Hola, soy el Dr. Jihad, el Director del Laboratorio del Centro P. El objetivo de hoy de este vídeo es mostrar un procesador de células refrigeradas adaptado que se utiliza en la instalación de aislamiento de ojales sin impacto en el medio ambiente ni en la recuperación de las células. Comience por preenfriar los gradientes de densidad ligera y pesada y el kit de procesador de celdas a cuatro grados centígrados.
A continuación, prepare el procesador de celdas preenfriándolo durante 45 minutos. Inserte el kit de procesador de celda de preenfriamiento en el procesador de celda para la máquina de gradiente de doble camisa enfriada por etanol estándar. Conecte las dos cámaras de vidrio y colóquelas en un agitador magnético Sujete el tubo entre las dos cámaras. Fresco.
El generador de gradientes con un enfriador de circulación de etanol a cero grados centígrados después del enfriamiento. Ajuste la velocidad de la bomba a 150 mililitros por minuto para llenar la cámara con 130 mililitros de gradiente de densidad pesada en el fondo de la bolsa. Una vez que el gradiente pesado esté en la bolsa, cierre el hemostático entre dos cámaras.
A continuación, añada 130 mililitros de alta densidad al vaso delantero y 140 mililitros de gradientes de baja densidad al vaso trasero.Dec. Sujete el hemostático entre las dos cámaras, luego ajuste una velocidad de bombeo de 50 mililitros por minuto para crear un gradiente continuo entre dos cámaras. A continuación, prepare células de pelaje leucocitario mononuclear humano para su purificación a partir de múltiples pelajes anónimos agrupados recogidos de productos de desecho de sangre entera proporcionados por el banco de sangre.
Después de la separación, agregue cinco mililitros de gravedad específica que se asemeje a una suspensión de celda mononuclear de baja densidad en 95 mililitros de medio de gradiente de alta densidad en una bolsa de transferencia usando una bomba peristáltica configurada a 25 mililitros por minuto. Carga superior el gradiente preformado con 30 mililitros de suspensión de celda mononuclear utilizando una sonda térmica precalibrada. Continuamente. Mida la temperatura dentro del procesador de celdas utilizando un termopar digital conectado a una sonda térmica estéril.
Controle la temperatura de los gradientes y las celdas durante el proceso. Al final de la carga de gradiente, ajuste el procesador de celdas a 537 G para minimizar el calor generado por el rotor. Apague el procesador de celdas para permitir que el sistema hidráulico regrese a los niveles previos al funcionamiento y libere aire.
A continuación, reinicie el procesador de celdas a 537 G y añada 130 mililitros de gradientes pesados y 140 mililitros de gradientes de baja densidad para crear un gradiente de densidad continuo a un caudal de 50 mililitros por minuto y 4,3 grados centígrados. A continuación, cargue 30 mililitros de suspensión de celda de recubrimiento Buffy sobre un gradiente de densidad de carga a un caudal de 25 mililitros por minuto y seis grados centígrados. Después de la carga de la celda, agregue 50 mililitros de solución de lavado en el procesador de celdas después de cinco minutos.
Recoja el gradiente hilado en 12 botellas con un caudal de 100 mililitros por minuto y un tubo de llenado de cinco grados centígrados, uno con 100 mililitros de medios de lavado y 150 mililitros de celdas. A continuación, llene los tubos del dos al 12 con 225 mililitros de medios de lavado y 25 mililitros de células. La evaluación de partículas en el aire en un entorno de sala limpia, grado C y grado B, mostró que no había exceso de partículas en el aire de 0,5 y cinco micras según las normas de sala limpia, GMP grado C, grado B y BSL tres.
No se observaron diferencias significativas en las temperaturas de gradiente durante los primeros cuatro pasos, y ambos procesadores mantuvieron aproximadamente 4,5 grados Celsius. Sin embargo, después de la centrifugación y durante las etapas de recolección, la temperatura aumentó al principio y al final de las etapas de recolección para ambos procesadores. Además, los procesadores de células enfriadas tienen un impacto en la purificación de las células humanas.
La eficiencia y la viabilidad se determinaron después de la centrifugación. La temperatura de las células recogidas subió ligeramente hasta los 8,5 grados centígrados. El muestreo activo de aire y el cribado de esterilidad no mostraron crecimiento.
