L'applicazione dell'endoscopia con capsula ad alta definizione telecomandata nell'esame della vescica canina

Qui, presentiamo un protocollo per l'esame della vescica canina utilizzando un endoscopio a capsula ad alta definizione, impiantato chirurgicamente e manovrato per acquisire immagini della parete vescicale e delle dinamiche della minzione. La procedura offre spunti per lo sviluppo di studi urodinamici precisi.

Questo studio ha studiato la fattibilità e le potenziali applicazioni dell'endoscopia con capsula per l'esame della vescica utilizzando un modello canino. Tre cani Beagle maschi adulti sono stati sottoposti a impianto chirurgico di cistoscopi a capsula e sono stati divisi in tre gruppi, ogni gruppo con un Beagle: il Gruppo A (Beagle A) è rimasto in posizione supina fissa per 8 ore, il Gruppo B (Beagle B) si è mosso liberamente per 8 ore e il Gruppo C (Beagle C) ha regolato manualmente le posizioni (prono, supino, accovacciato) per 20 minuti ciascuno. Gli endoscopi a capsula impiantati hanno funzionato con successo in tutti i cani. Il gruppo A ha catturato principalmente immagini della base della vescica (6 h 27 min). Il gruppo B ha acquisito immagini del collo vescicale e della base (7 ore e 12 minuti), inclusa la visualizzazione dinamica del collo vescicale, della fossa prostatica e dello sfintere uretrale esterno durante la minzione naturale. Il gruppo C ha prodotto immagini del collo vescicale, della base e dell'apice (56 min). I risultati di questo studio dimostrano la capacità dell'endoscopia con capsula di fornire immagini dinamiche e di alta qualità della parete della vescica canina e suggeriscono il suo potenziale per lo sviluppo di valutazioni accurate e urodinamiche.

La cistoscopia transuretrale, uno strumento diagnostico comune in chirurgia urologica, è ampiamente utilizzata clinicamente non solo come metodo affidabile per la diagnosi del cancro della vescica, ma anche come mezzo importante per il trattamento e il follow-up postoperatorio¹. Tuttavia, l'esame cistoscopico tradizionale, rigido o flessibile, spesso causa disagio ai pazienti e può portare a complicanze come danno uretrale e infezione retrograda². Inoltre, i test urodinamici tradizionali, disturbando la normale attività fisiologica delle vie urinarie e le attività mentali e psicologiche dei pazienti, introducono inevitabilmente alcuni errori nei risultati ^3,4,5. Pertanto, lo sviluppo di un metodo diagnostico miniaturizzato, confortevole, privo di punti ciechi e più accurato rappresenta una direzione futura per il progresso della cistoscopia.

L'endoscopia con capsula, nota anche come endoscopia wireless, è stata ampiamente applicata negli esami gastrointestinali, offrendo vantaggi come praticità, indolore, assenza di infezioni crociate e nessuna interruzione delle normali attività del paziente. L'acquisizione indolore di dati completi di imaging del tratto gastrointestinale attraverso l'endoscopia con capsula è diventata un metodo standard ^6,7,8. Dato che la vescica è un organo cavo collegato all'ambiente esterno attraverso l'uretra, una capsula di dimensioni adeguate può essere introdotta nella vescica attraverso l'uretra.

Sulla base di ciò, proponiamo il concetto di cistoscopio a capsula ed esploriamo i suoi vantaggi e le sue potenziali applicazioni come nuovo strumento diagnostico attraverso esperimenti sugli animali, fornendo così nuove intuizioni per lo sviluppo futuro della tecnologia endoscopica a capsula. In questo contesto, ipotizziamo che il cistoscopio a capsula possa ottenere immagini intravescicali chiare e catturare i cambiamenti dinamici di diverse strutture durante il processo fisiologico di minzione, fornendo spunti per lo sviluppo di test urodinamici più accurati. Ciò potrebbe potenzialmente ridurre al minimo il disagio del paziente in futuro e ampliare le indicazioni per gli esami cistoscopici.

Questa ricerca è stata approvata dal Comitato Etico Medico dell'Ospedale Kunshan Affiliato dell'Università di Jiangsu, aderendo rigorosamente alle Linee Guida per l'Etica e il Benessere degli Animali da Esperimento. Il numero del documento di approvazione etica è 2021-06-008-K01.

