Cette méthode nous permettra d’évaluer le rôle de la cavité péricardique qui entoure le cœur et son contenu dans la réparation cardiaque à la suite d’un infarctus du myocarde. Par rapport aux méthodes conventionnelles de ligature coronaire pour la modélisation de l’infarctus du myocarde, notre méthode maintient une cavité péricardique intacte, permettant de déterminer le contenu et de suivre leurs rôles à la suite d’une lésion ischémique cardiaque. Comprendre la contribution de la cavité péricardique et la réponse aux blessures cardiaques fournira des informations importantes sur les stratégies thérapeutiques qui ciblent le péricarde pour améliorer la guérison cardiaque.
Pour commencer par la post-anesthésie, retenez les pattes de la souris et positionnez-la sur la table chirurgicale. Après avoir préparé la souris pour la chirurgie comme décrit dans le manuscrit, ventiler la souris avec 2% d’isoflurane et 100% d’oxygène comme gaz porteur à l’aide d’un ventilateur commercial. Ensuite, définissez un taux de 110 respirations par minute, un volume courant de 250 microlitres et une pression expiratoire positive de quatre millimètres de mercure.
Faites rouler la souris de 30% sur son côté droit pour positionner le côté gauche de la poitrine pour la chirurgie. Ensuite, faites une incision latérale de deux à trois centimètres dans la peau de la poitrine pour visualiser les muscles pectoraux du côté gauche. Faites une incision d’un centimètre de la ligne médiane vers l’extérieur pour couper le grand et le mineur pectoral.
Évitez les saignements excessifs tout au long de la cautérisation des vaisseaux saignants. Visualisez les muscles intercostaux entre la troisième et la quatrième côte. Faites une incision de deux centimètres dans le muscle intercostal gauche pour introduire de l’air dans la cavité thoracique et permettre au cœur et aux poumons de tomber loin de l’incision.
Pour inciser l’intercostal sans saignement, arrêtez temporairement le ventilateur et élargissez l’ouverture à l’aide d’un dispositif de cautérisation. À l’aide de rétracteurs, rétractez les côtes pour exposer le cœur. Ensuite, observez le péricarde et le cœur sous-jacent au microscope stéréoscopique.
Placez doucement la pince sur la surface du péricarde pour réduire le péricarde et les mouvements cardiaques sous-jacents. Repère visuellement l’artère coronaire LAD en traçant son émergence sous l’appendice gauche. À l’aide du pilote de micro-aiguille, guider une suture appropriée à travers le péricarde sous le DAL.
Observez la suture émergeant de l’autre côté du DAL et du péricarde. Représentant le modèle de ligature permanente, attachez la suture pour restreindre le flux sanguin dans l’artère coronaire, rendant visible le blanchiment de la partie antérieure du ventricule gauche. Ensuite, coupez l’excès de suture à l’aide de ciseaux.
Fournir des injections d’entretien d’analgésique sous-cutanée toutes les 12 heures pendant 72 heures après la chirurgie. Après avoir réduit l’isoflurane à 1%, éteignez l’isoflurane tout en maintenant la ventilation avec de l’oxygène. Une fois que l’animal montre des signes de respiration, retirez le tube trachéal de calibre 23 de la bouche et placez la souris dans une cage de récupération pour surveiller la reprise respiratoire.
Laissez la souris récupérer dans la cage avec une partie de la cage placée sur un coussin chauffant pour fournir une source de chaleur externe. Surveillez quotidiennement l’état de santé de la souris pendant sept jours en évaluant les incisions et l’inconfort des animaux. Si nécessaire, administrer des antibiotiques pour une récupération réussie après la chirurgie invasive.
Après avoir maintenu la souris sous anesthésie générale avec de l’oxygène, placez la souris en décubitus dorsal sur une plate-forme de scène chauffée et attachez les pattes aux fils ECG. Puis frotter la poitrine. Acquérir des images ECG à l’aide d’une sonde transductrice et d’un gel de contact et les analyser avec le logiciel approprié.
Après une évaluation ECG non invasive, éteignez l’isoflurane et remettez la souris dans la cage. Fixez le cœur dans 10% de formol pendant au moins 24 heures. Coupez l’échantillon à l’aide d’une lame de rasoir droite à travers le ventricule droit, le septum interventriculaire et le ventricule gauche, en veillant à ce que l’incision passe par le centre de la zone de l’infarctus.
Et puis la paraffine incorpore les échantillons de tissus. Les sections coupées sont ensuite placées dans une cassette de montage pour un enrobage ultérieur de la paraffine et une section ultérieure en sections de cinq micromètres d’épaisseur. Après la mise en place des sections de tissu sur les lames, déparaffiner à l’aide de toluène et de lavages à l’alcool gradués avec de l’eau désionisée.
Puis réhydratez-vous. Ensuite, colorez la section avec 0,1% de rouge sirius dans de l’acide picrique pendant deux heures à température ambiante. Laver la section avec de l’acide acétique à 0,5 % pendant trois minutes, puis rincer avec de l’éthanol à 70 % pendant une minute.
Déshydrater la section en utilisant l’ordre inverse des lavages avec des concentrations d’éthanol croissantes et graduées avant de monter pour une évaluation microscopique. L’induction réussie de l’infarctus du myocarde avec la ligature coronaire modifiée a été évaluée en examinant les paramètres fonctionnels et les caractéristiques structurelles du cœur. Pour la fonction, la diminution de la fraction d’éjection du ventricule gauche a été évaluée par échocardiographie dans les trois à quatre semaines suivant l’infarctus du myocarde.
La coloration histologique a démontré que les changements fonctionnels s’accompagnaient d’une fibrose significative de la paroi du ventricule gauche, qui a été confirmée par la quantification de la fibrose colorée en rouge picrosirius dans les coupes transversales du cœur quatre semaines après l’infarctus avec les modèles de ligature coronaire péricardique perturbés ou intacts. La combinaison de la méthode de marquage des billes fluorescentes avec l’analyse par cytométrie en flux a fourni une approche pour suivre les macrophages péricardiques Gata6 positifs résidents. Fait important, peu ou pas d’étiquetage a été détecté dans le cœur ou le sang.
Après un infarctus du myocarde, la relocalisation des cellules peut être suivie par cytométrie de flux et imagerie. La quantification des cellules myéloïdes péricardiques marquées par des billes fluorescentes avec ou sans infarctus du myocarde est présentée. Des précautions sont nécessaires pour éviter de perturber ou de déchirer par inadvertance le péricarde mince pendant la procédure.
Cette méthode peut être combinée avec le traçage de la lignée cellulaire ou le blocage des effecteurs, ce qui permettra de suivre et de déterminer l’impact de la composante péricardique sur la réponse de guérison dans le cœur infarctus. Nous avons identifié que la cavité péricardique protège le cœur après une blessure, qui est en partie médiée par les macrophages péricardiques résidents. Cette approche ouvre un nouveau domaine de recherche pour les maladies cardiovasculaires.
