Esta investigación fue financiada por becas-en-Ayudas a la Investigación Científica de la Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia (JSPS), Grant-in-Aid del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología de Japón, Grants-in- La ayuda de los AVE y la cresta de Japón Agencia de Ciencia y Tecnología, Grant-in-Aid de Neuroinformática Japan Center (NIJC), RIKEN y por la subvención-en-Ayudas a la Investigación Científica en la investigación del cerebro áreas prioritarias-Integrativa (Shien) - de MEXT en Japón. Damos las gracias a O&#39;hara &amp; Co. y Hayashi Mariko por su ayuda en la creación de esta película.

Protocolo <ol><li> El aparato utilizado para la prueba del laberinto más elevada está en la configuración de un + y consta de dos brazos abiertos (25 x 5 x 0,5 cm) a través de sí y perpendiculares a los dos brazos cerrados (25 x 5 x 16 cm) con un centro de plataforma (5 x 5 x 0,5 cm). Los brazos abiertos tienen una muy pequeña (0,5 cm) de la pared para disminuir el número de caídas, mientras que los brazos cerrados tienen un alto (16 cm) de la pared para encerrar el brazo. Todo el aparato es de 50 cm sobre el suelo (Ohara &amp; Co., de Tokio) y se coloca en un tanque vacío circular (100 cm de diámetro, 35 cm de altura, normalmente se utiliza para la tarea laberinto de Morris) para proteger a los ratones que caen o intento de escapar durante el experimento. El aparato está fabricado con materiales de plástico. La plataforma es de color blanco y las paredes son transparentes. Hay una variación en los materiales y los colores de los aparatos de laberinto elevado. </li><li> Los ratones se encuentran con una luz de 12 h / oscuridad ciclo (luces a las 7:00 AM), como se describió previamente (Takao y Miyakawa, 2006a). Las pruebas de comportamiento se lleva a cabo 09 a.m.-06:00 PM. Todos los ratones experimentales se transfieren a las pruebas de comportamiento sala 30 minutos antes del comienzo del primer juicio a habituarse a las condiciones de la sala de pruebas de comportamiento. El orden de los ensayos se compensa a través de los genotipos. Hay dos efectos de la prueba de ensayo con un animal de la práctica. Uno de ellos es para asegurarse de que todo está bien con el sistema de grabación. Otra es la de mantener la condición de prueba lo más uniforme posible. Es decir, el ratón muy por primera vez en toda la sesión sería condición experimentan algo diferente con los demás (es decir, no hay ruido previo realizado por las operaciones de prueba y no señales del olor de los ensayos previos), sin una prueba práctica. Los animales son mantenidos de acuerdo con las directrices del Comité de Investigación Animal de la Universidad de Kyoto. </li><li> La sala de pruebas de comportamiento (170 x 210 x 200 cm, Ohara &amp; Co., de Tokio) está insonorizada y el nivel de iluminación se mantiene a 100 lux. Se coloca un ratón en la zona centro del laberinto, con su cabeza dirigida hacia un brazo cerrado. La prueba de laberinto elevado se registra con una cámara de vídeo conectada a un ordenador, que es controlada por un dispositivo remoto. El número de entradas (una entrada se define como el centro de masa del mouse entra en el brazo) en cada brazo y el tiempo empleado en los brazos abiertos y se registran estas mediciones sirven como un índice de ansiedad-como comportamiento. </li><li> Los ratones se les permite moverse libremente por el laberinto durante 10 minutos. Cada ratón recibe una prueba de nuestra batería de pruebas. La aplicación que se utiliza para obtener y analizar los datos de comportamiento (imagen EP) se basa en el programa J dominio público de la imagen (desarrollado por Wayne Rasband en el Instituto Nacional de Salud Mental y está disponible en <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ ij /</a> ), que fue modificada por Tsuyoshi Miyakawa (disponible a través de O&#39;Hara &amp; Co., Tokio, Japón). </li><li> La distancia recorrida, el número de entradas en cada brazo, el tiempo empleado en cada brazo, y el porcentaje de entradas en los brazos abiertos son calculados por el programa EP imagen. </li><li> Después de cada ensayo, todas las armas y la zona centro se limpian con agua súper hipocloroso, que es un agente de eliminación de olores eficiente y tiene un olor relativamente débil de sí mismo en comparación con otras soluciones de limpieza, para evitar un sesgo sobre la base de señales olfativas. Por tanto, podemos realizar las pruebas bajo condiciones controladas con respecto a señales olfativas. </li></ol>