1. Soggetti

1. Usa tre Beagle maschi adulti sani per lo studio. Dividili casualmente in gruppi A, B e C, con un cane per gruppo.
2. Criteri di inclusione: Includi animali di 24 mesi, di peso di circa 12 kg e privi di malattie cardiovascolari, renali e altre condizioni croniche.
3. Criteri di esclusione: escludere gli animali che sono stati sottoposti a qualsiasi trattamento medicinale ricevuto entro una settimana prima dell'esperimento.

2. Materiali sperimentali

1. Conduci esami della vescica utilizzando un sistema endoscopico a capsula, che include una capsula intelligente ad alta definizione, un registratore di immagini e una postazione di lavoro. L'endoscopio a capsula misura circa 11 mm × 25 mm, acquisisce immagini a 2 fotogrammi al secondo (FPS), funziona per 8-10 ore e può trasmettere circa 60.000 fotogrammi.

3. Progettazione sperimentale

1. Preparazione preoperatoria
   1. Digiunare il cane Beagle per 8 ore e trattenere l'acqua per 2 ore prima dell'intervento.
   2. Somministrare ampicillina (22 mg/kg) per via sottocutanea 30 minuti prima dell'intervento chirurgico come antibiotico profilattico.
   3. Rimuovere i peli dalla parte mediale dell'arto anteriore sinistro e dal basso addome utilizzando un tagliacapelli. Pulire il sito chirurgico con soluzione fisiologica sterile e asciugare con garza sterile. Disinfettare il sito chirurgico con iodio povidone.
   4. Posizionare un catetere endovenoso da 20 G nella vena cefalica dell'arto anteriore sinistro. Fissare il cane Beagle al tavolo operatorio.
2. Anestesia
   1. Monitorare i segni vitali. Somministrare dexmedetomidina cloridrato (0,005 ml/kg) per via endovenosa per la sedazione, seguita da propofol (1,0 ml/kg) per l'induzione dell'anestesia.
   2. Inserire un tubo endotracheale da 8 mm nella trachea utilizzando un laringoscopio. Confermare il corretto posizionamento mediante auscultazione e fissare il tubo con del nastro adesivo.
   3. Collega il cane Beagle a una macchina per anestesia veterinaria e mantieni l'anestesia con isoflurano dall'1,5% al 3% in ossigeno per inalazione.
3. Impianto di endoscopio a capsula
   1. Posizionare il cane Beagle in posizione supina e posizionare il registratore di immagini nelle vicinanze.
   2. Disinfettare tre volte il basso addome con iodio povidone e applicare teli chirurgici sterili.
   3. Praticare un'incisione longitudinale di 10 cm adiacente al pene utilizzando un manico di bisturi #3 e una lama #10. Incidere la pelle e i tessuti sottocutanei e sezionare senza mezzi termini i muscoli addominali. Sollevare e ritrarre il peritoneo utilizzando due emostatici.
   4. Localizzare la vescica e afferrarla delicatamente con una pinza atraumatica. Sollevare e fissare la camera d'aria per evitare danni.
   5. Praticare un'incisione di 1 cm sulla vescica.
   6. Rimuovere l'endoscopio della capsula. Collegare il registratore di immagini alla workstation utilizzando il cavo USB (Universal Serial Bus) dedicato, quindi tenere premuto il pulsante di accensione sul registratore di immagini per 3 secondi per accenderlo.
   7. Fare doppio clic sull'icona OMOM Ove sul desktop della workstation. Immettere il nome utente e la password per accedere al software della workstation. Fai clic su Aggiungi paziente e inserisci le informazioni per il Beagle, quindi fai clic su Salva.
   8. Nella sezione Informazioni sul paziente del software della workstation, inserire il numero di serie dell'endoscopio della capsula e il numero del canale per attivare la capsula. Fare clic su Avanti, quindi su Crea nuovo caso. Quando viene richiesto di formattare il dispositivo, selezionare Sì.
   9. Verificare che l'endoscopio della capsula funzioni correttamente. Fare clic su Visualizzazione in tempo reale per visualizzare le immagini dell'endoscopio della capsula.
      NOTA: Durante il normale funzionamento, la spia ACE sul registratore di immagini e il LED sulla capsula dovrebbero lampeggiare in modo sincrono.
   10. Disinfettare l'endoscopio della capsula con iodio povidone e posizionarlo nella vescica.
   11. Chiudere l'incisione vescicale con una sutura riassorbibile continua 4-0. Chiudere gli strati della parete addominale, quindi chiudere la pelle con una sutura di seta 2-0. Trasferisci il cane Beagle in una gabbia dopo l'intervento chirurgico. Durante il trasferimento, tenere il registratore di immagini entro 1 m dal cane Beagle per evitare la disconnessione dall'endoscopio della capsula.
4. Acquisizione delle immagini
   1. Fissare il registratore di immagini alla parte superiore della gabbia e garantirne la sicurezza.
   2. Fare clic sul pulsante Impostazioni sulla workstation, quindi selezionare Riavvia registratore di immagini per riattivare il registratore di immagini e confermare lo stato operativo e la connessione dell'endoscopio a capsula.
   3. Confina il Beagle A in una gabbia per cani di piccola taglia per 8 ore per mantenere la quiete. Lascia che il Beagle B si muova liberamente per 8 ore.
   4. Chiedi a Beagle C di mantenere le posizioni prone, supine e accovacciate utilizzando un leggero supporto fisico e osserva ogni posizione per 20 minuti, garantendo il comfort dell'animale e riducendo al minimo l'angoscia.
   5. Monitora e registra le immagini della vescica da Beagle C utilizzando il registratore di immagini. Fare clic su Visualizzazione in tempo reale per accedere al feed video in diretta della capsula, quindi fare clic sul pulsante Avvia registrazione per avviare l'acquisizione dell'immagine e sul pulsante Interrompi registrazione per terminarla. Dopo aver acquisito dati sufficienti, premere manualmente il pulsante di alimentazione sul registratore di immagini per spegnerlo.
   6. Dopo circa 8 ore, quando la spia ACT sui registratori di immagini per i gruppi A e B ha smesso di lampeggiare per 10 minuti, concludere l'esame e spegnere i registratori.
   7. Al termine del periodo sperimentale di 8 ore per i Gruppi A e B, dopo l'acquisizione dell'immagine per il Gruppo C, anestetizzare nuovamente i cani seguendo le procedure descritte nel paragrafo 3.2.
   8. Rimuovere chirurgicamente l'endoscopio della capsula dalla vescica attraverso una cistotomia. Chiudere le incisioni della vescica e dell'addome come descritto nel paragrafo 3.3.
      Consenti ai cani di riprendersi in gabbie pulite e silenziose con lettiere morbide. Somministrare antinfettive e fluidoterapia secondo necessità.
   9. Collegare il registratore di immagini alla workstation. Accendere il registratore di immagini e accedere al software della workstation. Fare clic su Revisione del caso; Il sistema scaricherà quindi automaticamente i dati dell'immagine. Al termine del download, salvare i dati dell'immagine sul disco rigido della workstation.
   10. Analizza i dati dell'immagine acquisita.

