuterio in un singolo batterio

Valutazione dell'efficacia di un composto di prova contro i micobatteri in brodo

Un saggio di inibizione della crescita differita per valutare l'effetto dei composti antimicrobici derivati da batteri

Un metodo di micropiastra per valutare la concentrazione inibitoria minima di un antibiotico

Un riferimento brodo di microdiluizione per Dalbavancina

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Test di suscettibilità antimicrobica del complesso Mycobacterium tuberculosis delle droghe prima e seconda linea per diluizione brodo in un formato micropiastra

Uso di un terreno dell'espettorato artificiale per testare l'efficacia degli antibiotici contro

Visualizzazione del carbone Agar resazurina Assay per semi-quantitativa, medio-throughput enumerazione dei micobatteri

Antimicrobica sinergia test di stampante a getto d'inchiostro-assistita Checkerboard automatizzato matrice e il metodo di Time-kill manuale

Crescita differita Inibizione test per quantificare l'effetto di antimicrobici batteri derivati ​​sulla concorrenza

Microdilution del brodo In Vitro Screening: un metodo facile e veloce per rilevare nuovi composti Antifungini

Test rapidi di sensibilità antimicrobica mediante imaging Raman scattering stimolato dell'incorporazione del deuterio in un singolo batterio

Valutazione dell'efficacia di un composto di prova contro i micobatteri in brodo

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Un metodo di micropiastra per valutare la concentrazione inibitoria minima di un antibiotico

Crescita differita Inibizione test per quantificare l'effetto di antimicrobici batteri derivati sulla concorrenza