The authors acknowledge funding sources from D&#8217;Youville College School of Pharmacy, Buffalo, NY.

1. Préparer les différents médias et Composants supplémentaires <ol><li> Avant l&#39;expérience, préparer des milieux consistant en DMEM ou un autre support spécifiés avec l&#39;addition de FBS soit normale, FBS charbon de bois, charbon ou FBS plus le composant à tester. Notez que plusieurs composants peuvent être testés dans chaque expérience. </li><li> Peser et diluer les hormones, les facteurs de croissance, cytokines ou de façon appropriée pour être dissous dans le sérum dépouillé de charbon de bois à la concentration physiologique. </li></ol> 2. Préparer la Matrice Collagène on Ice <ol><li> Préparation 2 ml collagène I matrice, à 2,2 mg / ml en ajoutant les composants suivants stérilisées par filtration sur de la glace: 10 x 200 pi de PBS (pH 7,4), 5,4 pi de NaOH 1 N, 600 pi d&#39;eau distillée deux fois 2 O, et 1,2 ml de collagène de type I (à 3,63 mg / ml). </li><li> Conserver la solution de collagène I sur la glace jusqu&#39;au moment de l&#39;assiette. </li></ol> 3. Préparer la migration / invasion Plaques pour le dosage &lt;/ P&gt; <ol><li> Pour chaque lignée cellulaire à tester, en utilisant une plaque de chambre de 24 puits à puits qui 12 contiennent des inserts. Utilisez les 12 puits supplémentaires qui ne contiennent pas inserts pour ajouter les médias chimioattractives et le transfert des inserts pour la mise en place expérimentale. REMARQUE: une matrice de collagène sur des plaques avec un polyéthylène téréphtalate (PET) et la membrane 8 um de taille de pore est optimale pour les lignées cellulaires utilisent ici. Cependant, une matrice de matrigel dans des plaques pré-revêtues peut également être substitué par la taille des pores en fonction de la diminution de la lignée cellulaire à l&#39;étude. </li><li> Identifiez clairement la plaque, en utilisant trois puits par condition étant analysés (migration FBS, migration CS-FBS, invasion FBS, et d&#39;invasion CS-FBS ainsi que FBS-migration pour un contrôle, la lignée cellulaire non invasive). Dosage par déplacement migration à travers les pores d&#39;une membrane en PET, et l&#39;invasion de dosage par circulation à travers une matrice de collagène ou de matrigel et ensuite à travers les pores dans la membrane. Utiliser différents marqueurs de couleur pour chaque état de la cellule à unid dans le processus de placage. </li></ol> 4. Verser l&#39;invasion Matrice <ol><li> Pipetter prudemment 75 ul de la solution de matrice de collagène dans les inserts à être utilisés pour des essais d&#39;invasion. Faites preuve de prudence pour éviter les bulles. Disperser les bulles par l&#39;application d&#39;une pointe de pipette à la surface inversée. </li><li> Transférer la plaque avec les inserts revêtus de collagène à un incubateur à CO2 à 37 ° C et 5% pendant 30 minutes pour permettre au gel de se solidifier. </li></ol> 5. Plaque les cellules sur la membrane ou d&#39;invasion Matrice <ol><li> Pendant ce temps, Trypsiniser cellules et ajouter du contenu multimédia avec 10% de FBS. Spin cellules à 200 g pendant 5 min sur une centrifugeuse de table et rincer 3x dans un milieu sans sérum. </li><li> Remettre en suspension dans un milieu sans sérum. Compter les cellules avec un hémocytomètre ou un comptoir de diaporama automatique. Ajouter un milieu sans sérum à une concentration finale de 5 x 10 4 cellules / ml. </li><li> Lorsque la matrice de collagène est solidifié (après 30 minutes), ajouter 700 ul de milieu avec soit2% de FBS ou définis charbon-FBS à chaque puits. Sur les 12 inserts par plaque: <ul><li> 3 inserts ont collagène et les puits avec les médias + 2% de FBS </li><li> 3 inserts ont collagène et les puits avec les médias + 2% CS-FBS </li><li> 3 inserts ne ont pas le collagène et les puits avec les médias + 2% de FBS </li><li> 3 inserts ne ont pas le collagène et les puits avec les médias + 2% CS-FBS </li></ul><ol><li> Utilisation des plaques supplémentaires en fonction du nombre de facteurs à tester et d&#39;une commande pas de collagène correspondant à chaque condition. </li></ol></li><li> Ajouter suspension cellulaire aux inserts à 5 x 10 4 cellules / ml, le placage 500 cellules par ul insert dans tous les inserts de migration et d&#39;invasion. </li><li> Incuber les cellules pendant 22 heures à 37 ° C. </li></ol> 6. quantifier le nombre de Migration et invasion des cellules <ol><li> Mettre en place la coloration des puits en utilisant du méthanol fixateur, l&#39;éosine, et hématoxyline, dans des puits séparés. </li><li> Utilisez des cotons-tiges pour éliminer les cellules et la matrice de chaque puits.Rrepeat avec deuxième application de l&#39;écouvillon pour chaque puits. </li><li> Avec une pince, tremper chaque insert 5 fois pendant 1 seconde dans chacune des trois solutions de suite. </li><li> Laisser sécher inserts O / N. </li><li> Soit i) supprimer des filtres avec un scalpel, couper soigneusement autour des bords et monter sur une lame avec lamelle et l&#39;immersion d&#39;huile, ou ii) les inserts permettent de sécher O / N inversé et utilisent les inserts directement pour la microscopie. </li><li> Le lendemain, voir des diapositives ou des inserts sous un microscope avec un objectif 20X et prendre cinq images de différentes régions du filtre. Pour améliorer la cohérence, de prendre quatre champs extérieurs et un centre. </li><li> Compter les cellules pour toutes les conditions en utilisant le logiciel ImageJ et appliquer les formules ci-dessous. </li><li> Déterminer l&#39;invasion de pour cent comme suit: # Moyenne des cellules envahissantes travers collagène je insère = a Moyenne # des cellules migrant à travers insert de commande = b Invasion% = (a / b) * 100 </li><li> Déterminer l&#39;indice Invasion de 2% de FBS comme suit: % Invasion des cellules en cours d&#39;analyse (à 2% de FBS) = c % Invasion de cellules de contrôle non invasifs en (2% de FBS) = d Invasion Index (FBS) = (c / d) </li><li> Déterminer l&#39;indice Invasion 2% CS-FBS comme suit: % Invasion des cellules en cours d&#39;analyse (dans 2% CS-FBS) = e % Invasion des cellules non invasives de contrôle dans (2% CS-FBS) = f Indice Invasion (CS-FBS) = (e / f) </li></ol> 7. Répétez Protocole expérimentale visant à comparer charbon-FBS FBS charbon-dénudés + X n avec de multiples facteurs combinés <ol><li> Répéter la procédure plusieurs fois que nécessaire en utilisant différents composants de &quot;X&quot; ou une combinaison de composants. </li><li> Appliquer les calculs pour déterminer la contribution de chaque facteur &quot;X&quot; pour les effets de la migration et d&#39;invasion. </li></ol>

