Name: development of an in vitro ocular platform to test contact lenses
Uploaded: 2016-04-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
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Die Autoren möchten sich unsere Finanzierungsquelle NSERC 20/20 Netzwerk für die Entwicklung von Advanced Ophthalmic Materials zu bestätigen.

Alle Experimente wurden in Übereinstimmung und Einhaltung aller einschlägigen Richtlinien skizziert von der University of Waterloo Tierforschungsethikkommission abgeschlossen. Die Rinderaugen sind großzügig von einem örtlichen Schlachthof gespendet. 1. Augen Modell <ol><li> Konstruktion und Herstellung von Formen 13 <ol><li> Entwerfen Sie die Augenmodelle entsprechend den durchschnittlichen physiologischen Dimensionen des menschlichen erwachsenen Augen. 13 </li><li> Lassen Sie einen Abstand von 250 &amp; mgr; m zwischen dem Augapfel und dem Augenlid Stücke des Augenmodells. Entwerfen Sie die jeweiligen Formen unter Verwendung von Computer-Aided Design (CAD) Software. </li><li> Erstellen Sie neue .cad Datei oder .sldprt Datei mit AutoCAD oder Solidworks. Erstellen von 3D-Modellen des menschlichen Augapfel / Augenlid. Erstellen Formen der Modelle und die Formen als .stl-Dateien speichern. </li><li> Import STL - Dateien in 3D - Druckersoftware (zB makeware für replicator2). Geben Sie Parameter des Druck (Standort, Kargheit, Maßstab, Orientierung, Glätte usw. </em&gt;) 13. </li><li> Speichern Sie die Datei als G-Code-Datei für 3D-Drucker zu lesen. Wählen Materialien wie PLA (Polymilchsäure), ABS (Acrylnitril - Butadien - Styrol), PC (Polycarbonat), oder einer Kombination davon, zu drucken , um die Formen 13. </li><li> Installieren gewünschten Filaments von dem Material der Wahl. Importieren Sie die G-Code-Datei in den 3D-Drucker zu lesen. Drucken Sie die Form. HINWEIS: Alternativ erzeugen die Augenformen einen Computer numerisch (CNC) Maschine, wenn eine glattere Oberfläche auf dem Augenmodell gewünscht wird gesteuert. Für CNC Formenbau, Materialien für die Formen werden nicht mehr nur auf thermische Kunststoffe, aber auf Metall, Keramik und chemisch resistive Polymere wie Polytetrafluorethylen erstrecken. </li><li> Öffnen Sie die CNC-Software-Schnittstelle, die mit einem Schneidbohrer verbunden ist. Konstruieren Sie 3D-Formen nach vorne, oben, Seiten- und perspektivische Ansichten der zuvor konstruierten Augapfel / Augenlid Modell Formen in Steuerungs-Software-Schnittstelle. Wählen Sie den entsprechenden Parameter für dieBearbeitung (Bitgröße, Substratmaterial, Materialstärke) und fahren Sie mit der Form zu schneiden. </li></ol></li><li> Synthese von Okulare PDMS <ol><li> Unter Verwendung einer Spritze, messen 10 ml Volumen von PDMS (Polydimethylsiloxan) Basis und füllen Sie ihn in eine 15-50 ml Zentrifugenröhrchen. Werden 10% w / v der Elastomerlösung des Gesamtgewichts des PDMS. Mit einem Rührstab, mischen Sie die gut-Lösungen. </li><li> Gießen Sie die PDMS-Lösung in den Augapfel und Augenlid Formen. Lassen Sie die PDMS bei RT O / N (oder mindestens 12 hr) zu regeln, die Polymerisation zu starten und zu ermöglichen, Blasen aus dem Polymer zu lösen. HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass es keine Blasen in der PDMS-links, die möglicherweise steigen oder zu erweitern. </li><li> Anschließend stellen die Formen in eine 75 ° C (167 ° F) heißen Ofen für 1 Stunde oder 150 ° C (302 ° F) für 5 min. Für ein weicheres Gel, lassen Sie die PDMS bei RT sitzen für mindestens 48 Stunden, um vollständig zu polymerisieren. </li><li> Lege die Proben in einer Gefriertruhe für einige min; dies wird die PDMS schrumpfen und zu vereinfachen,die Entnahme der Proben aus den Formen. Extrahieren Sie die Okulare aus den Formen einer dünnen Spachtel. </li><li> Für die Lieferung der Lösung in den Raum zwischen dem Augapfel und Augenlid Stücke, schließen Sie einen 1/16 &quot;x 1/8&quot; Polytetrafluorethylen Rohr mit einem 1/16 &quot;gleich Bein Koppler Rohrverbinder und befestigen Sie es auf das Augenlid Stück am Rohrloch . </li></ol></li><li> Synthese von Eyeball Stückes Agarose HINWEIS: Der Augapfel Stück synthetisiert werden können andere Polymere verwendet, wie Agarose. Das folgende Verfahren kann auch Augenstücke aus einer Vielzahl von Agar-Typen, wie PDA (Kartoffel-Dextrose-Agar) oder SDA (Sabouraud-Dextrose-Agar) zu erzeugen, modifizieren. <ol><li> Um eine 2% (2 g / 100 ml) Gel, messen 2 g Agarose produzieren und mit 100 ml Reinstwasser mischen. Bringen Sie die Lösung zum Kochen bringen (100 ° C), so dass die Agarose vollständig auflöst. Lassen Sie die Lösung abkühlen 5 min nach unten. </li><li> Füllen Sie die Lösung in den Augapfel Form und lassen Sie die Lösung für 3 zu kühlen0 min bei RT. Entfernen Sie die Augapfel Stücke mit einem Spatel. Lagern Sie den Augapfel Agar in einem -20 ° C Gefrierschrank für die spätere Verwendung. Für die Mikrobiologie Studien, Sterilisieren der Augapfel Formen im Autoklaven und / oder UV-Bestrahlung. </li></ol></li><li> Der Einbau von Bovine Cornea auf PDMS Eyeball HINWEIS:. Dieses Protokoll von Parekh angepasst wurde , et al 14 <ol><li> Führen Sie die Präparation und Einbau der Rinder-Cornea unter sterilen Bedingungen unter einer Laminar-Flow-Haube. Erwerben die Augen und sezieren sie am selben Tag. </li><li> Drehen Sie den Flow-Haube auf 10 Minuten vor der Verwendung und sanieren mit 70% Ethanol Alkohol. Sicherzustellen, dass alle Materialien und Instrumente steril sind durch Autoklavieren bei 273 ° F / 133 ° C für 45 min, und positioniert ist nicht weniger als 4 Zoll von der Strömungshaube Eingang. </li><li> Tauchen