Bonjour, je suis le Dr Jihad, le directeur du Center P Lab. L’objectif aujourd’hui de cette vidéo est de montrer un processeur de cellules refroidies adapté utilisé dans l’installation d’isolation des œillets sans impact sur l’environnement ainsi que dans la récupération des cellules. Commencez par pré-refroidir les gradients de densité légers et lourds et le kit de processeur de cellule à quatre degrés Celsius.
Ensuite, préparez le processeur de cellules en pré-refroidissant pendant 45 minutes. Insérez le kit de processeur de cellule de pré-refroidissement dans le processeur de cellule pour la machine à gradient à double enveloppe refroidie à l’éthanol standard. Connectez les deux chambres en verre et placez-les sur un agitateur magnétique Clamp le tube entre les deux chambres. Refroidir.
Le générateur de gradient avec un refroidisseur à circulation d’éthanol à zéro degré Celsius après refroidissement. Réglez la vitesse de la pompe à 150 millilitres par minute pour remplir la chambre avec 130 millilitres de gradient de densité élevé au fond du sac. Une fois que le gradient lourd est dans le sac, fermez l’hémostat entre deux chambres.
Ajoutez ensuite 130 millilitres de haute densité au bécher avant et 140 millilitres de gradients de faible densité au bécher arrière.Dec. Clampez l’hémostat entre les deux chambres, puis réglez une vitesse de pompe de 50 millilitres par minute pour créer un gradient continu entre deux chambres. Ensuite, préparez des cellules mononucléaires humaines de l’enveloppe leucocytaire pour la purification à partir de plusieurs couches leucocytaires anonymes collectées à partir de déchets de sang total fournis par la banque de sang.
Après la séparation, ajoutez cinq millilitres de densité ressemblant à une suspension de cellules mononucléées de faible densité dans 95 millilitres de milieu à gradient de haute densité dans un sac de transfert à l’aide d’une pompe péristaltique réglée à 25 millilitres par minute. Chargez par le haut le gradient préformé avec 30 millilitres de suspension de cellule mononucléaire à l’aide d’une sonde thermique pré-calibrée. Continuellement. Mesurez la température à l’intérieur du processeur de cellule à l’aide d’un thermocouple numérique connecté à une sonde thermique stérile.
Surveillez la température des gradients et des cellules pendant le processus. À la fin de la charge en gradient, réglez le processeur de la cellule à 537 G pour minimiser la chaleur générée par le rotor. Éteignez le processeur de cellule pour permettre au système hydraulique de revenir aux niveaux d’avant le fonctionnement et de libérer de l’air.
Redémarrez ensuite le processeur à 537 G et ajoutez 130 millilitres de gradients lourds et 140 millilitres de dégradés de faible densité pour créer un gradient de densité continu à un débit de 50 millilitres par minute et 4,3 degrés Celsius. Ensuite, chargez 30 millilitres de suspension de cellules Buffy Coat au-dessus d’un gradient de densité de charge à un débit de 25 millilitres par minute et six degrés Celsius. Après le chargement de la cellule, ajoutez 50 millilitres de solution de lavage dans le processeur de cellule après cinq minutes.
Collectez le gradient filé dans 12 bouteilles à un débit de 100 millilitres par minute et un tube de remplissage de cinq degrés Celsius, un avec 100 millilitres de produit de lavage et 150 millilitres de cellules. Remplissez ensuite les tubes deux à 12 avec 225 millilitres de produit de lavage et 25 millilitres de cellules. L’évaluation des particules en suspension dans l’air dans un environnement de salle blanche, grade C et grade B, a montré qu’il n’y avait pas d’excès de particules en suspension dans l’air de 0,5 et cinq microns selon les normes de salle blanche, GMP grade C, grade B et BSL trois.
Aucune différence significative dans les températures du gradient n’a été observée au cours des quatre premières étapes, les deux processeurs maintenant environ 4,5 degrés Celsius. Cependant, après la centrifugation et pendant les étapes de collecte, la température a augmenté au début et à la fin des étapes de collecte pour les deux processeurs. De plus, les processeurs de cellules refroidis ont un impact sur la purification des cellules humaines.
L’efficacité et la viabilité ont été déterminées après centrifugation. La température des cellules collectées a légèrement augmenté à 8,5 degrés Celsius. L’échantillonnage actif de l’air et le dépistage de la stérilité n’ont montré aucune croissance.