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</ol>

The authors have nothing to disclose.

Tumeur métastase est un processus en plusieurs étapes. Les cellules doivent franchir la membrane basale, intravasate soit dans le système lymphatique ou le sang microvaisseaux, dans lesquels ils sont transportés à des sites distants. Les cellules tumorales puis extravasent et colonisent dans un macrométastase 12. La progression à travers la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT), l&#39;invasion tumorale et la métastase a été renforcée par des hormones stéroïdes 13,14, les facteurs de croissance de 15 à 18, 19 à 21 et les cytokines. Ces molécules sont si importantes pour traiter la voie de signalisation de la progression tumorale, que le développement d&#39;un dosage pour traiter leur rôle dans la tumeur potentiel invasif est une étape importante pour déchiffrer les voies de signalisation complexes. Cette analyse de l&#39;utilisation de sérum de charbon-dépouillé a un avantage par rapport aux méthodes existantes, car il vise à identifier la force motrice à laquelle la tumeur cellules migrent. Un essai précédent aété publié en utilisant des fibroblastes mammaires normales primaires dans des chambres d&#39;invasion. Dans cette étude, les auteurs ont utilisé les médias au charbon de bois dénudé et rajoutés oestrogène dans des chambres de matrigel qui n&#39;a pas engendré invasion comme prévu puisque les cellules ne étaient pas tumorigènes. Cependant, la présence de milieux conditionnés de type macrophage en présence ou en absence de l&#39;oestrogène a augmenté de manière significative et de manière similaire 22 invasion. Bien que ce test était similaire qu&#39;il a utilisé des essais d&#39;invasion de charbon de bois avec du sérum débarrassé de l&#39;absence ou en présence d&#39;œstrogènes, ce ne était pas un dosage de la tumeur et a été dirigé vers l&#39;étude des interactions paracrines entre les macrophages et les fibroblastes 22. Un autre test utilisé médias de charbon-dépouillé pour montrer que l&#39;addition de faibles niveaux d&#39;œstrogènes augmente la prolifération des cellules du cancer du sein, mais a provoqué une résistance aux inhibiteurs de kinase 23. Notre étude est unique en ce qu&#39;elle est un dosage d&#39;invasion applicable à divers types de cellules cancéreuses destinées à étudier laeffet des hormones individuelles, facteurs de croissance et des cytokines, seules ou en combinaison. En outre, sous réserve de la littérature disponible, on a déterminé les concentrations de l&#39;hormone nécessaire d&#39;ajouter de la sérum-dépouillé de charbon de bois pour atteindre des niveaux physiologiquement pertinentes (tableau 1). L&#39;addition du composant individuel, &quot;X&quot; à des niveaux normalement présentes dans le sérum est un paramètre critique de l&#39;essai. Bien que ce test peut sembler être limitée par les niveaux publiés d&#39;hormones, facteurs de croissance, cytokines et dans le sérum, l&#39;enquêteur peut utiliser les dosages ELISA pour déterminer les niveaux de facteurs supplémentaires. Bien que le protocole est spécifique pour l&#39;utilisation de collagène I, matrigel pourrait également être substitué si l&#39;enquêteur a été constamment utilise cette matrice. La raison pour laquelle on préfère utiliser du collagène I est parce qu&#39;il est un composant unique qui est définie et est le constituant principal du derme. En outre, nous utilisons 75 pi de 100 μg / ml de collagène pour rendre la matrice d&#39;invasion. Cela peut également être modifié pour atteindre les résultats souhaités. Il est préférable d&#39;optimiser la concentration de telle sorte qu&#39;un nombre suffisant de cellules peut compter sur les filtres. Si les cellules sont hautement invasif, il peut être préférable d&#39;utiliser 100 pi de collagène de type I pour la matrice ou d&#39;augmenter la concentration du collagène. Bien que cette technique peut aider l&#39;enquêteur d&#39;obtenir des informations importantes, il est utile que si les cellules tumorales envahissent vers une chimioattractive qui est éliminé par le charbon de bois-décapage du sérum. Se il n&#39;y a pas de différence entre les résultats de contrôle et de sérum de charbon-dépouillé, alors le test ne serait pas la peine de poursuivre. L&#39;essai porte également sur les résultats de chimiotactiques individuels ainsi que des suppresseurs de chimiotaxie. En outre, dans la comparaison des résultats possibles (figure 3), nous avons utilisé l&#39;écart-type que le niveau de l&#39;erreur expérimentale accepté pour chaque expérience. Cependant, la réelle values peuvent être déterminées par l&#39;enquêteur sur la base de l&#39;écart-type ou erreur-type et une valeur de p significative. En outre, les informations glanées à partir de cette analyse pourrait se avérer utile dans la conception d&#39;inhibiteurs pharmacologiques de certaines voies de signalisation. Par exemple, si une ou plusieurs hormones, facteurs de croissance, et / ou des cytokines se trouve être impliquée dans le mécanisme d&#39;invasion d&#39;une mutation des cellules tumorales particulier, qu&#39;un agent pharmacologique existant peut être utilisé ou un nouveau médicament conçu pour inhiber cette voie. L&#39;essai est également un outil efficace pour l&#39;étude de la mutation d&#39;une tumeur particulier et si la modification du résidu d&#39;acide aminé ou sa position maintient la même affinité pour la chimio-attractive qui a été identifié par cet essai. De cette façon, notre analyse offre une nouvelle approche à fournir des indices sur le mécanisme d&#39;invasion des cellules cancéreuses et peut-être des méthodes pour prévenir l&#39;invasion tumorale.