Sie die Rinderauges in einen Becher mit einem verdünnten PVP-Jod-Lösung für 2 min enthält. Spülen Sie das Auge in ein Becherglas mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) pH 7.4. Mit einer Pinzette vorsichtig aufstreichen Auge auf eine Petrischale aus Glas, Hornhautseite nach oben. </li><li> Entfernen Sie die überschüssige Muskel und Fettgewebe durch an den scleral Befestigungspunkte mit stumpfen Ende Dissektion Schere schneiden. Entsorgen Sie das überschüssige Gewebe in einen sterilen Becher für tierische Abfälle bezeichnet. </li><li> Mit Mikro-Schere, entfernen Sie die Bindehaut aus dem Auge. Wickeln Sie das Auge mit steriler Gaze, einen Abstand von mindestens 1 cm vom Limbus zu halten. </li><li> Mit einem Skalpell einzuschneiden die Sklera etwa 2 mm vom Limbus Region und oberflächlich, um Durchdringung des darunterliegenden Choroidea und Glaskörper zu vermeiden. verlängern Sie vorsichtig den Schnitt um 360 ° mit einem Skalpell oder Dissektion Schere ohne die Hornhaut aus ihrer natürlichen Krümmung zu verformen. </li><li> Mit einer feinen Pinzette, entfernen Sie die Hornhaut aus dem Auge. Mit einer Pinzette vorsichtig entfernen Sie anhaftenden Uvea Gewebe und spülen Hornhaut mit PBS. </li><li> Lagern Sie die Hornhaut bei 31ºC in einem sterilen Behälter mit KulturMedium (wie beispielsweise Medium 199) 3% Fetal Bovine Serum enthaltendem Gewebe Feuchtigkeit und Zell Nahrung aufrechtzuerhalten. </li><li> Vor dem Experimentieren, ruhen die ausgeschnittenen Hornhaut auf dem PDMS Augapfel, und klemmen Sie die beiden Stücke zusammen mit einem spezialisierten Clip-on. </li></ol></li></ol> 2. Blink-Plattform <ol><li> Design und Produktion der Blink-Plattform HINWEIS: Die Blink-Plattform besteht aus drei Funktionsteilen: Augenmodell (beschrieben in Abschnitt 1), Getriebe und Elektronik. <ol><li> Gestaltung und Herstellung der blink-Plattform CAD und 3D-Druck, ähnlich wie für das Auge Modell beschrieben (Abschnitt 1.1). Gestalten Sie das Getriebe , so dass es eine einfache Drehung der Motoren in die seitlichen und Drehbewegungen der Okulare übersetzt. 15 </li><li> Verwendung des Ritzels und Getriebemechanismus, zu übersetzen Drehbewegung eines Schrittmotors in die seitliche Bewegung eines Ritzels, die mit den Augenlid Stücken verbunden ist. </li><li> Verwendung derKonjugat Getriebesystem, von einem Schrittmotor in drei (oder mehr) Drehbewegungen für drei verschiedene Augapfel Stücke eine Drehbewegung zu verstärken. </li><li> Ausrichten der zwei Getriebesysteme, eine für das Augenlid und einen für Augapfels, so dass der Abstand zwischen den beiden konstant sind. Bauen Sie die Elektronik mit einem Mikrocontroller, Motorschild und zwei Motoren. HINWEIS: zwei Schrittmotoren Rotationsmotoren zu schaffen, die durch das Getriebesystem in eine blinkende Bewegung übersetzt wird. </li><li> Verbinden die beiden Schrittmotoren mit einem System, bestehend aus einem Motorschild auf dem Mikrocontroller gestapelt. Schließen Sie und konfigurieren Sie die elektronischen Komponenten mit Open-Source-Software-Produkten zu arbeiten. </li><li> Programmieren Sie das System auf Motorparameter steuern, wie Umdrehungen pro Minute (RPM), die Anzahl der Runden nach vorne, die Anzahl der Runden zurück und drehen Stil. HINWEIS: Siehe die zusätzliche &quot;Arduino-Code-Datei&quot; für weitere Einzelheiten. </li><li> Laden Sie die Systemsoftware von der masteller &#39;Website. </li><li> Installieren Sie die Software und öffnen. Schreiben Sie den Code zu Schrittmotoren in der gewünschten Konfiguration zu steuern. Verbinden des Systems mit einer Quelle des elektronischen Systems mit Energie zu versorgen, so dass die Motoren in der gewünschten Weise bewegen, wie durch den Forscher definiert. HINWEIS: Siehe die zusätzliche &quot;Arduino-Code-Datei&quot;. </li></ol></li><li> Montage mit Mikrofluidik (künstliche Tränenlösung) <ol><li> Nehmen Sie die synthetisierten Augapfel und Augenlid Stücke und rutschen sie auf den entsprechenden Clip-ons für das Auge-Modell. Den Schlauch, der mit einer Spritze und positioniert auf der mikrofluidischen Pumpe mit dem Augenlid Stück (Abschnitt 1.2.5) verbunden ist. Testen Sie die Plattform laufen und für eine konsistente Bewegung überprüfen. </li><li> Prime der Schlauch und überprüfen für einen steten Fluss von künstlichen Tränenlösung (ATS). Das Rezept für ATS wurde bereits berichtet. 16 </li><li> Manuell bewegen zusammen, um die Augenmodellteile auf einer ebenen Fläche, so dass der Augapfel und das AugeDeckel in Kontakt sind. Stellen Sie die Strömungsgeschwindigkeit des mikrofluidischen Pumpe auf gewünschte Werte. Stellen physiologischen Flussraten von 1 bis 1,5 &amp; mgr; l / min. 17 </li><li> Die Pumpe und die Aktoren Experiment zu beginnen. Für die Lieferung Experimente Medikament, legen Sie die arzneimittelhaltige Kontaktlinse auf dem Augapfel Stück. </li><li> Ermöglichen die Durchflussflüssigkeit in eine 12-Well-Platte zu tropfen. Bei den festgelegten Zeitintervallen gewünscht, zu quantifizieren , den Analyten oder Arzneimittelkonzentration unter Verwendung üblicher Nachweisverfahren wie UV-Vis - Spektroskopie oder Fluoreszenz. 1,4,18 </li><li> Für Studien Ablagerung von Tränenkomponenten auf Kontaktlinsen Auswertung, legen Sie die Kontaktlinse auf dem &quot;Augapfel&quot; Stück. Sammeln Sie die Durchströmungsflüssigkeit, die verworfen werden kann. </li><li> Nach der gewünschten Zeitintervallen, entfernen Sie die Kontaktlinse aus dem Augapfel Stück und bereiten die Linse für eine weitere Analyse, wie die konfokale Mikroskopie. </li></ol></li></ol>

