Nuestra investigación se centra en la fisiopatología del trastorno del espectro autista, TEA. Y específicamente, observamos los mecanismos moleculares involucrados en el TEA y qué causa los alteraciones del comportamiento. En conjunto, estos implicarán tratamientos específicos relacionados con el TEA y mejorarán la vida de las personas que lo padecen.
Uno de los desafíos de nuestra investigación es mejorar la investigación con el comportamiento relacionado con el TEA y comunicarlo entre los diferentes laboratorios. Hay mucha variación entre los diferentes laboratorios, cómo hacen las evaluaciones de comportamiento, y ese es un gran problema para avanzar en los tratamientos en el campo. Por lo tanto, esperamos que con nuestros protocolos podamos ayudar a estos avances y a la comunicación entre laboratorios de todo el mundo.
Al optimizar y detallar el acicalamiento y los protocolos de prueba de tres cámaras, establecemos un marco coherente en el que los investigadores pueden confiar para obtener resultados fiables y reproducibles a partir de modelos de ratones con TEA. Esta estandarización facilitará una mejor cooperación e interpretación de los hallazgos de diferentes laboratorios, lo que conducirá a una mejor comprensión de los TEA y al desarrollo de posibles terapias. Nuestro laboratorio está interesado en explicar el proceso de traducción específico del tipo de célula en el comportamiento similar al autismo.
Además, también estudiamos las posibles aplicaciones terapéuticas en modelos de ratón con TEA, como la metformina. Para empezar, encienda las luces atenuadas. Limpia la mesa y prepara la habitación.
Prepare cada jaula de prueba con una capa delgada de ropa de cama fresca. Coloque una o dos jaulas sobre la mesa, separadas entre sí y del entorno de la habitación por anteojeras de plástico blancas. Luego, coloque una cámara delante de cada jaula para capturar el ratón de prueba.
Cubra las jaulas con una sábana de tela y transfiera a todos los ratones a la habitación para evitar el estrés durante el proceso de transferencia. Una vez que los ratones estén colocados en la sala de pruebas, retire la sábana. Antes de que comience el experimento, déjelos en la habitación con luces tenues durante al menos 30 minutos.
Al comienzo de la prueba, anote el número de identificación del mouse y la información de la prueba en una pizarra. Coloque el ratón de prueba en la jaula con ropa de cama nueva. Comience a grabar y coloque el mouse de prueba en la jaula de prueba.
Sal de la habitación durante la sesión de grabación de 20 minutos. Después de 20 minutos, regrese a la habitación. Presente la pizarra a la cámara y detenga la grabación.
Vuelva a colocar el ratón de prueba en la jaula de la casa y repita el experimento. Después de los experimentos, regrese a los ratones a su habitación. La prueba de autoacicalamiento reveló un mayor tiempo de acicalamiento en los ratones knockout Eif4ebp2 en comparación con los ratones de control.
Los ratones knockout Eif4ebp2 exhibieron significativamente más episodios de acicalamiento que los ratones de control. Para comenzar, limpie la mesa y encienda las luces atenuadas. Coloque el instrumento de plexiglás de tres cámaras sobre la mesa rodeada de persianas de privacidad.
Coloque una cámara en el techo, asegurándose de que las tres cámaras estén en el marco de grabación de la cámara. Luego, transfiera los ratones de prueba y extraños a la habitación, cubriendo las jaulas con una sábana de tela durante el proceso de transferencia. Retire la sábana una vez que estén en la habitación.
Deje a los ratones en la habitación durante al menos 30 minutos con luz tenue antes del inicio del experimento. Mantenga las tres cámaras vacías durante la habituación. Después de seleccionar un mouse de prueba, escriba el número de identificación en la pizarra.
Coloque el mouse de prueba en el compartimento central mientras las puertas correderas permanecen cerradas. Abra las puertas y comience a grabar para permitir que el mouse de prueba explore las tres cámaras vacías durante 10 minutos. Después de 10 minutos, regrese a la habitación.
Guíe suavemente el ratón de prueba hasta el compartimento central y cierre las puertas correderas. Muestre la pizarra y detenga la cámara. Coloque dos jaulas de alambre en las cámaras izquierda y derecha en diagonal una frente a la otra en las esquinas de cada cámara.
Mida la distancia entre las jaulas y las paredes de la cámara. Asegúrese de que las jaulas no miren directamente hacia las puertas de la cámara. Elige un ratón extraño e introdúcelo en una de las jaulas de alambre, dejando la otra jaula vacía.
Para iniciar la prueba, presione grabar y retire ambas puertas correderas antes de salir de la habitación. Permita que el ratón de prueba explore una jaula de alambre vacía en una cámara y una jaula que contiene un ratón extraño en la otra cámara durante 10 minutos. Después de 10 minutos, regrese a la habitación.
Muestre la pizarra a la cámara y finalice la grabación. Vuelva a introducir el ratón en el compartimento central y cierre las puertas de interconexión. Coloque un ratón nuevo, nunca encontrado, en la jaula de alambre previamente vacía.
Comience a grabar y abra las puertas de interconexión para permitir que el mouse de prueba explore el aparato durante 10 minutos antes de salir de la habitación. El ratón de prueba explorará dos jaulas de alambre, una con el ratón S1 encontrado anteriormente y la otra con el ratón S2 recién introducido, durante 10 minutos. Después de 10 minutos, regrese a la habitación.
Muestre la pizarra a la cámara y finalice la grabación. Devuelve a todos los ratones a sus jaulas de origen. Limpie a fondo las cámaras y las jaulas de alambre con un desinfectante sin olor y seque el aparato antes del próximo experimento.
Después de la prueba, devuelva los ratones a la instalación de alojamiento. Los ratones preferían interactuar con S1 en lugar de con un nuevo objeto inanimado. Del mismo modo, los ratones C57BL/6J mostraron más interés en un S2 recién introducido que en un S1 familiar.