Un nouveau dosage d&#39;invasion a été développé dans le but d&#39;identifier l&#39;implication de certaines hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance chimiotactiques comme dans l&#39;invasion des cellules cancéreuses. La capacité des cellules tumorales à envahir à travers la matrice extracellulaire (ECM) est une caractéristique du phénotype métastatique 3.1. chambres d&#39;invasion ont été largement utilisés comme outils pour étudier in vitro l&#39;invasion des cellules cancéreuses et la migration et peuvent fournir des connaissances sur les mécanismes de l&#39;invasion et la métastase tumorales in vivo. Les chambres sont constituées d&#39;inserts de culture de cellules cylindriques emboîtés dans les puits de plaques de culture de cellules. Le fond des inserts en polycarbonate ou polystyrène sont des membranes semi-perméables des tailles de pores définies. Dans l&#39;essai d&#39;invasion standard, les cellules sont ensemencées sur la membrane de l&#39;insert avec du milieu sans sérum et on les place dans des puits de culture de cellules qui sont remplis de sérum ou de sérum comme agents chimio-attractifs pour set jusqu&#39;à un chimioattractives vigueur. Cela conduit de force cellules de se déplacer à travers la membrane semi-perméable (migration) ou encore, par un revêtement de la matrice extracellulaire (invasion), qui peut ensuite être teinté avec des colorants classiques pour détecter et quantifier le nombre de cellules. Le nombre de cellules est ensuite normalisée en fonction de l&#39;étendue de la migration et de l&#39;invasion dans une lignée cellulaire non invasive. Cette méthode permet à un chercheur d&#39;évaluer le potentiel invasif de différents types de cellules dans une variété de conditions, y compris les manipulations génétiques. Les hormones, les cytokines et les facteurs de croissance sont des éléments essentiels de sérum et sont représentés plus en plus à être associé à l&#39;entraînement du phénotype invasif 4. Cependant, la nature, le rôle et la spécificité de ces molécules sériques chimioattractives dans la médiation invasion encore demeurent insaisissables. Le défi reste à déterminer quels facteurs spécifiques dans le sérum ou de sérum comme chimioattractifs sont responsables de la conduiteinvasion des cellules cancéreuses ainsi que des molécules qui peuvent inhiber le processus d&#39;invasion. Dans ce rapport, nous décrivons une méthodologie pour évaluer l&#39;implication potentielle des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance présents dans le sérum, en tant que molécules de conduire l&#39;chimioattraction et l&#39;invasion des cellules cancéreuses. Dans ce protocole modifié proposé, le charbon de décapage est utilisé pour éliminer les hormones, les cytokines et les facteurs de croissance de 2% de sérum bovin fœtal (FBS) pour générer 2% FBS charbon de bois (CS-FBS). Les deux 2% de FBS et 2% CS-FBS sont utilisés comme agents de mettre en place la force chimioattractives à conduire l&#39;invasion des cellules cancéreuses. Utilisation de 2% de CS-FBS comme agent chimio-attractifs par rapport à la normale 2% de FBS offre plusieurs avantages, y compris d&#39;une part, et le plus en évidence, la possibilité d&#39;étudier le phénotype d&#39;invasion du cancer en l&#39;absence réduit / relative des hormones, des cytokines et des facteurs de croissance. Il permet également à l&#39;enquêteur de déterminer si l&#39;élimination collective des hormones, facteurs de croissance, et CYtokines entraîne une augmentation ou diminution de l&#39;indice invasive. Le dosage est alors conçue pour déterminer si l&#39;addition d&#39;un composant individuel, désignée comme «X» peut inhiber, diminuer, augmenter ou rétablir l&#39;indice invasive à sa valeur initiale (voir les figures 2 et 3). Bien que cette méthodologie est spécifique pour atteindre les niveaux physiologiques de l&#39;élément qui est éliminée à partir du sérum au cours de charbon décapage, il convient également de noter que le charbon de décapage peut aussi affecter les voies de transduction du signal. Par exemple, il a été rapporté que le charbon de décapage peut diminuer l&#39;activité de la phosphatase alcaline de cellules ostéoprogénitrices et induire l&#39;adipogenèse par la réduction des activateurs de 5 MAPK. Charcoal médias dénudées sont commercialement disponibles et sont basés sur le protocole décrit qui combine charbon dextran et incubées avec du sérum fœtal bovin O / N 6. Cet essai a été développé en Response à un résultat rapporté par Zucker et al. 7 Les auteurs ont démontré que le phénotype mutant affectant une communication écart de jonction fait preuve d&#39;une augmentation de l&#39;indice d&#39;invasion lors de la migration vers la normale médias avec 2% de FBS. Cette augmentation a été éliminée avec le remplacement de sérum de charbon-dépouillé. De ce fait, les auteurs ont conclu que ce mutant affecté migration vers une molécule lipophile (plus spécifiquement, une hormone, un facteur de croissance ou cytokines) 7. Il est bien connu que les hormones, facteurs de croissance, cytokines et médiateurs voies impliquées dans la promotion de la tumeur et invasion quatre signalisation. Ainsi, il est important pour les chercheurs scientifiques pour déterminer quel facteur (s) sont le moteur de l&#39;invasion tumorale des cellules cancéreuses ou des mutants particulier à l&#39;étude. L&#39;essai est conçu pour examiner le rôle des composants individuels lors de leur concentration physiologique telle que déterminée en fonction de la différence entre la concentration du composant et# 8220; X &quot;dans FBS normale et le CS-FBS. Grâce au développement de ce test, les enquêteurs peuvent gagner plus de perspicacité dans la voie invasive spécifique régissant leur système. Des hormones, des facteurs de croissance, cytokines et ont souvent été considérés comme des promoteurs de tumeurs 8. Certains de ces facteurs tels que EGF sont utilisés comme sources directes pour chimioattractifs dans des chambres d&#39;invasion neuf. Ainsi, il semble probable que ceux-ci représentent les principales composantes du sérum qui invasion tumorale directe. Ce protocole propose un moyen simple, mais significative, de la modification de l&#39;essai in vitro classique dans d&#39;invasion qui permet à un chercheur pour évaluer l&#39;implication des hormones, des facteurs de croissance, des cytokines dans la médiation et le potentiel invasif des cellules cancéreuses. Cependant, le test est conçu pour fournir à l&#39;enquêteur une réponse quant à savoir si la procédure sera efficace pour leur étude à une étape précoce dans l&#39;analyse, afin de ne pas utiliser un temps précieux et ressources si jugées inutiles. Cette méthode utilise CS-FBS et se appuie sur la discrétion des enquêteurs à laquelle les molécules de poursuivre en tant que candidats de plomb qui interviennent potentiellement invasion des cellules cancéreuses. Les résultats de ces analyses devraient se avérer utiles dans l&#39;identification des composants du sérum qui servent d&#39;agents chimio-attractifs ou des inhibiteurs de la lignée cellulaire particulière ou un mutant de l&#39;étude. En outre, cette approche peut aider l&#39;enquêteur d&#39;identifier les voies de signalisation clés soit favoriser ou inhiber l&#39;invasion des cellules cancéreuses; dirigeant ainsi l&#39;avenir la conception de médicaments.