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	<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> J Vis Exp. , (2006).</li><li>Aiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liaison+for+integrative+brain+research.">Mouse liaison for integrative brain research.</a> Neurosci Res. 58, 103-104 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36, 921-924 (2004).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+gene-to-behavior+pathways+in+psychiatric+disorders:+the+use+of+a+comprehensive+behavioral+test+battery+on+genetically+engineered+mice.">Investigating gene-to-behavior pathways in psychiatric disorders: the use of a comprehensive behavioral test battery on genetically engineered mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 1086, 144-159 (2006).</li><li>Takao, K., Yamasaki, N., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+brain-behavior+phenotyping+of+genetically-engineered+mice+on+research+of+neuropsychiatric+disorders.">Impact of brain-behavior phenotyping of genetically-engineered mice on research of neuropsychiatric disorders.</a> Neurosci Res. 58, 124-1232 (2007).</li><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong With My Mouse? Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 240 (2007).</li><li>Rodgers, R. J., Dalvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiety,+defense+and+the+elevated+plus-maze.">Anxiety, defense and the elevated plus-maze.</a> Neurosci Behav Rev. 21, 801-810 (1997).</li><li>Handley, S. L., Mithani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alpha-adrenoceptor+agonists+and+antagonists+in+a+maze-exploration+model+of+'fear'-motivated+behaviour.">Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 324, 1-5 (1984).</li><li>Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+open:closed+arm+entries+in+an+elevated+plus-maze+as+a+measure+of+anxiety+in+the+rat.">Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat.</a> J Neurosci Meth. 14, 149-167 (1985).</li><li>File, S. E., Pellow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+triazolobenzodiazepines+in+two+animal+tests+of+anxiety+and+in+the+holeboard.">The effects of triazolobenzodiazepines in two animal tests of anxiety and in the holeboard.</a> Br J Pharmac. 86, 729-7235 (1985).</li><li>Lister, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+plus-maze+to+measure+anxiety+in+the+mouse.">The use of a plus-maze to measure anxiety in the mouse.</a> Psychopharmacology. 92, 180-185 (1987).</li><li>Miyakawa, T., Yagi, T., Kagiyama, A., Niki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radial+maze+performance,+open-field+and+elevated+plus-maze+behaviors+in+Fyn-kinase+deficient+mice:+further+evidence+for+increased+fearfulness.">Radial maze performance, open-field and elevated plus-maze behaviors in Fyn-kinase deficient mice: further evidence for increased fearfulness.</a> Brain Res Mol Brain Res. 37, 145-150 (1996).</li><li>Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cadherin-11+adhesion+receptor+enhances+plastic+changes+in+hippocampal+synapses+and+modifies+behavioral+responses.">Loss of cadherin-11 adhesion receptor enhances plastic changes in hippocampal synapses and modifies behavioral responses.</a> Mol Cell Neurosci. 15, 534-546 (2000).</li><li>Miyakawa, T., Yamada, M., Duttaroy, A., Wess, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+intact+hippocampus-dependent+learning+in+mice+lacking+the+M1+muscarinic+acetylcholine+receptor.">Hyperactivity and intact hippocampus-dependent learning in mice lacking the M1 muscarinic acetylcholine receptor.</a> J Neurosci. 21, 5239-5250 (2001).</li><li>Seeger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+muscarinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice+show+deficits+in+behavioral+flexibility,+working+memory,+and+hippocampal+plasticity.">M2 muscarinic acetylcholine receptor knockout mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity.</a> J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cocaine+responsiveness+and+impaired+motor+coordination+in+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+2+knockout+mice.">Enhanced cocaine responsiveness and impaired motor coordination in metabotropic glutamate receptor subtype 2 knockout mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102, 4170 (2005).</li><li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+in+Schwann+cells+of+peripheral+myelinated+axons:+a+lesson+from+claudin-19-deficient+mice.">Tight junctions in Schwann cells of peripheral myelinated axons: a lesson from claudin-19-deficient mice.</a> J Cell Biol. 169, 527-538 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFAT+dysregulation+by+increased+dosage+of+DSCR1+and+DYRK1A+on+chromosome+21.">NFAT dysregulation by increased dosage of DSCR1 and DYRK1A on chromosome 21.</a> Nature. 441, 595-600 (2006).</li><li>Hattori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments+influence+depression-related+behavior+in+adult+mice+and+the+survival+of+newborn+cells+in+their+hippocampi.">Enriched environments influence depression-related behavior in adult mice and the survival of newborn cells in their hippocampi.</a> Behav Brain Res. 180, 69-76 (2007).</li><li>Niemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+ablation+of+NMDA+receptor+subunit+NR3B+in+mouse+reveals+motoneuronal+and+non-motoneuronal+phenotypes.">Genetic ablation of NMDA receptor subunit NR3B in mouse reveals motoneuronal and non-motoneuronal phenotypes.</a> Europ J Neurosci. 26, 1407-1420 (2007).</li><li>Sano, H., Nagai, Y., Miyakawa, T., Shigemoto, R., Yokoi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+social+interaction+in+mice+deficient+of+the+striatal+medium+spiny+neuron-specific+phosphodiesterase+10A2.">Increased social interaction in mice deficient of the striatal medium spiny neuron-specific phosphodiesterase 10A2.</a> J Neurochem. 105, 546-556 (2008).</li><li>Horii, Y., Yamasaki, N., Miyakawa, T., Shiosaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+anxiety-like+behavior+in+neuropsin+(kallikrein-related+peptidase+8)+gene-deficient+mice.">Increased anxiety-like behavior in neuropsin (kallikrein-related peptidase 8) gene-deficient mice.</a> Behav Neurosci. 122, 498-504 (2008).</li><li>Fukuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+protocadherin-&#945;,+A+isoforms+in+mice+changes+contextual+fear+conditioning+and+spatial+working+memory.">Down-regulation of protocadherin-&#945;, A isoforms in mice changes contextual fear conditioning and spatial working memory.</a> Eur J Neurosci. , .</li><li>Ikeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+YWHAE,+a+gene+encoding+14-3-3epsilon,+as+a+possible+susceptibility+gene+for+schizophrenia.">Identification of YWHAE, a gene encoding 14-3-3epsilon, as a possible susceptibility gene for schizophrenia.</a> Behav Neurosci. , .</li><li>Korte, S. M., De Boer, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+animal+model+of+state+anxiety:+fear-potentiated+behaviour+in+the+elevated+plus-maze.">A robust animal model of state anxiety: fear-potentiated behaviour in the elevated plus-maze.</a> Eur J Phamacol. 463, 163-175 (2003).</li><li>Hogg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+validity+and+variability+of+the+elevated+plus-maze+as+an+animal+model+of+anxiety.">A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54, 21-30 (1996).</li><li>Holmes, A., Parmigiani, S., Ferrari, P. F., Palanza, P., Rodgers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+profile+of+wild+mice+in+the+elevated+plus-maze+test+for+anxiety.">Behavioral profile of wild mice in the elevated plus-maze test for anxiety.</a> Physiol Behav. 71, 509-516 (2000).</li><li>Tsujimura, A., Matsuki, M., Takao, K., Yamanishi, K., Miyakawa, T., Hashimoto-Gotoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+the+kf-1+gene+exhibit+increased+anxiety-+but+not+despair-like+behavior.">Mice lacking the kf-1 gene exhibit increased anxiety- but not despair-like behavior.</a> Front. Behav. Neurosci. 10, (2008).</li><li>Nakajima, R., Takao, K., SM, H. u. a. n. g., Takano, J., Iwata, N., Miyakawa, T., Saido, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+Behavioral+Phenotyping+of+Calpastatin-Knockout+Mice.">Comprehensive Behavioral Phenotyping of Calpastatin-Knockout Mice.</a> Molecular Brain. , .</li><li>Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+calcineurin+knockout+mice+exhibit+multiple+abnormal+behaviors+related+to+schizophrenia.">Conditional calcineurin knockout mice exhibit multiple abnormal behaviors related to schizophrenia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 8987-8992 (2003).</li><li>Yamasaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+analyses+of+large-scale+data+justify+the+behavioral+test+battery+strategy+to+reveal+the+functional+significances+of+the+genes+expressed+in+the+brain.">Factor analyses of large-scale data justify the behavioral test battery strategy to reveal the functional significances of the genes expressed in the brain.</a> , (1985).</li><li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Scienc. 284, 1670-1672 (1999).</li></ol>