In questo studio, ogni Beagle (n = 3) ha ricevuto una capsula endoscopica impiantata chirurgicamente nella vescica e tutti gli animali hanno dimostrato un normale recupero post-operatorio. Gli endoscopi della capsula hanno funzionato correttamente e sono rimasti al sicuro all'interno dei cani, come confermato da studi di imaging (Figura 2). Sotto controllo remoto, i dispositivi hanno catturato immagini nitide di tutte le regioni anatomiche della vescica in varie fasi, tra cui la cupola, la parete posteriore, la parete anteriore, il collo e le pareti laterali destra e sinistra. Nel Beagle A, l'endoscopio ha acquisito immagini per 6 ore e 27 minuti, principalmente della base della vescica (Figura 2A). Nel Beagle B, l'endoscopio ha ottenuto immagini per 7 ore e 12 minuti, comprese immagini del collo vescicale in stato di riposo (Figura 2D), post-minzione (Figura 2H) e della base della vescica (Figura 2I). Questo gruppo ha catturato con successo i cambiamenti dinamici della vescica, del collo, della fossa prostatica e dello sfintere uretrale esterno durante il normale processo fisiologico di minzione dei cani. Le osservazioni chiave sono state: 1. L'apertura del collo vescicale all'inizio della minzione (Figura 2E). 2. Successivamente, l'espansione della fossa prostatica seguita dall'apertura dello sfintere uretrale esterno per consentire il flusso di urina (Figura 2F). 3. Dopo la minzione, lo sfintere uretrale esterno si è chiuso per primo, seguito dalla fossa prostatica e infine dal collo vescicale (Figura 2G), segnando la fine della minzione (il video del processo di minzione fisiologica raccolto è disponibile come Video supplementare 1). Il Beagle C è stato posizionato in posizione prona, supina e accovacciata per 20 minuti ciascuna, per un totale di 56 minuti di acquisizione delle immagini, comprese le immagini del collo vescicale (Figura 2J), della base (Figura 2K) e della cupola (Figura 2L).