<table><tbody><tr><td>BioCoat Control Inserts with 8.0 &amp;micro;m PET membrane</td><td>Corning</td><td>354578</td><td>12 in each of two 24-well plates. PET = polyethylene teraphthalate</td></tr><tr><td>Collagen I, rat tail</td><td>Corning</td><td>354236</td><td>Source = rat tail tendon, purity = 90%</td></tr><tr><td>Fixative; Diff-Quick</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NC9844047</td><td>Methanol-based fixative, hematoxylin/eosin</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Life Technologies</td><td>16000</td><td>Designated as FBS</td></tr><tr><td>Charcoal stripped fetal bovine serum</td><td>Life Technologies</td><td>12676</td><td>Designated as CS-FBS</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Thermo Scientific Hyclone</td><td>SH30070</td><td>Designated as FBS</td></tr><tr><td>Charcoal stripped fetal bovine serum</td><td>Thermo Scientific Hyclone</td><td>SH30068</td><td>Designated as CS-FBS</td></tr></tbody></table>

a modified in vitro invasion assay to determine the potential role of hormones, cytokines and/or growth factors in mediating cancer cell invasion

Le sérum sanguin sert de chimioattractant vers laquelle les cellules cancéreuses migrent et envahissent, ce qui facilite leur intravasation en microvaisseaux. Cependant, les molécules réelles vers lequel les cellules migrent demeurent insaisissables. Ce test d&#39;invasion modifié a été mis au point pour identifier les cibles qui entraînent la migration et l&#39;invasion cellulaire. Cette technique compare l&#39;indice d&#39;invasion dans trois conditions pour déterminer si une hormone spécifique, le facteur de croissance ou cytokine joue un rôle dans la médiation le potentiel invasif d&#39;une cellule cancéreuse. Ces conditions comprennent i) de sérum fœtal bovin normal (FBS), ii) charbon-FBS (CS-FBS), qui supprime les hormones, les facteurs de croissance et des cytokines et iii) molécule CS-FBS + (notée &quot;X&quot;). Un changement important dans l&#39;invasion des cellules CS-FBS avec par rapport à FBS, indique l&#39;implication des hormones, des cytokines ou des facteurs de croissance dans la médiation de la modification. Les molécules individuelles peuvent ensuite être ajoutés revenir à CS-FBS pour doser leur capacité à reverset ou sauver le phénotype d&#39;invasion. En outre, deux ou plusieurs éléments peuvent être combinés pour évaluer l&#39;effets additifs ou synergiques de plusieurs molécules dans la conduite ou l&#39;inhibition de l&#39;invasion. Dans l&#39;ensemble, ce procédé permet au chercheur de déterminer si les hormones, les cytokines et les facteurs de croissance / ou jouent un rôle dans l&#39;invasion cellulaire en agissant comme agents chimio-attractifs ou des inhibiteurs de l&#39;invasion d&#39;un type particulier de cellule cancéreuse ou un mutant spécifique. En identifiant chimiotactiques et des inhibiteurs spécifiques, ce dosage d&#39;invasion modifié peut aider à élucider les voies qui dirigent l&#39;invasion des cellules du cancer de signalisation.