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Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Es gibt drei wichtige Schritte innerhalb des Protokolls, die besondere Aufmerksamkeit erfordern: Design und Herstellung von Formen (Abschnitt 1.1), Plattformeinheit (Abschnitt 2.2.1-2.2.3) und die Überwachung der Versuchslauf (Abschnitt 2.2.4-2.2.7 ). In Bezug auf die Konstruktion und Herstellung von Formen (Abschnitt 1.1), sollte der Augapfel Stück nach den Abmessungen einer menschlichen Hornhaut ausgebildet sein. Allerdings kann es mehrere Prototypen der Form vor einem Augapfel Stück benötigen, können erstellt werden, der perfekt passt Kommerzielle Kontaktlinse (CL). Zusätzlich zu den 250 &amp; mgr; m Bedürfnisse aufrechterhalten werden, wenn der Augapfel und Augenlid Stück in Kontakt sind, die Tränenflüssigkeit während des gesamten Augenmodells fließt reibungslos zu gewährleisten, wenn ein CL vorliegt. Dieser Abstand könnte in zukünftigen Iterationen verändert werden, aber sollte nicht weniger als 150 um genügend Abstand zu ermöglichen, eine CL zu passen. Die Plattformeinheit (Abschnitt 2.2.1-2.2.3) erfordert eine sorgfältige Aufmerksamkeit, so dass der Augapfel und Augenlid Stück kommen in contact während der Blink Bewegung. Wenn die Okulare nicht in einwandfreiem Kontakt sind, dann Simulation eines geschlossenen Augenlid und mechanisches Reiben versagt. Der Betreiber sollte die Plattform in Bewegung für ein paar Zyklen beobachten, um zu gewährleisten, dass sowohl der Augapfel und Augenlid in Kontakt sind, und dass Reiben auftritt wie programmiert. Die aktuelle Plattform ist so konzipiert, kontinuierlich über einen Monat zu laufen, aber ein Bediener sollte alle 24 Stunden auf die Stabilität des Systems immer überprüfen, wenn ein Experiment (Abschnitt 2.2.4-2.2.7) ausgeführt wird. Dies ist wichtig, da die aktuelle Plattform keine Temperatur- oder Feuchtigkeitskontrolle besitzen, und Schwankungen dieser Parameter könnten die CLs austrocknen. Wenn dies der Fall ist, legen Sie das Augenmodell innerhalb einer kontrollierten Feuchtigkeits- und Temperaturkammer. Zusätzlich zur Arzneimittelabgabe Experimenten wurde die gesammelte Durchfluss Flüssigkeit sollte zur Vermeidung von erheblichen Verdampfung der Probe, die analysiert oder mindestens alle 2 h gelagert werden. Derzeit gibt es zwei Einschränkungen der dargebotenenAugenmodell. Die erste Beschränkung ist in Bezug auf die Exposition gegenüber der Umgebung ab. Derzeit, da die Augenstücke nicht in einer kontrollierten Kammer eingeschlossen sind, ändert, wie Temperatur und Feuchtigkeit in dem Arbeitsbereich werden verschiedene Aspekte der Experimente beeinflussen. Zum Beispiel, wenn die Umgebung zu trocken ist, dann trocknen die CLs schneller nach oben und aus dem Augapfel Stück trennen konnte, oder die Durchfluss Flüssigkeit verdampfen kann. Um dieses Problem zu lösen, werden zukünftige Iterationen Haus des Augenmodells in einer kontrollierten Temperatur und Luftfeuchtigkeit Kammer. Die zweite Einschränkung bezieht sich auf die Komplexität Augapfel Stück. Derzeit sind die Okulare sind einfach, die entweder aus PDMS oder Agarose, von denen keiner wirklich repräsentiert Hornhautoberflächeneigenschaften. Zukünftige Arbeiten zielen Augenmodelle, die näher ahmt die Hornhautoberflächenstrukturen zu erzeugen. In vitro wird Augen Forschung im Allgemeinen als die vorhergehenden Testphase in vivo Forschung angesehen. Aber,ist es wichtig , im Auge zu behalten , dass in - vitro - Forschung auch komplementär zu in - vivo - Daten, die Bereitstellung kritischer Einsichten sein können , die sonst nicht allein von in - vivo - Studien erreicht werden. Bedauerlicherweise der Strom in vitro - Modelle für das Testen CLs sind rudimentär und es fehlt ihnen mehrere Schlüsselkomponenten angemessen zu den in vivo - Umgebung nachahmen. Beispielsweise werden in vitro Studien CL in Phiolen durchgeführt 2-5 ml Phosphat - gepufferter Salzlösung , enthaltend, 1-6 , die bei 7,0 ± 2 &amp; mgr; l überschreitet stark physiologischen Tränenvolumina. 7 Darüber hinaus sind zwei wichtige Faktoren der Augenumgebung, natürliche Tränenfluß und die Blinzelreflexes, fehlen von der einfachen statischen Fläschchen-Modell. Die Einschränkungen des herkömmlichen Phiole Modells wurden von Forschern erkannt, und es wurden Versuche unternommen in vitro Augenmodelle Simulieren der okularen Umgebung durch Einschließen eines mikrofluidischen tear Nachfüllung Komponente 2 einzigartig zu erstellen0-24 und / oder intermittierenden Luftexposition. 25,26 Nicht überraschend, die aus diesen Experimenten erzeugten Ergebnisse sind sehr anders als die mit dem herkömmlichen Fläschchen - Modell erhalten, und in - vivo - Daten mehr ähneln eng kann. 20-25 So eine Entwicklung verwickelten in Modell - vitro - Auge cls untersuchen werden neue Erkenntnisse über die Interaktion von Linsenmaterialien mit der Augenoberfläche, und helfen , die Entwicklung neuer Materialien und neuer Anwendungen für CLs in den kommenden Jahrzehnten zu erleichtern. Argumentieren, eines der am meisten diskutierten Aspekte der in - vitro - Augenmodell ist , ob das Auge eine unendliche Waschbecken ähnelt, was besonders wichtig ist , wenn es um die Medikamentenabgabe von CLs kommt. Unter Bedingungen einer unendlichen Senke ist das Volumen der umgebenden Lösung deutlich höher als die Arzneimittelsättigungsvolumen, so dass Medikamentenfreisetzung nicht durch die Löslichkeit des Medikaments beeinflusst wird. 27 spricht sich für das Fläschchen als ZubepTable Augenmodell argumentieren, dass die Hornhaut, Bindehaut und Augengewebe zusammen Funktion als eine unendliche Senke umgibt. Während in der Theorie das wahr sein kann, muß das Medikament zuerst in der Tränenflüssigkeit auflösen. Diese Rate limitierende Schritt ist wahrscheinlich kein Waschbecken Zustand und wird auf beiden tear volumenabhängig sein und von unseren Modell simuliert fließen. Die einzigartige Identität des vorgestellte Modell liegt in seiner Fähigkeit, den Tränenfilm zu emulieren. Durch die Annahme einer zweiteiligen Design, ein &quot;Hornhaut / scleral&quot; Augapfel Schnitt und eine &quot;Augenlid&quot;, ist es möglich, eine gleichmäßig dünne Schicht des Tränenfilms über den Augapfel Stück zu schaffen, wenn beide Stücke in Berührung kommen. Um die Augenoberfläche zu simulieren, mechanischen Verschleiß und Luft ausgesetzt wird, in das Modell durch zwei mechanische Aktuatoren eingebaut. Da das Augenlid Stück seitlich bewegt, simuliert er das Schließen des Auges und intermittierende Luftexposition. Die Drehung des Augapfels simuliert die mechanischen Verschleiß erzeugt during blinkt. Das System ist verbunden mit einem mikrofluidischen Pumpe, die bei einem physiologischen Strömungsgeschwindigkeit oder eine andere gewünschte Strömungsrate des Augenmodells mit Tränenflüssigkeit infundiert. Der Tränenfilm wird jedesmal gebildet, die beiden Stücke in Kontakt kommen, und tear Aufbrechens tritt auf, wenn die beiden Teile zu trennen. Das Ziel ist es, eine universelle Testplattform zu schaffen CLs für verschiedene In - vitro - Analysen zu bewerten. Um vielseitig zu sein, können die Augapfel Stücke aus verschiedenen Polymeren hergestellt werden, wie beispielsweise Polydimethylsiloxan (PDMS) oder Agar. Für einfache Augenuntersuchungen, diese Polymere, die jeweils hydrophobe und hydrophile Oberflächen darstellen, genügt. Wie jedoch komplexere Analysen benötigt werden, beispielsweise Augenarzneimittelpenetration oder Toxizitätsstudien, müssen die Augenstücke weiter modifiziert werden. Diese zusätzlichen Änderungen an dem Modell, wie beispielsweise die Aufnahme eines ex vivo Kornea wie gezeigt, sind relativ machbar. Allerdings sind weitere Validierungsstudienerforderlich sind, und die zukünftige Arbeit zielt darauf ab, die Gültigkeit dieses Modells zu verbessern , indem sie sie mit in - vivo - Modellen zu vergleichen.