Figura 1: Processo di inserimento dell'endoscopio nella vescica. (A) L'incisione e l'inserimento dell'endoscopio a capsula. (B) L'attivazione della capsula. (C) La sutura della vescica Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 2: Le immagini ottenute dall'endoscopia della capsula e dalla localizzazione radiologica dell'endoscopio della capsula. (A) Immagine della base della vescica nel Gruppo A (sanguinamento della sutura del cordone della borsa). (B) Radiografia addominale di un beagle del Gruppo A che mostra la capsula situata all'interno della vescica. (C) Immagine TC di un beagle nel Gruppo A con la capsula all'interno della vescica. (D) Immagine del collo vescicale nel Gruppo B (stato di riposo). (E) Immagine del collo vescicale di un beagle del Gruppo B che si dilata e inizia la minzione. (F) Immagine di un beagle nel Gruppo B che mostra la dilatazione del collo vescicale e della fossa prostatica, l'apertura dello sfintere uretrale esterno, l'espulsione dell'urina e l'endoscopio della capsula che si muove verso il collo vescicale con il flusso di urina. (G) Immagine di un beagle nel Gruppo B con il collo vescicale chiuso, che segna il completamento della minzione. (H) Immagine del collo vescicale dopo la minzione nel Gruppo B. (I) Immagine della base vescicale nel Gruppo B. (J) Immagine del collo vescicale nel Gruppo C. (K) Immagine della base della vescica centrale nel Gruppo C. (L) Immagine dell'apice della vescica nel Gruppo C. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Video supplementare 1: Video del processo fisiologico di minzione acquisito utilizzando l'endoscopio. Clicca qui per scaricare questo file.

Negli ultimi anni, con il progresso della tecnologia endoscopica, sia i cistoscopi rigidi che quelli flessibili sono stati ampiamente applicati nella pratica clinica. L'applicazione convenzionale della cistoscopia rigida è spesso ingombrante, con numerosi punti ciechi e traumi significativi. I pazienti sperimentano un elevato stress psicologico durante la procedura e possono incontrare disagio o dolore, nonché risposte fisiologiche come aumento della frequenza cardiaca, pressione sanguigna elevata e reazioni psicologiche^{allo stress 7}. La cistoscopia flessibile, d'altra parte, offre una maggiore flessibilità operativa, allevia il disagio del paziente rispetto alla cistoscopia rigida ed elimina quasi completamente i punti ciechi. Tuttavia, comporta ancora degli svantaggi, tra cui il rischio di infezioni crociate e la suscettibilità ai danni⁹. Inoltre, gli esami cistoscopici tradizionali non hanno la capacità di osservare dinamicamente e in modo prolungato lo stato della mucosa vescicale, facendo molto affidamento sull'esperienza individuale del medico, che può portare a diagnosi errate. Inoltre, a causa del tempo di esplorazione limitato e degli angoli di esplorazione ristretti, l'efficienza diagnostica della cistoscopia tradizionale necessita di ulteriori miglioramenti^10,11. Pertanto, c'è un urgente bisogno clinico di un metodo di esame conveniente e sostenibile.