L&#39;indice d&#39;invasion est calculé pour chaque condition de normalisation selon l&#39;une lignée cellulaire non invasive. Pour les expériences, on utilise la ligne 1205Lu cellulaire de mélanome et les lignées cellulaires stables variantes établi comme nos lignes envahissantes ainsi que la variante non invasive prémalignes, WM793 partir duquel les cellules ont été dérivées 1205Lu 10 qui sert de contrôle logique. Nous utilisons également collagène I que la matrice d&#39;invasion parce que ce est le composant principal du derme. Ceci est en accord avec une étude précédente de sorte que la matrice d&#39;invasion optimale varie en fonction de la lignée cellulaire et le degré de concordance avec les résultats 11 in vivo. Ce test d&#39;invasion est décrit schématiquement selon les résultats possibles l&#39;enquêteur peut obtenir. Initialement, l&#39;indice d&#39;invasion pour 2% FBS devrait être sensiblement supérieur ou inférieur à l&#39;indice d&#39;invasion pour CS-FBS afin de poursuivre cet essai (figures 1 et 2). Si un incr importantla facilité ou la diminution de l&#39;indice d&#39;invasion est apparente avec du charbon-FBS, ce test ne est pas utile pour l&#39;enquêteur (figures 2 et 3). Si cette augmentation est éliminé avec du charbon-FBS, l&#39;investigateur a déjà la connaissance que l&#39;invasion améliorée est dirigée vers une hormone, un facteur de croissance ou une cytokine (figures 2 et 3). Ensuite, l&#39;enquêteur doit utiliser des informations sur le type spécifique de la tumeur et la mutation pour déterminer quel candidat (s) mécanismes plausibles présents que chimioattractifs. L&#39;investigateur peut commencer en essayant une ou plusieurs composantes individuellement à la concentration physiologique en ajoutant la composante à la différence de concentration entre 2% de FBS et 2% de CS-FBS (tableau 1). Si un composant ajouté à du sérum de charbon-dépouillé augmente de manière significative de la diminution du potentiel d&#39;invasion par rapport au sérum de charbon-dépouillé seul, ce candidat, &quot;X&quot;, peut servir partielle ousauveteur totale selon le degré d&#39;augmentation (figures 2 et 3). Deux composants ou plus peuvent être combinées pour atteindre une croissance additive ou synergique, (dénotés par X 1 + X 2 + X 3 ...) (Figure 3). Un facteur qui diminue l&#39;étendue de l&#39;invasion serait considéré comme un facteur d&#39;inhibition (figures 2-4). Dans nos expériences, nous avons montré que l&#39;utilisation d&#39;une lignée cellulaire de mélanome mutant (1205Lu de T154A) de migrer vers un chimioattractant avec ses hormones, des facteurs de croissance, des cytokines et retirées entraîné une diminution de l&#39;invasivité des tumeurs. Trois hormones ont été testées afin d&#39;identifier un éventuel &quot;X&quot;. Il se agit notamment des œstrogènes (estradiol), la progestérone, l&#39;hormone thyroïdienne et (T4). Deux de ces hormones ne avaient pas d&#39;effet sur ​​l&#39;indice d&#39;invasion (de la progestérone et de l&#39;hormone de la thyroïde), tandis que l&#39;oestrogène a été identifié comme facteur dans inhibitrice (figure 4). Selon les résultats potentiels énumérés dansLa figure 3, les résultats expérimentaux de cet exemple démontrer une diminution par deux et un état ​​d&#39;inhibition à la condition 3. Il est probable que l&#39;oestrogène est utilisé en outre en ce dosage, car il peut être important dans l&#39;identification des voies qui séquestrer certains facteurs de signalisation pour les futures stratégies de conception de médicaments. Des expériences supplémentaires seront dirigés sur les facteurs de croissance et cytokines d&#39;identifier d&#39;autres composants qui peuvent servir de «sauvetage» chimioattractifs phénotype pro-invasion. Identification de deux molécules pro-invasives et inhibitrices peut collectivement élucider le potentiel invasif des lignées cellulaires et des variantes mutantes sous enquête. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/51480/51480fig1.jpg" /> Figure 1. Dispositif expérimental et le design. Modèle de la mis en place pour le processus expérimental montrant cellules étalées soit sur ​​la membrane PET directement ou la ccouche ollagen dans un milieu sans sérum. Les cellules sont soit migrent ou d&#39;envahir à travers la matrice de collagène vers un chimioattractive qui est modifié selon le protocole et décrit comme Condition 1, 2, et 3. Les cellules migrés ou envahies sont ensuite fixées et colorées. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51480/51480fig1large.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une plus grande version de ce chiffre.</a> <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/51480/51480fig2.jpg" /> Figure 2. Les résultats potentiels de l&#39;un résultat standard de la membrane de dosage d&#39;invasion. Ce modèle démontre les résultats potentiels que l&#39;enquêteur peut rencontrer pour le dosage de l&#39;invasion et de la façon d&#39;interpréter ces résultats. Chaque cercle est un résultat représentatif d&#39;un filtre coloré en utilisant les mêmes trois conditions qui sont décrites sur la figure 1. Chaque point représente une cellule qui a traversé l&#39;invasionla matrice et colorées sur le fond de la membrane. Les cellules seraient quantifiées comme il convient et analysées en conséquence. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51480/51480fig2large.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/51480/51480fig3.jpg" /> Figure 3. L&#39;interprétation des données pour l&#39;invasion avec CS-FBS ± X. Ce schéma décrit comment les calculs de l&#39;indice Invasion déterminent les conclusions expérimentales. CS-FBS est le sérum de charbon de bois dénudés et X se réfère aux composants individuels ajoutés aux médias CS-FBS décrites dans le texte. Les auteurs ont fixé l&#39;écart-type (sd) que la variabilité accepté dû à une erreur expérimentale dans nos conditions. Toutefois, en fonction des conditions sous observation et le nombre de répétitions, ce facteur peut être ajusté pour être dans la plage de étatiqueical importance pour le chercheur. L&#39;expérience peut être répétée avec de multiples molécules «X», (notée X 1 + X 2 + X 3 ...). <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51480/51480fig3large.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/51480/51480fig4.jpg" /> Figure 4. Résultats de l&#39;essai d&#39;invasion. Ce graphique représente les résultats expérimentaux obtenus en utilisant une ligne cellulaire mutante variante établi à partir de trois 1205Lu cellules de mélanome métastatique. Les concentrations des hormones ajoutées sont les suivants: l&#39;oestrogène (0,566 pg / ml), de la progestérone (0,001 ng / ml), l&#39;hormone de la thyroïde (0,283 ug / dl). Le contrôle, la lignée cellulaire non invasive utilisée pour ces expériences était WM793B. Cette expérience a été répétée trois fois avec des résultats similaires, et un graphe représentatif est montré. <tableborder = cellpadding &quot;0&quot; = &quot;0&quot; cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td colspan="2" style="padding-left:2px;padding-right:2px"></td><td style="width:41px"> Unités </td><td style="width:52px;padding-left:4px;padding-right:4px"> Défini FBS </td><td> CS FBS </td><td style="padding-left:4px;padding-right:2px"> Différence </td><td style="width:70px"> [2% de FBS] - [2% CS-FBS] </td><td style="width:85px"> Source </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td rowspan="5" style="padding-left:4px;padding-right:2px"> Hormones </td><td style="padding-left:7px;padding-right:4px"> Œstrogène (estradiol) </td><td> pg / ml </td><td> 28,30 </td><td> 8,76 </td><td> 19,540 </td><td> 0,566 </td><td rowspan="5"> Life Technologies FBS cat # 16000 cs FBS cat # 12676 </td><td> Sigma E2257 </td></tr><tr><td> Insuline </td><td> uIU / ml </td><td> 8,61 </td><td style="padding-left:4px;padding-right:2px"> inaperçue </td><td> 8,610 </td><td> 0,172 </td><td> Sigma I3536 </td></tr><tr><td> Progestérone </td><td> ng / ml </td><td> 0,05 </td><td style="padding-left:4px;padding-right:2px"> inaperçue </td><td> 0,050 </td><td> 0,001 </td><td> Sigma P8783 </td></tr><tr><td> La testostérone </td><td> ng / ml </td><td> 0,10 </td><td style="padding-left:4px;padding-right:2px"> inaperçue </td><td> 0,100 </td><td> 0,002 </td><td> Sigma T1500 </td></tr><tr><td> Hormone thyroïdienne (T4) </td><td> ug / dl </td><td> 14,14 </td><td style="padding-left:4px;padding-right:2px"> inaperçue </td><td> 14,140 </td><td> 0,283 </td><td> Sigma T1775 </td></tr><tr><td rowspan="3"> Facteurs de Croissance </td><td> IGF </td><td> ng / ml </td><td> 111,00 </td><td> 49,30 </td><td> 61,70 </td><td> 1,23 </td><td rowspan="3"> Thermo Scientific Hyclone <br/&gt; FBS CAT # SH30070 cs FBS CAT # SH30068 </td><td> Sigma I3769 </td></tr><tr><td> TGF-β </td><td> ng / ml </td><td> 12,60 </td><td> 7,30 </td><td> 5,30 </td><td> 0,11 </td><td> Sigma SRP3170 </td></tr><tr><td> FGF-2 </td><td> pg / ml </td><td> 37,30 </td><td> 32,70 </td><td> 4,60 </td><td> 0,09 </td><td> Sigma SRP4037 </td></tr><tr><td colspan="2"></td><td> Unités </td><td style="padding-left:6px;padding-right:2px"> Sérums humains </td><td colspan="3"></td><td> Source </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td rowspan="4" style="padding-left:4px;padding-right:2px"> Cytokines </td><td> G-CSF </td><td> pg / ml </td><td> 14,7 ± 13,2 </td><td colspan="3" rowspan="4"> N / A </td><td rowspan="4"> PMID: 21774806 </td><td> Sigma SRP3331 </td></tr><tr><td> GM-CSF </td><td> pg / ml </td><td> 40.9 ± 108,6 </td><td> Sigma SRP3201 </td></tr><tr><td> MCP 1 </td><td> pg / ml </td><td style="padding-left:7px;padding-right:4px"> 213,5 ± 100,7 </td><td> Sigma SRP3109 </td></tr><tr><td> TGF-α </td><td> pg / ml </td><td> 3,2 ± 4,0 </td><td> Sigma T7924 </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Exemples de gammes de concentration de sélectionner des hormones, des facteurs de croissance et des cytokines dans le sérum humain et bovin. La différence de concentration entre 2% de FBS et 2% de CS-FBS représente la quantité ajoutée pour atteindre des concentrations physiologiques.