Zwei wesentliche Bereiche von Interesse innerhalb der Kontaktlinse (CL) Arena sind Unbehagen und die Entwicklung neuer CL-Anwendungen. Die zugrunde liegenden Mechanismen CL Beschwerden Aufklären ist ein Thema, das Feld für Jahrzehnte. 8 Die Entwicklung neuer, funktionaler CLs, wie Drug-Delivery - Geräte 1,3,9 und Biosensoren ausgewichen hat, 10-12 ein Bereich von wachsendem Interesse ist, mit erheblichen potenziellen Märkten. In beiden Fällen würde ein hoch entwickeltes In - vitro - Modell relevanten Informationen zur Verfügung mit der Auswahl geeigneter Linsenmaterialien oder Konstruktionsmerkmale , während der Entwicklungsphase zu unterstützen. Leider sind aktuelle In - vitro - Modelle für CLs und andere Augenbezogenen Anwendungen Auswertung relativ grob und ungekünstelt. Traditionell Studien CL in vitro Auswertung Tränenfilmabscheidung oder Arzneimittelabgabe werden in statischen, große Volumen Fläschchen durchgeführt ein festes Flüssigkeitsvolumen enthält, die greatly übersteigt physiologischen Mengen. Außerdem fehlt diesem einfachen Modell der natürlichen Tränenströmungskomponente und den Blinkreflex, welche beide Faktoren der Augenumgebung definieren. Die Entwicklung eines anspruchsvollen, physiologisch relevanten Auge &quot;Modell&quot; wird einen multidisziplinären Ansatz erfordern und erfordern erhebliche In - vivo - Validierung. Aus diesen Gründen ist der grundlegende Rahmen für unsere in - vitro - Augenmodell sehr vielseitig, so dass das Modell kontinuierlich durch zukünftige Upgrades und Modulationen verbessert werden. Bis heute ist das Modell der Simulation Tränenvolumen der Lage, Tränenfluss, mechanischer Verschleiß und Luft ausgesetzt. Das Ziel ist es, ein in - vitro - Modell zu erstellen, um aussagekräftige Ergebnisse liefern wird, die in vivo prädiktive und kostenlose und Ex - vivo - Beobachtungen.