Todos los procedimientos fueron aprobados por el Uso de Animales y el Comité de Atención de la Universidad de Kyoto.

Aunque el genoma del ratón ha sido secuenciado, las funciones de la mayoría de los genes no se conocen. Técnicas de modificación genética permite la eliminación u otra manipulación de un gen específico en ratones (Austin et al, 2004;.. Aiba et al, 2007). La influencia de un determinado gen en una determinada conducta puede ser determinada por la realización de análisis de comportamiento de los ratones mutantes (Takao y Miyakawa, 2006b;. Takao et al, 2007). La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más populares de todos los modelos animales disponibles en la actualidad de la ansiedad (Rodgers y Dalvi, 1997; Crawley, 2007). Esta prueba de la ansiedad-como el comportamiento ha sido utilizado para la detección y el fenotipo de ratones transgénicos y knock-out (Crawley, 1999) y de descubrimiento de fármacos (Hogg et al 1996;. Crawley, 2007). La prueba de elevación de laberinto tiene una validez predictiva sólida para la detección de fármacos ansiolíticos (Rodgers y Dalvi, 1997; Mechiel Korte y De Boer, 2003; Crawley, 2007); ansiolíticos específicamente aumento, y las drogas ansiogénicos disminución en concreto, el número de entradas en los brazos abiertos y el tiempo que pasé allí. La puntuación total de entradas y la distancia total se considera un índice útil de la actividad general. Puntuación total de entradas es también un índice de ansiedad, y los porcentajes de las entradas y el tiempo invertido en cada brazo constituyen el índice de ansiedad primario (Rodgers y Dalvi, 1997, Mechiel Korte y De Boer, 2003). Los brazos abiertos y cerrados se consideran para evocar la unidad de exploración mismo, por lo tanto, la evitación de los brazos abiertos se considera ser el resultado de la inducción de los niveles más altos de miedo (Rodgers y Dalvi, 1997). Se cree que la aversión de los ratones para explorar los brazos abiertos del laberinto es causada por el temor a los espacios abiertos y elevados. En 1984, Handley y Mithani informó sobre el trabajo preliminar con la prueba del laberinto elevado X (más) se ha descrito anteriormente. El aparato de prueba original fue levantado 70 cm del suelo, y compuesto por dos cerrados y dos brazos abiertos, cada uno de los cuales mide 45 cm de largo por 10 cm de ancho. En sus estudios iniciales, se informó la razón de las entradas de brazo abierto / total (Handley y Mithani, 1984). Posteriormente, se desarrollaron otros índices que incluyen el número de entradas en los brazos abiertos y cerrados y el tiempo empleado en los brazos cerrados y abiertos para las ratas (Pellow et al, 1985; Pellow y Archivo, 1986) y ratones (Lister, 1987) . Cambios en la prueba del laberinto más elevado incluyen alargamiento de ambos los brazos abiertos (50 x 10 cm) y los brazos cerrados (50 x 10 x 40 cm) con altos muros que rodean y un techo abierto en los brazos cerrados, y el laberinto entero fue elevada a una altura de 50 cm (Pellow et al, 1985; Pellow y Archivo, 1986). En la actualidad, en nuestro laboratorio, el aparato más elevados prueba del laberinto está configurado en forma de +, con dos brazos abiertos (25 x 5 cm, con una muy leve, de 0,5 cm, la pared) a través de sí y perpendiculares a dos brazos cerrados (25 x 5 x 16 cm), y se eleva 50 cm sobre el suelo (Miyakawa et al, 1996; Manabe et al, 2000; Miyakawa et al, 2001; Seeger et al, 2004; Morishima et al, 2005; Miyamoto et al, 2005; Arrow et al, 2006; Hattori et al, 2007; Niemann et al, 2007; Sano et al, 2008; Horii et al, 2008; Fukuda et al, 2008; Ikeda et al, 2008). El ratón se coloca en el centro de la + (5 cm x 5 cm) y se le permite explorar el laberinto libremente. Aunque cinco minutos de grabación es común, el comportamiento se registra durante 10 minutos en el protocolo para aumentar la oportunidad de detectar el fenotipo. Los brazos en alto abiertos y cerrados provocar un conflicto de exploración (Mechiel Korte y De Boer, 2003; Crawley, 2007). Las medidas de la prueba del laberinto más elevados se registran por un observador durante el experimento. En nuestro laboratorio, la prueba se grabó con una cámara de vídeo conectada a un ordenador y los datos de comportamiento (imagen EP) son adquiridos y analizados utilizando el programa EP imagen. Número de entradas en los brazos abiertos frente al número de entradas del brazo total, y el tiempo empleado en los brazos abiertos frente a los brazos cerrados, suministrar