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A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

This video article describes a modified in vitro method to examine the role of hormones, cytokines and/or growth factors in driving cancer cell invasion.

Une modification<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion Test pour déterminer le rôle potentiel des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance dans le cancer Médiation invasion cellulaire

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

10.7K vues.  Roswell Park Cancer Institute. This video article describes a modified in vitro method to examine the role of hormones, cytokines and/or growth factors in driving cancer cell invasion.

Vidéo: A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. Traditional 3D assays such as the Boyden Chamber require that cells are displaced from the original culture location and moved to a new environment. Not only does this disrupt the cellular processes that are intrinsic to the microenvironment, but it often results in a loss of cells. These problems are especially challenging when dealing with cells that are either rare, or extremely sensitive to their microenvironment. Here, we describe the development of a 3D invasion assay that avoids both concerns. In this assay, cells are plated within a small well and an ECM matrix containing a chemoattractant is laid atop the cells. This requires no cell displacement, and allows the cells to invade upwards into the matrix. In this assay, cell invasion as well as cell morphology can be assessed within the collagen gel. Using this assay, we characterize the invasive capacity of rare and sensitive cells; the hybrid cells resulting from fusion between breast cancer cells MCF7 and mesenchymal/multipotent stem/stroma cells (MSCs).

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

This protocol describes an inverted vertical invasion assay that could be used to quantify the migration and invasion capabilities of cells in a three-dimensional setting while preserving the cell microenvironment. This assay is suitable for rare and/or sensitive cells.