<table><tbody><tr><td>Arduino Uno R3 (Atmega328 - assembled)</td><td>Adafruit</td><td>50</td><td>Board</td></tr><tr><td>Stepper motor</td><td>Adafruit</td><td>324</td><td>Motor and Motor shield</td></tr><tr><td>Equal Leg Coupler 1.6mm 1/16&quot;</td><td>VWR</td><td>CA11009-280</td><td>50 pcs of tube connector</td></tr><tr><td>Tubing PT/SIL 1/16&quot;x1/8&quot;</td><td>VWR</td><td>16211-316</td><td>Case of 50feet</td></tr><tr><td>PDMS</td><td>Dow Corning</td><td>Sylgard 184 Solar Cell Encapsulation</td><td></td></tr><tr><td>Agarose, Type 1-A, low EEO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0169-25G</td><td></td></tr><tr><td>PHD UltraTM</td><td>Harvard Apparatus</td><td>703006</td><td>MicroFluidic Pump</td></tr><tr><td>Bovine cornea</td><td>Cargill, Guelph/ON</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soldidworks</td><td>Dassault Systemes</td><td></td><td>Software</td></tr><tr><td>3-D printing</td><td>University of Waterloo - 3D Print Centre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissection tools</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td>General dissection tools</td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>Culture medium storage for cornea</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td>Add to culture medium, 3% total volume</td></tr></tbody></table>