a las medidas de ansiedad-como comportamiento. Se evaluaron más de 90 cepas de ratones mutantes modificados genéticamente mediante el protocolo se muestra en la película y tiene un gran conjunto de datos en bruto para más de 5.000 ratones (incluidos de tipo salvaje y ratones mutantes). En nuestra batería de pruebas, de tipo salvaje camada suelen ser utilizados como control. Como una cepa de fondo, los ratones C57BL/6J son ampliamente utilizados. Se recogieron los datos de los ratones C57BL/6J en las pruebas de comportamiento. Los valores obtenidos de ratones C57BL/6J en nuestra prueba de laberinto elevado son los siguientes (n = 914; media ± SEM), la distancia total recorrida: 1.547,55 14,27 cm, la duración del tiempo pasado: 56,49 2,42 s (brazos abiertos), 384,02 3,13 s (brazos cerrados), 161,90 2,17 s (centro de laberinto), proporción de tiempo dedicado en los brazos abiertos: 9.19 0.36%, la proporción de tiempo empleado en los brazos cerrados: 63,82 0,52%, el número de entradas: 7,64 0,21 (brazos abiertos), 24,32 0,28 (brazos cerrados);% las entradas de abrir el brazo: 21,9 0,05% cerrando las entradas de los brazos: 78,1 0,05. Ratones C57BL/6J pasar menos tiempo en los brazos abiertos que en los brazos cerrados (p &lt;0,0001, n = 914, a la par-test). Esto indica que los ratones C57BL/6J tienden a evitar los brazos abiertos, y que el tiempo empleado en los brazos abiertos es un índice válido de ansiedad-como comportamiento. Además, el orden de los ensayos se compensa a través de los genotipos, ya que el número de juicio afecta al tiempo de permanencia en los brazos abiertos y la plataforma del centro. Es decir, los índices se incrementan durante los días 3 y 4 ratones en comparación con el primero ratones (p = 0.0089, n = 476) (datos no publicados). Con nuestro protocolo, análisis de más de 1.661 ratones mostraron que el orden secuencial de los ratones en una jaula a prueba no afecta significativamente el tiempo de estancia brazo abierto (datos no publicados). Es decir, las actuaciones de los primeros ratones tomada de la jaula no difieren significativamente de las del segundo, el tercero o los ratones pasado. Aunque la prueba de elevación de laberinto y la prueba de la transición de luz / oscuridad son utilizados para la evaluación de la ansiedad-como el comportamiento, los resultados no son siempre coherentes entre sí (Holmes et al, 2000; Tujimura et al, 2008; Nakajima et al, en prensa ) Por ejemplo, el prosencéfalo específicos nocaut calcineurina ratones pasar una disminución en la cantidad de tiempo en la cámara de luz en la prueba de la transición de luz / oscuridad, pero una mayor cantidad de tiempo en los brazos abiertos en la prueba del laberinto elevado más (Miyakawa et al. , 2003). El análisis factorial de nuestra batería de pruebas de comportamiento indica que la prueba de elevación de laberinto y la prueba de la transición de luz / oscuridad evaluar los diferentes aspectos de la ansiedad-como el comportamiento, tales como brillante del espacio de ansiedad en la prueba de la transición de luz / oscuridad y abrir el espacio-la ansiedad-como comportamiento en el ensayo a campo abierto (Takao y Miyakawa, 2006b; Yamasaki et al, 2006). En consecuencia, tanto la luz / oscuridad de la prueba de transición y la prueba de laberinto elevado se incluyen en nuestra batería de pruebas de comportamiento. Crabbe y sus colegas informaron que variables no controladas y caracterización de los experimentos mutantes pueden producir resultados que son específicos de un laboratorio particular (Crabbe et al., 1999). Las diferencias de procedimiento que existe entre los laboratorios hacen que sea difícil de replicar o comparar los resultados entre ellos. El establecimiento de la documentación visual del protocolo promover una mejor comprensión de los procedimientos experimentales, lo que permite la estandarización de los protocolos utilizados en laboratorios y para la comparación de los fenotipos del comportamiento de las distintas cepas de ratones mutantes evaluó a través de estas pruebas. Anteriormente hemos publicado un protocolo de cine de la prueba de la transición de luz / oscuridad (Takao y Miyakawa, 2006a). Del mismo modo, las películas de otros protocolos, como por ejemplo la prueba de campo abierto, la prueba de natación forzada Porsolt, y las pruebas de miedo acondicionado que utilizamos en nuestra batería de pruebas de comportamiento se están realizando para la publicación de futuros artículos de revistas de vídeo.