Déplacement vers le haut : Un Simple et Flexible In Vitro Invasion en trois dimensions Assay protocole

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis at later stage1,2. Moreover, TGF-&beta; is frequently overexpressed in breast cancer and its expression correlates with poor prognosis and metastasis 3,4. The mechanisms by which TGF-&beta; induces invasion are not well understood.
TGF-&beta; elicits its cellular responses via TGF-&beta; type II (T&beta;RII) and type I (T&beta;RI) receptors. Upon TGF-&beta;-induced heteromeric complex formation, T&beta;RII phosphorylates the T&beta;RI. The activated T&beta;RI initiates its intracellular canonical signaling pathway by phosphorylating receptor Smads (R-Smads), i.e. Smad2 and Smad3. These activated R-Smads form heteromeric complexes with Smad4, which accumulate in the nucleus and regulate the transcription of target genes5. In addition to the previously described Smad pathway, receptor activation results in activation of several other non-Smad signaling pathways, for example Mitogen Activated Protein Kinase (MAPK) pathways6.
To study the role of TGF-&beta; in different stages of breast cancer, we made use of the MCF10A cell system. This system consists of spontaneously immortalized MCF10A1 (M1) breast epithelial cells7, the H-RAS transformed M1-derivative MCF10AneoT (M2), which produces premalignant lesions in mice8, and the M2-derivative MCF10CA1a (M4), which was established from M2 xenografts and forms high grade carcinomas with the ability to metastasize to the lung9. This MCF10A series offers the possibility to study the responses of cells with different grades of malignancy that are not biased by a different genetic background.
For the analysis of TGF-&beta;-induced invasion, we generated homotypic MCF10A spheroid cell cultures embedded in a 3D collagen matrix in vitro (Fig 1). Such models closely resemble human tumors in vivo by establishing a gradient of oxygen and nutrients, resulting in active and invasive cells on the outside and quiescent or even necrotic cells in the inside of the spheroid10. Spheroid based assays have also been shown to better recapitulate drug resistance than monolayer cultures11. This MCF10 3D model system allowed us to investigate the impact of TGF-&beta; signaling on the invasive properties of breast cells in different stages of malignancy.

An assay to quantitatively measure Transforming Growth Factor (TGF)-&#x03B2;-induced invasion in 3-dimensional collagen gels is described. This assay takes advantage of the MCF10A series of cell lines, which represent different stages of breast cancer development. This method can be adopted to be used with other cell lines and might be used to investigate other potential activators or inhibitors of invasion.

Assay Sphéroïde pour mesurer le TGF-β induit Invasion

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

Médecine

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a porous membrane in a process analogous to the initial steps of cancer cell metastasis. The tested cells can be altered for the gene expression or treated with inhibitors to test for changes in the invasion potential. This experiment tests the aggressive phenotype of the mouse mammary tumor cells to discover and characterize the potential oncogenes that promote cell invasion. This technique, however, can be versatile and adapted to many different applications. The experiment itself can be done in one day and the results are acquired by light microscopy in less than a day. The results include counts of the number of invading cells for comparison and analysis. The in vitro invasion assay is a rapid, inexpensive, and clear-cut method for determining cell behavior in a culture that can be used as an initial assessment before more involved in vivo assays.

The in vitro cell invasion assay is used to measure the potential of cancer metastasis by quantifying the cellular potential for invasion and migration using cell culture inserts containing protein matrix. Cells are challenged to migrate through the protein matrix and a porous membrane, towards a chemoattractant, and then quantified by light microscopy.

L'utilisation de cellules de tumeur mammaire de souris dans un analyse d'invasion in vitro comme mesure du comportement cellulaire oncogène

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...

Génétique

Monitoring Cancer Cell Invasion and T-Cell Cytotoxicity in 3D Culture

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited number of assays allow for direct monitoring and mechanistic insights into the interactions between tumor and immune cells, amongst which, T-cells play a significant role in executing the cytotoxic response of the adaptive immune system to cancer cells. Most assays are based on two-dimensional (2D) co-culture of cells due to the relative ease of use but with limited representation of the invasive growth phenotype, one of the hallmarks of cancer cells. Current three-dimensional (3D) co-culture systems either require special equipment or separate monitoring for invasion of co-cultured cancer cells and interacting T-cells.
Here we describe an approach to simultaneously monitor the invasive behavior in 3D of cancer cell spheroids and T-cell cytotoxicity in co-culture. Spheroid formation is driven by enhanced cell-cell interactions in scaffold-free agarose microwell casts with U-shaped bottoms. Both T-cell co-culture and cancer cell invasion into type I collagen matrix are performed within the microwells of the agarose casts without the need to transfer the cells, thus maintaining an intact 3D co-culture system throughout the assay. The collagen matrix can be separated from the agarose cast, allowing for immunofluorescence (IF) staining and for confocal imaging of cells. Also, cells can be isolated for further growth or subjected to analyses such as for gene expression or fluorescence activated cell sorting (FACS). Finally, the 3D co-culture can be analyzed by immunohistochemistry (IHC) after embedding and sectioning. Possible modifications of the assay include altered compositions of the extracellular matrix (ECM) as well as the inclusion of different stromal or immune cells with the cancer cells.

The presented approach simultaneously evaluates cancer cell invasion in 3D spheroid assays and T-cell cytotoxicity. Spheroids are generated in a scaffold-free agarose multi-microwell cast. Co-culture and embedding in type I collagen matrix are performed within the same device which allows to monitor cancer cell invasion and T-cell mediated cytotoxicity.

Surveillance de l’invasion des cellules cancéreuses et de la cytotoxicité des lymphocytes T dans la culture 3D

Significant progress has been made in treating cancer with immunotherapy, although a large number of cancers remain resistant to treatment. A limited ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not accurately model the behaviors of cancer cells within a nonadherent environment, as cancer cells inherently aggregate into multicellular structures which contribute to the metastatic process by attaching to and invading the peritoneal lining to form secondary tumors. To model this important stage of ovarian cancer metastasis, multicellular aggregates, or spheroids, can be generated from established ovarian cancer cell lines maintained under nonadherent conditions. To mimic the peritoneal microenvironment encountered by tumor cells in vivo, a spheroid-mesothelial co-culture model was established in which preformed spheroids are plated on top of a human mesothelial cell monolayer, formed over an extracellular matrix barrier. Methods were then developed using a real-time cell analyzer to conduct quantitative real time measurements of the invasive capacity of different ovarian cancer cell lines grown as spheroids. This approach allows for the continuous measurement of invasion over long periods of time, which has several advantages over traditional endpoint assays and more laborious real time microscopy image analyses. In short, this method enables a rapid, determination of factors which regulate the interactions between ovarian cancer spheroid cells invading through mesothelial and matrix barriers over time.