development of an in vitro ocular platform to test contact lenses

Currently, in vitro evaluations of contact lenses (CLs) for drug delivery are typically performed in large volume vials,1-6 which fail to mimic physiological tear volumes.7 The traditional model also lacks the natural tear flow component and the blinking reflex, both of which are defining factors of the ocular environment. The development of a novel model is described in this study, which consists of a unique 2-piece design, eyeball and eyelid piece, capable of mimicking physiological tear volume. The models are created from 3-D printed molds (Polytetrafluoroethylene or Teflon molds), which can be used to generate eye models from various polymers, such as polydimethylsiloxane (PDMS) and agar. Further modifications to the eye pieces, such as the integration of an explanted human or animal cornea or human corneal construct, will permit for more complex in vitro ocular studies. A commercial microfluidic syringe pump is integrated with the platform to emulate physiological tear secretion. Air exposure and mechanical wear are achieved using two mechanical actuators, of which one moves the eyelid piece laterally, and the other moves the eyeballeyepiece circularly. The model has been used to evaluate CLs for drug delivery and deposition of tear components on CLs.

Die synthetisierten Augenformen aus der Werkstatt erhalten und von 3-D - Druck sind in Abbildung 1 dargestellt. Diese Formen können mit einer Vielfalt von Polymeren, wie PDMS und Agarose, verwendet werden Okulare mit den gewünschten Eigenschaften herzustellen. Das bedeutete Montage des Augenmodells Plattform mit einer Mikrofluidik - Spritzenpumpe ist in Abbildung 2 dargestellt. Die Plattform simuliert mechanischen Verschleiß über die Drehung des Augapfels Stück und Lufteinwirkung durch die seitliche Bewegung in die und aus der Augenlidstück. Tränenflüssigkeit bei der gewünschten Strömungsrate aus einer mikrofluidischen Pumpe in das Augenlid infundiert, und die Durchströmungsflüssigkeit in einem 12-Well-Platte gesammelt werden. Das Verfahren für die Präparation eines Rinderlinse und Montage auf einem PDMS - Okular ist in Abbildung 3 dargestellt. Die überschüssigen Gewebe vom Auge abgetrennt und verworfen, gefolgt von der Entfernungder Bindehaut. Die Entfernung der Hornhaut beginnt mit einem Einschnitt in die Sklera am Limbus, Fig . 4 die Vielzahl von Okularen zeigt , die für verschiedene in vitro - Analysen verwendet werden können. Die montierten Augapfel Stücke gezeigt werden aus PDMS synthetisiert, Agar, und ein Ex-vivo Rinderhornhaut auf einem PDMS Augapfel Stück montiert. Abbildung 5 zeigt eine Studie zur Bewertung der Freisetzung eines Antibiotikums Moxifloxacin, von CLs. 18 Wenn im herkömmlichen Fläschchen - Modell gemessen, Wirkstofffreisetzung erfolgt innerhalb der ersten 2 Stunden durch eine Plateauphase folgte. Im Gegensatz dazu zeigt das neuartige Augenmodell Wirkstofffreisetzung langsam und nachhaltig sein für bis zu 24 Std. 18 Eine Studie , die Ablagerung von Cholesterin auf CLs bewerten , wie in Abbildung 6 gezeigt. Das Cholesterin in der Studie fluoreszenz in Form von NBD markiert wurde -Cholesterin (7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazolon-4-yl-Cholesterin) und Deposition wurde mit Laser-Scanning-konfokalen Mikroskopie abgebildet. Die Ergebnisse zeigen, dass es erhebliche Unterschiede, wenn die Ablagerungsstudien in einer Phiole mit dem Augenmodell im Vergleich durchgeführt werden. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/53907/53907fig1.jpg" /> Abbildung 1. Okulare Formen. (A) Eyeball Stück Form von Maschinenwerkstatt. (B) Augendeckel Form von 3-D - Druck. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig1large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig1large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/53907/53907fig2.jpg" /> Abbildung 2. In - vitro - Augen-Plattform. (A) Kreisbewegung simuliert mechanischen Verschleiß. (B) Seitliche Bewegung erzeugt intermittierenden LuftBelichtung. (C) Tränenflüssigkeit Infusion in Augenlid. (D) Sammeln Well - Platte. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig2large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig2large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/53907/53907fig3.jpg" /> Abbildung 3. Dissection und Einbau von Rinderhornhaut. (A) Entfernung von überschüssigem Gewebe. (B) Entfernung von der Bindehaut. (C) Incision in den Limbus Region. (D) Die ausgeschnittene Hornhaut kann auf einem PDMS Augapfels Stück gelagert oder montiert werden. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig3large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig3large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/53907/53907fig4.jpg" /> Abbildung 4. Beispiel Okulare. Beispiel PDMS Okulars mit einer Kontaktlinse, einem Agar - Okulars und ex vivo Rinderhornhaut montiert Okulars. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig4large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Abbildung 5" src="/files/ftp_upload/53907/53907fig5.jpg" /> Abbildung 5. Drug Delivery mit der in - vitro - Augen-Plattform. Freisetzung von Moxifloxacin aus dem täglichen Einweg - Kontaktlinsen aus (A) ein großes Volumen statische Fläschchen und (B) das Augenmodell (Re-Print mit freundlicher Genehmigung von der Association for Research in Vision and Ophthalmologie). 18 Alle angegebenen Daten sind als Mittelwert ± Standardabweichung. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig5large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <pclass = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; <img alt="Figur 6" src="/files/ftp_upload/53907/53907fig6.jpg" /> Abbildung 6. Cholesterin Ablagerung unter Verwendung der in - vitro - Augen-Plattform. Konfokalbilder einen Querschnitt von Etafilcon A zeigt, Nelfilcon A, nesofilcon A, Ocufilcon B, delefilcon A, somofilcon A, narafilcon A nach 4 h Inkubation mit NBD-Cholesterin in der Fläschchen und Augenmodell. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig6large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53907/53907fig6large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a>