L'impianto e il recupero della capsula presentano sfide significative in questo studio. Gli endoscopi a capsula attualmente ampiamente utilizzati nella pratica clinica hanno un diametro superiore a 1 cm. Nel nostro esperimento, l'endoscopio a capsula utilizzato ha un diametro di 1,1 cm, che è più largo della parte più stretta dell'uretra di un Beagle. Pertanto, è stata adottata una procedura chirurgica aperta per l'impianto dell'endoscopio della capsula. Il diametro medio dell'uretra umana è di 5-7 mm per i maschi e di 6 mm per le femmine senza dilatazione, espandendosi fino a 1 cm dopo la dilatazione¹². L'uretra mostra una resistenza alla chiusura, impedendo il passaggio degli endoscopi a capsula attualmente disponibili nella vescica. Di conseguenza, l'introduzione e il recupero di un endoscopio a capsula attraverso l'uretra richiedono una capsula di dimensioni più piccole. Si noti che i calcoli uretrali posteriori possono essere espulsi dalla vescica mediante pressione idrostatica e piccoli calcoli possono essere fatti passare attraverso l'uretra¹³. Ne deduciamo che capsule sufficientemente piccole potrebbero essere introdotte nella vescica tramite fluido o un catetere ed espulse con l'urina. Tuttavia, raggiungere dimensioni così minime con la tecnologia attuale sembra una sfida. Date le dimensioni ridotte richieste per gli endoscopi a capsula, non è necessaria una lunga durata della batteria. Ciò è supportato dai risultati del Gruppo C, in cui la maggior parte delle immagini della vescica sono state acquisite rapidamente modificando la posizione del corpo del Beagle. Pertanto, ridurre le dimensioni della batteria potrebbe essere un approccio praticabile per ridurre le dimensioni complessive dei cistoscopi a capsula in futuro. Anche la tecnologia di ricarica wireless sta avanzando rapidamente in vari settori¹⁴. Inoltre, se in futuro sarà possibile affrontare contemporaneamente le sfide delle dimensioni della capsula e della durata della batteria, sarà possibile lasciare un endoscopio a capsula nella vescica per periodi prolungati. Questa capacità consentirebbe il monitoraggio a lungo termine della recidiva e della progressione dei tumori maligni della vescica, risparmiando potenzialmente ai pazienti il disagio di ripetuti esami cistoscopici dopo l'intervento chirurgico per il cancro della vescica.

In questo esperimento, tre gruppi, designati A, B e C, hanno ottenuto un totale di 24 ore di dati video. Le riprese del Gruppo A erano limitate alla vista della base della vescica; Le riprese del Gruppo B includevano vedute sia della base che del collo della vescica, mentre le riprese del Gruppo C comprendevano vedute del collo, della base e della cupola della vescica. Questa analisi è stata condotta per i seguenti motivi. Negli endoscopi a capsula standard, l'estremità della telecamera (estremità anteriore) è più pesante dell'estremità della coda, che contiene aria per garantire che l'estremità della telecamera rimanga allineata verticalmente con il suolo quando è in un liquido. Ciò è stato evidenziato dal filmato del Gruppo A, che si allineava costantemente con la base della vescica. L'esperimento del Gruppo B ha rivelato che in posizione accovacciata, la telecamera era allineata con il collo della vescica e in posizione sdraiata, era allineata con la base della vescica senza catturare immagini della cupola della vescica. Nell'esperimento del Gruppo C, posizionando manualmente i cani in posizione supina, sono state catturate con successo le immagini della cupola della vescica.

Il confronto tra i tre gruppi sperimentali indica chiaramente che quando i cani sono nel loro stato naturale, gli endoscopi a capsula standard hanno punti ciechi nel loro campo di osservazione, rendendo difficile catturare immagini complete. Cambiando manualmente la posizione del cane, è possibile catturare la maggior parte della parete interna della vescica. Per ovviare alla limitazione dell'incapacità degli endoscopi a capsula di muoversi in modo indipendente, le soluzioni attuali includono sistemi di controllo magnetico e sistemi di propulsione a motore. La capsula magnetica è stata progettata e sviluppata per la prima volta da Given Imaging ed è ora ampiamente utilizzata in ambito clinico, superando l'incapacità del tradizionale endoscopio a capsula di acquisire immagini complete dello stomaco¹⁵. La capsula ad elica è stata inizialmente sviluppata dal laboratorio CRIM nel 2009. Si compone di tre parti: un controller wireless, una batteria e un guscio di supporto contenente quattro motori. Controllata in modalità wireless, la capsula può muoversi a velocità fino a 7 cm/s in uno stomaco pieno di liquido. È stato dimostrato che le capsule endoscopiche dotate di sistemi di assistenza al movimento si muovono in uno stomaco pieno di liquido e catturano oltre il 75% dei dati delle immagini¹⁶. Poiché la vescica manca di peristalsi e ha un ambiente interno più stabile rispetto allo stomaco, questo sistema di assistenza al movimento potrebbe essere applicato anche alle capsule vescicali in futuro per ottenere dati di imaging più completi della vescica.