Ovarian cancer cell invasion into the mesothelial lining of the peritoneum is a dynamic process over time. Utilizing a real time analyzer, the invasive capacity of ovarian cancer cells in a spheroid-mesothelial cell co-culture model can be quantified over prolonged time periods, providing insights into factors regulating the metastatic process.

Évaluation de Cancer de l&#39;ovaire Spheroid attachement et l&#39;invasion des cellules mésothéliales en temps réel

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Modèles 3D en biologie du cancer : dynamique d’invasion chez les hétérosphéroïdes

Alternative Strategy to Analyze In Vitro Cell Invasion of 3D Cultures

Spheroid culture is a 3D model that provides an improved replication of the in vivo microenvironment compared to traditional two-dimensional (2D) cultures. Invasion is a cellular outcome of utmost interest in cancer biology. In this protocol, we have devised an alternative strategy for evaluating cancer cell invasion in vitro, employing heterospheroids comprised of oral squamous cell carcinoma (OSCC), cancer-associated fibroblasts (CAF), and monocytes. These heterospheroids aim to mimic the tumor microenvironment (TME), including two relevant non-neoplastic cell types alongside the cancer cells. Each cell type was labeled with vital fluorescent markers emitting in distinct wavelengths before spheroid formation. Once formed, heterospheroids were seeded onto a layer of human leiomyoma-derived extracellular matrix in the upper compartment of a microporous membrane. Invasion was assessed in the z-axis using confocal microscopy. Digital images were obtained in the corresponding fluorescent channels at 10 &#181;m intervals, covering a depth of 90 &#181;m in the z-axis. Analysis was performed using freeware image software by calculating the integrated fluorescence intensity in each image and fluorescence channel. This approach enables a more dynamic analysis of cell invasion patterns in a multilayered context, as well as the examination of spatial co-localization of different cell types during invasion.

Pleins feux sur l’auteur : Déchiffrer l’interaction entre le cancer et les cellules immunitaires au cours de la progression du cancer de la tête et du cou

Invasion is a major biological phenomenon in the development and progression of cancer. This process is influenced by non-neoplastic cells and components of the tumor microenvironment. The purpose of this study is to describe an alternative method for analyzing tumor cell invasion in vitro using three-dimensional (3D) cultures.

Stratégie alternative pour analyser l’invasion cellulaire in vitro de cultures 3D

Spheroid culture is a 3D model that provides an improved replication of the in vivo microenvironment compared to traditional two-dimensional (2D) ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in particular (e.g., brain tumors such as glioblastoma multiforme and squamous cell carcinoma of the head and neck &#8211; SCCHN) it is a cause of severe morbidity and can be life-threatening even in the absence of distant metastases. In addition, cancers which have relapsed following treatment unfortunately often present with a more aggressive phenotype. Therefore, there is an opportunity to target the process of invasion to provide novel therapies that could be complementary to standard anti-proliferative agents. Until now, this strategy has been hampered by the lack of robust, reproducible assays suitable for a detailed analysis of invasion and for drug screening. Here we provide a simple micro-plate method (based on uniform, self-assembling 3D tumor spheroids) which has great potential for such studies. We exemplify the assay platform using a human glioblastoma cell line and also an SCCHN model where the development of resistance against targeted epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors is associated with enhanced matrix-invasive potential. We also provide two alternative methods of semi-automated quantification: one using an imaging cytometer and a second which simply requires standard microscopy and image capture with digital image analysis.

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is a defining characteristic of malignant tumors. We provide here a simple, semi-automated micro-plate assay of invasion into a natural 3D biomatrix that has been exemplified with a number of models of advanced human cancers.

Tridimensionnelle (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish between invasive and non-invasive cells, and enables study of the effects of test compounds on tumor invasion. Cancer cells - either as aggregates or single cells - are confronted with fragments of embryonic chick heart. After organ culture in suspension for a few days or weeks the confronting cultures are fixed and embedded in paraffin for histological analysis. The three-dimensional interaction between the cancer cells and the normal tissue is then reconstructed from serial sections stained with hematoxylin-eosin or after immunohistochemical staining for epitopes in the heart tissue or the confronting cancer cells. The assay is consistent with the recent concept that cancer invasion is the result of molecular interactions between the cancer cells and their neighbouring stromal host elements (myofibroblasts, endothelial cells, extracellular matrix components, etc.). Here, this stromal environment is offered to the cancer cells as a living tissue fragment. Supporting aspects to the relevance of the assay are multiple. Invasion in the assay is in accordance with the criteria of cancer invasion: progressive occupation and replacement in time and space of the host tissue, and invasiveness and non-invasiveness in vivo of the confronting cells generally correlates with the outcome of the assay. Furthermore, the invasion pattern of cells in vivo, as defined by pathologists, is reflected in the histological images in the assay. Quantitative structure-activity relation (QSAR) analysis of the results obtained with numerous potentially anti-invasive organic congener compounds allowed the study of structure-activity relations for flavonoids and chalcones, and known anti-metastatic drugs used in the clinic (e.g., microtubule inhibitors) inhibit invasion in the assay as well. However, the assay does not take into account immunological contributions to cancer invasion.

Here, we present a protocol to study the invasion of tumor cells into living normal tissue fragments in three dimensions. This organ culture technique is mainly applied to test potentially anti-invasive drugs in vitro.

Chick Coeur Invasion Assay pour tester les techniques invasives des cellules cancéreuses et l&#39;activité des composés potentiellement anti-invasives

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...

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