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Development of an In Vitro Ocular Platform to Test Contact Lenses

Aktuelle In - vitro - Modelle zur Bewertung von Kontaktlinsen (CLS) und andere Augenbezogene Anwendungen sind stark eingeschränkt. Die dargestellte Augen Plattform simuliert physiologische Tränenfluss, Tränenvolumen, Lufteinflüssen und mechanischer Verschleiß. Dieses System ist sehr vielseitig und kann auf verschiedene in vitro mit CLs Analysen angewendet werden.

Entwicklung eines<em&gt; In Vitro</em&gt; Ocular Platform Kontaktlinsen zu Test

Currently, in vitro evaluations of contact lenses (CLs) for drug delivery are typically performed in large volume vials,1-6 which fail to mimic ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Development of an In Vitro Ocular Platform to Test Contact Lenses

10.5K Aufrufe.  University of Waterloo.  Aktuelle In - vitro - Modelle zur Bewertung von Kontaktlinsen (CLS) und andere Augenbezogene Anwendungen sind stark eingeschränkt. Die dargestellte Augen Plattform simuliert physiologische Tränenfluss, Tränenvolumen, Lufteinflüssen und mechanischer Verschleiß. Dieses System ist sehr vielseitig und kann auf verschiedene in vitro mit CLs Analysen angewendet werden. 

Serie: Development of an In Vitro Ocular Platform to Test Contact Lenses

Microfabricated Platforms for Mechanically Dynamic Cell Culture

The ability to systematically probe in vitro cellular response to combinations of mechanobiological stimuli for tissue engineering, drug discovery or fundamental cell biology studies is limited by current bioreactor technologies, which cannot simultaneously apply a variety of mechanical stimuli to cultured cells. In order to address this issue, we have developed a series of microfabricated platforms designed to screen for the effects of mechanical stimuli in a high-throughput format. In this protocol, we demonstrate the fabrication of a microactuator array of vertically displaced posts on which the technology is based, and further demonstrate how this base technology can be modified to conduct high-throughput mechanically dynamic cell culture in both two-dimensional and three-dimensional culture paradigms.

In this protocol, we demonstrate the fabrication of a microactuator array of vertically displaced posts on which the technology is based, and how this base technology can be modified to conduct high-throughput mechanically dynamic cell culture in both two-dimensional and three-dimensional culture paradigms.

Mikrofabrizierten Plattformen für Mechanisch Dynamische Cell Culture

The ability to systematically probe in vitro cellular response to combinations of mechanobiological stimuli for tissue engineering, drug discovery or ...

Forschung

Biotechnik

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to follow and manipulate the wound response ex vivo in an environment that closely mimics that of epithelial tissue injury in vivo. This issue was addressed by creating a clinically relevant epithelial ex vivo injury-repair model based on cataract surgery. In this culture model, the response of the lens epithelium to wounding can be followed live in the cells&#8217; native microenvironment, and the molecular mediators of wound repair easily manipulated during the repair process. To prepare the cultures, lenses are removed from the eye and a small incision is made in the anterior of the lens from which the inner mass of lens fiber cells is removed. This procedure creates a circular wound on the posterior lens capsule, the thick basement membrane that surrounds the lens. This wound area where the fiber cells were attached is located just adjacent to a continuous monolayer of lens epithelial cells that remains linked to the lens capsule during the surgical procedure. The wounded epithelium, the cell type from which fiber cells are derived during development, responds to the injury of fiber cell removal by moving collectively across the wound area, led by a population of vimentin-rich repair cells whose mesenchymal progenitors are endogenous to the lens1. These properties are typical of a normal epithelial wound healing response. In this model, as in vivo, wound repair is dependent on signals supplied by the endogenous environment that is uniquely maintained in this ex vivo culture system, providing an ideal opportunity for discovery of the mechanisms that regulate repair of an epithelium following wounding.

