En el modelo de filamento descrito aquí, la restauración completa del flujo sanguíneo y su registro, son requisitos para garantizar una afluencia producible entre ratones, especialmente en estudios traslacionales de accidente cerebrovascular. Este modelo tiene dos ventajas principales en comparación con otros modelos de carrera descritos anteriormente. No se requiere craneotomía y se logra una reperfusión completa del vaso sanguíneo.
El modelo de filamento es una intervención quirúrgica compleja que implica la manipulación del proceso de diferentes arterias. La visualización y explicación de todos estos son pasos pequeños pero importantes, podrían acelerar el período de aprendizaje de los neurocirujanos. Conecte la manta térmica para mantener la temperatura del área de operación y la temperatura corporal del ratón durante la anestesia a 37 grados centígrados.
Prepare tijeras y fórceps en autoclave, solución de etanol al 70% y ungüento para ojos dexpantenol, y mantenga varias piezas de algodón y sutura de poliéster trenzado recubierto five O, listos para usar. Prepare una solución salina al 0,9% en una jeringa de un mililitro sin aguja para mantener hidratado el sitio de la incisión. Prepare un soporte para la sonda Doppler láser cortando la punta de una punta de pipeta de 10 microlitros.
Una vez que el ratón esté completamente anestesiado, colóquelo en una posición prona en el área de operación. Inserte suavemente la sonda rectal para controlar la temperatura durante los procedimientos quirúrgicos. Después de desinfectar el sitio quirúrgico, corte este cuero cabelludo entre la oreja izquierda y el ojo para exponer el hueso del cráneo.
A continuación, corte y retire el músculo temporal para visualizar las múltiples arterias cerebrales o MCA debajo del cráneo. Fije la parte exterior de la punta que sostiene la sonda Doppler láser o la fibra en la parte superior del MCA izquierdo con pegamento y cierre la piel para que la piel también esté pegada. Aplique de dos a tres gotas de pegamento endurecedor para acelerar el proceso.
Asegúrese de que la fibra Doppler láser no esté pegada y se pueda quitar fácilmente del soporte de la punta en cualquier momento. Gire el ratón a la posición supina, luego coloque el hocico en el cono de anestesia y fije las patas con cinta adhesiva. Desinfecte la piel y el cabello que rodea el pecho y haga una incisión en la línea media de dos centímetros de largo en el cuello.
Use fórceps para separar la glándula submandibular de la piel y el músculo esternomastoideo. Use retractores para exponer el campo quirúrgico y encontrar la arteria carótida común izquierda o CCA. Diseccionar el CCA libre de tejido conectivo y nervios circundantes sin dañar el nervio vago y realizar una ligadura transitoria antes de la bifurcación.
Diseccionar la arteria carótida externa o ECA y atar un nudo permanente en la parte visible más distal. Coloque otra sutura debajo del ECA y cerca de la bifurcación, luego prepare un nudo suelto para usarlo más tarde. Diseccionar la arteria carótida interna o ICA y colocar un clip microvascular sobre ella unos cinco milímetros sobre la bifurcación.
Asegúrese de no dañar el nervio vago. Luego corte un pequeño orificio en el ECA entre las ligaduras apretadas y sueltas, asegurándose de no cortar todo el ECA. Introduce el filamento y avanza hacia el CCA.
Apriete la ligadura suelta en el ECA alrededor del lumen para asegurar momentáneamente el filamento en esa posición. Quitar el clip microvascular y prevenir el sangrado. Después de retirar el clip microvascular, inserte el filamento a través del ICA hasta que se alcance el origen del MCA.
Fije el filamento en esta posición apretando aún más el nudo alrededor del ECA. Registre los valores doppler del láser antes y después de la inserción del filamento. Retire el retractor y reubique el músculo esternomastoideo en la glándula submandibular antes de suturar la herida.
Retire la sonda Doppler láser y coloque al animal en una cámara de recuperación a 37 grados centígrados durante una hora. Coloque al ratón en posición prona en el área de operación con su hocico en la máscara de anestesia, luego fije las patas del animal con cinta adhesiva. Inserte la sonda Doppler láser en el soporte de la sonda.
Retire la sutura de la herida y use fórceps para separar la piel, la glándula submandibular y el músculo esternomastoideo. Use retractores para exponer el campo quirúrgico. Afloje la sutura ECA que aprieta el filamento y tire suavemente del filamento.
Evite dañar el recubrimiento de caucho de silicona del filamento durante la extracción. Registre los valores doppler del láser antes y después de la extracción del filamento. Ate firmemente la sutura ECA y confirme el aumento del flujo sanguíneo cerebral en el dispositivo Doppler láser.
Abra la ligadura transitoria antes de la bifurcación del CCA para restaurar el flujo sanguíneo completo. Retire el retractor y reubique el músculo esternomastoideo en la glándula submandibular antes de suturar la herida. Luego, coloque al animal en una cámara de recuperación a 37 grados centígrados durante una hora para recuperarse de la anestesia.
Después de la recuperación, los ratones regresan a sus jaulas en una habitación con temperatura controlada y cuidan a los animales agregando gránulos de comida húmeda e hidrogel en pequeñas placas de Petri en el piso de la jaula e inyectan analgesia cada 12 horas hasta el tercer día después de la cirugía. Una vez que se restaura el flujo sanguíneo en el CCA después de eliminar el filamento, se produce una reperfusión completa del cerebro, que es similar a la situación observada después de una trombectomía mecánica exitosa en pacientes humanos. Los animales con accidente cerebrovascular presentaron un cambio significativo en la puntuación neuro compuesta y focal, pero no en la puntuación neuro general en comparación con los animales simulados.
El volumen de infarto recuperado también se realizó mediante tinción de violeta cresol de secciones cerebrales seriadas coronales 24 horas después de la inducción del accidente cerebrovascular. El área de la lesión incluye la corteza somatosensorial y motora, así como las estructuras subcorticales, como el cuerpo estriado. La media del volumen de infarto fue de 61 a 62 milímetros cuadrados, lo que representa el 48% del hemisferio cerebral afectado.
Es importante realizar una disección adecuada del CCA, ECA y RCA sin causar daño al tejido adyacente, especialmente al nervio vago, para tener una buena visualización de todas las estructuras, y poder insertar el filamento y ocluir el origen MCA.