Oltre a osservare le anomalie della vescica, la cistoscopia consente in modo importante il recupero di materiali patologici utilizzando pinze per corpi estranei. Attualmente, gli endoscopi a capsula possiedono solo capacità di osservazione, mancando dei mezzi per eseguire biopsie o interventi terapeutici. Tuttavia, lo sviluppo futuro dell'endoscopia con capsula si sta progressivamente spostando verso funzionalità operative e terapeutiche. Nel 2017, Son et ^al.17. Introduzione di un nuovo sistema di attuazione magnetica per l'endoscopia con capsula, che utilizza un ago sottile e cavo all'interno della capsula per perforare e aspirare il tessuto per il campionamento.

In questo studio, Beagle B è stato sottoposto con successo a un'endoscopia con capsula, che ha catturato i cambiamenti dinamici del collo della vescica, dell'uretra prostatica e dello sfintere uretrale esterno durante la minzione. All'inizio della minzione, il collo vescicale si è aperto, seguito dall'espansione dell'uretra prostatica e, infine, lo sfintere uretrale esterno si è aperto. Dopo la conclusione della minzione, lo sfintere uretrale esterno si è chiuso per primo, poi l'uretra prostatica e infine il collo della vescica. Questa rappresenta la prima osservazione dei cambiamenti dinamici nel complesso vescica, collo, uretra prostatica, sfintere uretrale esterno nei cani. Riteniamo che ciò sia significativo per i futuri studi urodinamici introducendo nuovi approcci. Gli sviluppi futuri potrebbero integrare i sensori di pressione nell'endoscopio a capsula. Durante la sua espulsione attraverso l'uretra, è possibile ottenere dati di imaging dinamico e di pressione da varie sezioni della vescica e del tratto urinario. Ciò riduce l'interferenza con il tratto urinario e allevia lo stress psicologico per i pazienti.

Questo studio ha dimostrato la fattibilità dell'utilizzo dell'endoscopia a capsula per acquisire immagini della vescica canina, ponendo così le basi per la sua applicazione in precise valutazioni urodinamiche. Evidenzia il potenziale per il monitoraggio dinamico a lungo termine in contesti clinici attraverso la cistoscopia con capsula. Tuttavia, le limitazioni includono una piccola dimensione del campione e la dipendenza da modelli canini, che possono limitare l'applicabilità diretta all'uomo a causa delle differenze fisiologiche nei sistemi urinari. Le sfide tecniche che l'endoscopia della capsula deve affrontare negli esami della vescica includono la miniaturizzazione della capsula, il miglioramento della durata della batteria e il perfezionamento dei meccanismi di controllo. Inoltre, la ritenzione prolungata della capsula nella vescica può influire sulla dinamica della minzione e ampie osservazioni multi-angolo potrebbero generare dati voluminosi. Tuttavia, si prevede che i continui progressi della tecnologia e dell'intelligenza artificiale supereranno questi ostacoli, migliorando la precisione e la fattibilità dell'endoscopia con capsula per le valutazioni della vescica. In definitiva, questa ricerca non solo riduce l'interruzione delle normali funzioni del tratto urinario durante gli esami, ma favorisce anche il progresso delle tecnologie diagnostiche. Ciò potrebbe rivoluzionare la diagnosi precoce e le strategie di trattamento per le malattie della vescica, offrendo nuove strade per l'innovazione medica e la cura dei pazienti.

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Finanziamento: Questo lavoro è stato sostenuto dal Kunshan Science and Technology Development Special Project (KS18062), dal Clinical Science and Technology Development Project (JLY20180110) dell'Università di Jiangsu e dal First People's Hospital of Kunshan's Scientific Education and Health Promotion Project (CXTD21-D02).

CONTRIBUTO DELL'AUTORE:
Yang Yuan concepì lo studio, condusse esperimenti e redasse il manoscritto. Leyi Liu ha analizzato i dati. Dingli Hu e Shihao Zhang hanno fornito risorse critiche e aiutato con l'interpretazione dei dati. Bing Wang ha contribuito alla revisione della letteratura e all'editing dei manoscritti. Yunlong Li, in qualità di autore corrispondente, ha supervisionato la direzione del progetto e la finalizzazione del manoscritto. Tutti gli autori hanno discusso i risultati e approvato la versione finale del manoscritto per la pubblicazione.

DISPONIBILITÀ DEI DATI:
Tutti i dati generati o analizzati durante questo studio sono inclusi in questo articolo.