<table><tbody><tr><td>Elevated plus maze</td><td>Tool</td><td>O&amp;rsquo;hara Co.</td><td>(none)</td><td></td></tr></tbody></table>

elevated plus maze for mice

Aunque el genoma del ratón está completamente secuenciado, las funciones de la mayoría de los genes expresados ​​en el cerebro no se conocen. La influencia de un determinado gen en una determinada conducta puede ser determinada por el análisis del comportamiento de los ratones mutantes. Si un gen diana se expresa en el cerebro, el fenotipo conductual de los ratones mutantes para dilucidar el mecanismo genético de los comportamientos normales. La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más utilizadas para medir la ansiedad-como comportamiento. La prueba se basa en la aversión natural de los ratones en las zonas abiertas y elevadas, así como sobre sus recursos naturales, el comportamiento espontáneo de exploración en ambientes nuevos. El aparato se compone de los brazos abiertos y los brazos cerrados, cruzó en medio perpendicularmente entre sí, y un área central. Los ratones se les da acceso a todas las armas y se les permite moverse libremente entre ellos. El número de entradas en los brazos abiertos y el tiempo empleado en los brazos abiertos se utilizan como índices de abrir un espacio de ansiedad inducido en ratones. Desafortunadamente, las diferencias de procedimiento que existe entre los laboratorios hacen que sea difícil de duplicar y comparar los resultados entre laboratorios. A continuación, presentamos una película detallada que demuestra nuestro protocolo de la prueba del laberinto más elevado. En nuestro laboratorio, hemos evaluado más de 90 cepas de ratones mutantes utilizando el protocolo se muestra en la película. Estos datos serán divulgados como parte de una base de datos pública que ahora estamos construyendo. Visualización del protocolo promoverá una mejor comprensión de los detalles del procedimiento experimental completa, que permite la estandarización de los protocolos utilizados en los diferentes laboratorios y comparaciones de los fenotipos del comportamiento de las distintas cepas de ratones mutantes evaluó a través de esta prueba.

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Elevated Plus Maze for Mice

La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más utilizadas para medir la ansiedad-como el comportamiento de los ratones. A continuación, presentamos una película que muestra los procedimientos detallados para la realización de la prueba.

Laberinto elevado Plus para ratones

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

90.4K vistas.  Graduate School of Medicine, Kyoto University. La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más utilizadas para medir la ansiedad-como el comportamiento de los ratones. A continuación, presentamos una película que muestra los procedimientos detallados para la realización de la prueba.

Video: Elevated Plus Maze for Mice

The Successive Alleys Test of Anxiety in Mice and Rats

The plus-maze was derived from the early work of Montgomery. He observed that rats tended to avoid the open arms of a maze, preferring the enclosed ones. Handley, Mithani and File et al. performed the first studies on the plus-maze design we use today, and in 1987 Lister published a design for use with mice. 
Time spent on, and entries into, the open arms are an index of anxiety; the lower these indices, the more anxious the mouse is. Alternatively, a mouse that spends most of its time in the closed arms is classed as anxious. 
One of the problems of the plus-maze is that, while time spent on, and entries into, the open arms is a fairly unambiguous measure of anxiety, time in the central area is more difficult to interpret, although time spent here has been classified as &#x201C;decision making&#x201D;. In many tests central area time is a considerable part of the total test time.
Shepherd et al. produced an ingenious design to eliminate the central area, which they called the &#x201C;zero maze&#x201D;. However, although used by several groups, it has never been as widely adopted as the plus-maze. 
In the present article I describe a modification of the plus-maze design that not only eliminates the central area but also incorporates elements from other anxiety tests, such as the light-dark box and emergence tests. It is a linear series of four alleys, each having increasing anxiogenic properties. It has given similar results to the plus-maze in general. Although it may not be more sensitive than the plus-maze (more data is needed before a firm conclusion can be reached on this point), it provides a useful confirmation of plus-maze results which would be useful when, for example, only a single example of a mutant mouse was available, as, for example, in ENU-based mutagenesis programs.

The plus-maze measures anxiety-like behaviour in rodents. There are two opposite closed and two opposite open arms; anxious rodents avoid the open arms. The central area is neither completely open nor closed, so time spent here is ambiguous and difficult to interpret. Here a modification of the plus-maze protocol eliminating this area is described.

Los callejones de prueba sucesiva de ansiedad en ratones y ratas

The plus-maze was derived from the early work of Montgomery. He observed that rats tended to avoid the open arms of a maze, preferring the enclosed ones.  ...

Investigación

Comportamiento

Low-stress Route Learning Using the Lashley III Maze in Mice

Many behavior tests designed to assess learning and memory in rodents, particularly mice, rely on visual cues, food and/or water deprivation, or other aversive stimuli to motivate task acquisition. As animals age, sensory modalities deteriorate. For example, many strains of mice develop hearing deficits or cataracts. Changes in the sensory systems required to guide mice during task acquisition present potential confounds in interpreting learning changes in aging animals. Moreover, the use of aversive stimuli to motivate animals to learn tasks is potentially confounding when comparing mice with differential sensitivities to stress. To minimize these types of confounding effects, we have implemented a modified version of the Lashley III maze. This maze relies on route learning, whereby mice learn to navigate a maze via repeated exposure under low stress conditions, e.g. dark phase, no food/water deprivation, until they navigate a path from the start location to a pseudo-home cage with 0 or 1 error(s) on two consecutive trials. We classify this as a low-stress behavior test because it does not rely on aversive stimuli to encourage exploration of the maze and learning of the task. The apparatus consists of a modular start box, a 4-arm maze body, and a goal box. At the end of the goal box is a pseudo-home cage that contains bedding similar to that found in the animal&#x2019;s home cage and is specific to each animal for the duration of maze testing. It has been demonstrated previously that this pseudo-home cage provides sufficient reward to motivate mice to learn to navigate the maze1. Here, we present the visualization of the Lashley III maze procedure in the context of evaluating age-related differences in learning and memory in mice along with a comparison of learning behavior in two different background strains of mice. We hope that other investigators interested in evaluating the effects of aging or stress vulnerability in mice will consider this maze an attractive alternative to behavioral tests that involve more stressful learning tasks and/or visual cues.

The Lashley III maze is a route-learning task that does not rely on aversive stimuli or visual cues. It is thus a highly attractive option for evaluating learning and memory, especially in aging mice or otherwise where stress is a consideration.

De baja tensión Ruta de Aprendizaje Usando el laberinto Lashley III en ratones

Many behavior tests designed to assess learning and memory in rodents, particularly mice, rely on visual cues, food and/or water deprivation, or other ...

Neurociencias

Barnes Maze Testing Strategies with Small and Large Rodent Models

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land (Barnes) mazes. Improved performance over sessions or trials is thought to reflect learning and memory of the escape cage/platform location. Considered less stressful than water mazes, the Barnes maze is a relatively simple design of a circular platform top with several holes equally spaced around the perimeter edge. All but one of the holes are false-bottomed or blind-ending, while one leads to an escape cage. Mildly aversive stimuli (e.g.&#160;bright overhead lights) provide motivation to locate the escape cage. Latency to locate the escape cage can be measured during the session; however, additional endpoints typically require video recording. From those video recordings, use of automated tracking software can generate a variety of endpoints that are similar to those produced in water mazes (e.g.&#160;distance traveled, velocity/speed, time spent in the correct quadrant, time spent moving/resting, and confirmation of latency). Type of search strategy (i.e.&#160;random, serial, or direct) can be categorized as well. Barnes maze construction and testing methodologies can differ for small rodents, such as mice, and large rodents, such as rats. For example, while extra-maze cues are effective for rats, smaller wild rodents may require intra-maze cues with a visual barrier around the maze. Appropriate stimuli must be identified which motivate the rodent to locate the escape cage. Both Barnes and water mazes can be time consuming as 4-7 test trials are typically required to detect improved learning and memory performance (e.g.&#160;shorter latencies or path lengths to locate the escape platform or cage) and/or differences between experimental groups. Even so, the Barnes maze is a widely employed behavioral assessment measuring spatial navigational abilities and their potential disruption by genetic, neurobehavioral manipulations, or drug/ toxicant exposure.

The dry-land Barnes maze is widely used to measure spatial navigation ability in response to mildly aversive stimuli. Over consecutive days, performance (e.g.&#160;latency to locate escape cage) of control subjects improves, indicative of normal learning and memory. Differences between rats and mice necessitate apparatus and methodology changes that are detailed here.

Barnes Maze estrategias de ensayo con pequeñas y grandes modelos de roedores

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land ...

Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of the most commonly used platforms to measure behaviors in animal models. It is a fast and relatively easy test that provides a variety of behavioral information ranging from general ambulatory ability to data regarding the emotionality of the subject animal. As it relates to rodent models, the procedure allows the study of different strains of mice or rats both laboratory bred and wild-captured. The technique also readily lends itself to the investigation of different pharmacological compounds for anxiolytic or anxiogenic effects. Here, a protocol for use of the open field maze to describe mouse behaviors is detailed and a simple analysis of general locomotor ability and anxiety-related emotional behaviors between two strains of C57BL/6 mice is performed. Briefly, using the described protocol we show Wild Type mice exhibited significantly less anxiety related behaviors than did age-matched Knock Out mice while both strains exhibited similar ambulatory ability.

A protocol is provided to use an Open Field Maze to access general locomotor activity, anxiety and emotionality in a laboratory mouse model.

El uso del campo Maze abierto para medir el comportamiento locomotor y la ansiedad-como en ratones

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of ...

Testing Animal Anxiety in Rats: Effects of Open Arm Ledges and Closed Arm Wall Transparency in Elevated Plus Maze Test

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral science, conflicting outcomes are often provided from different laboratories. To identify reasons for the different outcomes, we previously focused on arm features, which differ between laboratories, most notably the presence/absence of ledges at the sides of open arms and the transparency/opaqueness of closed arm walls. In a previous report, we used a custom designed container to compare rat behavior on different combinations of open and closed arm designs under otherwise identical experimental conditions, and showed that differences in arm features interfere with experimental outcomes. In brief, open arm ledges significantly increased anxiety-like behavior in rats, while transparent arms may also have decreased this behavior. Furthermore, we verified a higher detection sensitivity of the effect of an anxiolytic drug in a combination of no-ledged open arm + opaque walled closed arm compared with a combination of ledged open arm + transparent walled closed arm. In this report, we introduce our protocol for the elevated plus maze test, together with discussion of the key results from the previous report and our experimental experience. We believe this report will provide useful information for researchers who have employed or who plan to use the elevated plus maze in their studies.

Rats' anxiety-like behavior tested by the elevated plus maze varies highly depending on the testing environment. Here we show how apparatus settings, especially arm structure, affect behavior on the maze, and we explain a reliable protocol to detect effects of anxiolytic drugs. This report will contribute to anxiety research.

Prueba de ansiedad Animal en ratas: efectos de bordes de brazo abierto y cerrado brazo pared transparencia en elevado mas Test de laberinto

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral ...

Analyzing Spatial Learning and Prosocial Behavior in Mice Using the Barnes Maze and Damsel-in-Distress Paradigms

The Barnes maze is a reliable measure of spatial learning and memory that does not require food restriction or exposure to extremely stressful stimuli. The Barnes maze can also assess other mouse behaviors, such as general motivation to escape from the maze platform and exploratory behavior. The Barnes maze can measure whether a genetic mutation or environmental variable can impact the acquisition and retention of spatial memories, as well as provide information about the search strategy employed by the mice. Here we use the Barnes maze to detect a memory deficit in adult mice following a single developmental ethanol exposure event. The newly described Damsel-in-Distress paradigm exposes a male mouse to a female mouse trapped in a chamber in the open center field of the arena. It provides an opportunity for the mouse to socially respond to the trapped female and exhibit prosocial behavior. The Damsel-in-Distress paradigm can also be used to examine mouse behavior in a novel arena and measure locomotor activity. Both the Barnes Maze and the Damsel-in-Distress protocols require minimal financial investment and most aspects of the tests can be constructed from common lab supplies. These flexible and accessible tools can also be used to detect behavioral changes over the course of development.

This protocol measures spatial learning and memory using the Barnes maze. A novel Damsel-in-Distress paradigm is used to assess locomotor activity and prosocial behavior in mice.

Analizar el aprendizaje espacial y el comportamiento Prosocial en los ratones con el laberinto de Barnes y paradigmas de la damisela en peligro

The Barnes maze is a reliable measure of spatial learning and memory that does not require food restriction or exposure to extremely stressful stimuli. ...

Elevated Plus Maze Test Combined with Video Tracking Software to Investigate the Anxiolytic Effect of Exogenous Ketogenic Supplements

The overall goal of this study is to describe the methodology of the elevated plus maze (EPM) test in combination with a video tracking software. The purpose of the method is to document the effect of various potential anxiolytic treatments on laboratory rodent models. The EPM test is based on the rodents&#39; proclivity toward protected, enclosed dark spaces and unconditioned fear of open spaces and heights, and their innate intense motivation to explore novel environments. The EPM test is a widely used behavioral test for investigating the anxiolytic or anxiogenic responses of rodents given drugs that are known to affect behavior. Observation demonstrating a decreased proportion of time spent on closed arms, an increased proportion of time spent on open arms, a reduced number of entries to closed arms, and an elevated number of entries to open arms measured by the EPM test may reflect reduced anxiety levels. Using this method, the effect of exogenous ketone supplements on anxiety-related behavior is tested in Sprague Dawley (SPD) rats. Exogenous ketone supplements are chronically fed to the rats for 83 days or subchronically and acutely orally gavaged, daily for 7 days, before conducting the EPM test. Behavioral data collection is performed using the SMART video tracking system by a blinded observer at the end of the treatments. The main findings indicate that the EPM test is an effective method to detect the ketone supplement-induced anxiolytic effect and can be considered a sensitive measure to assess changes in anxiety behavior associated with drug- or metabolic-based therapies.

Here, we present a protocol to investigate changes in the anxiety level of rodent animal models. The elevated plus maze (EPM) test, used together with a video tracking software, provides a reliable method to document the effect of various potential anxiolytic treatments in preclinical laboratory scenarios.

Elevado más laberinto prueba combinada con Video Tracking Software para investigar el efecto ansiolítico de suplementos exógenos de cetogénicas

The overall goal of this study is to describe the methodology of the elevated plus maze (EPM) test in combination with a video tracking software. The ...

Chronic Stress Shifts Effort-Related Choice Behavior in a Y-Maze Barrier Task in Mice

Mood disorders, including major depressive disorder, can be precipitated by chronic stress. The Y-maze barrier task is an effort-related choice test that measures motivation to expend effort and obtain reward. In mice, chronic stress exposure significantly impacts motivation to work for a higher value reward when a lesser value reward is freely available compared to unstressed mice. Here we describe the chronic corticosterone administration paradigm, which produces a shift in effortful responding in the Y-maze barrier task. In the Y-maze task, one arm contains 4 food pellets, while the other arm contains only 2 pellets. After mice learn to select the high reward arm, barriers with progressively increasing height are then introduced into the high reward arm over multiple test sessions. Unfortunately, most chronic stress paradigms (including corticosterone and social defeat) were developed in male mice and are less effective in female mice. Therefore, we also discuss chronic non-discriminatory social defeat stress (CNSDS), a stress paradigm we developed that is effective in both male and female mice. Repeating results with multiple distinct chronic stressors in male and female mice combined with increased usage of translationally relevant behavior tasks will help to advance the understanding of how chronic stress can precipitate mood disorders.

The Y-maze barrier task is a behavior test that examines motivation to expend effort for reward. Here, we discuss testing multiple well-validated chronic stressors including chronic corticosterone and social defeat stress with this behavior, as well as the novel chronic non-discriminatory social defeat stress (CNSDS), which is effective in females.

El estrés crónico cambia el comportamiento de la elección relacionada con el esfuerzo en una tarea de barrera del laberinto Y en ratones

Mood disorders, including major depressive disorder, can be precipitated by chronic stress. The Y-maze barrier task is an effort-related choice test that ...

Investigating Migraine-Like Behavior Using Light Aversion in Mice

Migraine is a complex neurological disorder characterized by headache and sensory abnormalities, such as hypersensitivity to light, observed as photophobia. Whilst it is impossible to confirm that a mouse is experiencing migraine, light aversion can be used as a behavioral surrogate for the migraine symptom of photophobia. To test for light aversion, we utilize the light/dark assay to measure the time mice freely choose to spend in either a light or dark environment. The assay has been refined by introducing two critical modifications: pre-exposures to the chamber prior to running the test procedure and adjustable chamber lighting, permitting the use of a range of light intensities from 55 lux to 27,000 lux. Because the choice to spend more time in the dark is also indicative of anxiety, we also utilize a light-independent anxiety test, the open field assay, to distinguish anxiety from light-aversive behavior. Here, we describe a modified test paradigm for the light/dark and open field assays. The application of these assays is described for intraperitoneal injection of calcitonin gene-related peptide (CGRP) in two mouse strains and for optogenetic brain stimulation studies.

Rodents are not able to report migraine symptoms. Here, we describe a manageable test paradigm (light/dark and open field assays) to measure light aversion, one of the most common and bothersome symptoms in patients with migraines.

Investigando el comportamiento similar a la migraña utilizando la aversión a la luz en ratones

Migraine is a complex neurological disorder characterized by headache and sensory abnormalities, such as hypersensitivity to light, observed as ...

Validación de un modelo murino del síndrome de Angelman mediante pruebas conductuales

Behavioral Characterization of an Angelman Syndrome Mouse Model

This manuscript describes a battery of behavioral tests available to characterize Angelman syndrome (AS)-like phenotypes in an established murine model of AS. We use the rotarod learning paradigm, detailed gait analysis, and nest building test to detect and characterize animal motor impairments. We test animal emotionality in the open field and elevated plus maze tests, as well as the affect in the tail suspension test. When AS mice are tested in the open field test, the results should be interpreted with care, since motor dysfunctions influence mouse behavior in the maze and alter activity scores.
The reproducibility and effectiveness of the presented behavioral tests has already been validated in several independent Uba3a mouse lines with different knockout variants, establishing this set of tests as an excellent validation tool in AS research. Models with the relevant construct and face validity will warrant further investigations to elucidate the pathophysiology of the disease and grant the development of causal treatments.

Author Spotlight: Una batería de pruebas conductuales altamente reproducibles para validar un modelo murino de síndrome de Angelman 

This manuscript presents a set of highly reproducible behavioral tests to validate an Angelman syndrome mouse model.

Caracterización conductual de un modelo de ratón con síndrome de Angelman

This manuscript describes a battery of behavioral tests available to characterize Angelman syndrome (AS)-like phenotypes in an established murine model of ...