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Described here is the establishment of a clinically relevant ex vivo mock cataract surgery model that can be used to investigate mechanisms of the injury response of epithelial tissues within their native microenvironment.

Einrichtung von einem klinisch relevanten<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Kataraktchirurgie Modell zur Untersuchung von epithelialen Wundheilung in einer nativen Mikromilieu

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Entwicklungsbiologie

Synthesis of Soft Polysiloxane-urea Elastomers for Intraocular Lens Application

This study discusses a synthesis route for soft polysiloxane-based urea (PSU) elastomers for their applications as accommodating intraocular lenses (a-IOLs). Aminopropyl-terminated polydimethylsiloxanes (PDMS) were previously prepared via the ring-chain equilibration of the cyclic siloxane octamethylcyclotetrasiloxane (D4) and 1,3-bis(3-aminopropyl)-tetramethyldisiloxane (APTMDS). Phenyl groups were introduced into the siloxane backbone via the copolymerization of D4 and 2,4,6,8-tetramethyl-2,4,6,8-tetraphenyl-cyclotetrasiloxane (D4Me,Ph). These polydimethyl-methyl-phenyl-siloxane-block copolymers were synthesized for increasing the refractive indices of polysiloxanes. For applications as an a-IOL, the refractive index of the polysiloxanes must be equivalent to that of a young human eye lens. The polysiloxane molecular weight is controlled by the ratio of the cyclic siloxane to the endblocker APTMDS. The transparency of the PSU elastomers is examined by the transmittance measurement of films between 200 and 750 nm, using a UV-Vis spectrophotometer. Transmittance values at 750 nm (upper end of the visible spectrum) are plotted against the PDMS molecular weight, and &#62; 90% of the transmittance is observed until a molecular weight of 18,000 g&#183;mol&#8722;1. Mechanical properties of the PSU elastomers are investigated using stress-strain tests on die-cut dog-bone-shaped specimens. For evaluating mechanical stability, mechanical hysteresis is measured by repeatedly stretching (10x) the specimens to 5% and 100% elongation. Hysteresis considerably decreases with the increase in the PDMS molecular weight. In vitro cytotoxicity of some selected PSU elastomers is evaluated using an MTS cell viability assay. The methods described herein permit the synthesis of a soft, transparent, and noncytotoxic PSU elastomer with a refractive index approximately equal to that of a young human eye lens.

This study describes synthetic routes for aminopropyl-terminated polydimethylsiloxanes and polydimethyl-methyl-phenyl-siloxane-block copolymers and for soft polysiloxane-based urea (PSU) elastomers. It presents the application of PSUs as accommodating an intraocular lens. An evaluation method for in vitro cytotoxicity is also described.

Synthese von weichen Polysiloxan-Harnstoff-Elastomeren für Intraokularlinsen Anwendung

This study discusses a synthesis route for soft polysiloxane-based urea (PSU) elastomers for their applications as accommodating intraocular lenses ...

Chemie

Anterior Segment Organ Culture Platform for Tracking Open Globe Injuries and Therapeutic Performance

Open globe injuries have poor visual outcomes, often resulting in permanent loss of vision. This is partly due to an extended delay between injury and medical intervention in rural environments and military medicine applications where ophthalmic care is not readily available. Untreated injuries are susceptible to infection after the eye has lost its watertight seal, as well as loss of tissue viability due to intraocular hypotension. Therapeutics to temporarily seal open globe injuries, if properly developed, may be able to restore intraocular pressure and prevent infection until proper ophthalmic care is possible. To facilitate product development, detailed here is the use of an anterior segment organ culture open globe injury platform for tracking therapeutic performance for at least 72 h post-injury. Porcine anterior segment tissue can be maintained in custom-designed organ culture dishes and held at physiological intraocular pressure. Puncture injuries can be created with a pneumatic-powered system capable of generating injury sizes up to 4.5 mm in diameter, similar to military-relevant injury sizes. Loss of intraocular pressure can be observed for 72 h post-injury confirming proper injury induction and loss of the eye&#39;s watertight seal. Therapeutic performance can be tracked by application to the eye after injury induction and then tracking intraocular pressure for multiple days. Further, the anterior segment injury model is applicable to widely used methods for functionally and biologically tracking anterior segment physiology, such as assessing transparency, ocular mechanics, corneal epithelium health, and tissue viability. Overall, the method described here is a necessary next step toward developing biomaterial therapeutics for temporarily sealing open globe injuries when ophthalmic care is not readily available.

Open globe eye injuries may go untreated for multiple days in rural or military-relevant scenarios, resulting in blindness. Therapeutics are needed to minimize loss of vision. Here, we detail an organ culture open globe injury model. With this model, potential therapeutics for stabilizing these injuries can be properly evaluated.

Anterior Segment Organ Culture Platform zur Verfolgung von Open Globe Verletzungen und therapeutischer Leistung

Open globe injuries have poor visual outcomes, often resulting in permanent loss of vision. This is partly due to an extended delay between injury and ...

Biomechanische Charakterisierung einer Schweineokularlinse mit automatisierter Kompression

Automated Compression Testing of the Ocular Lens

The biomechanical properties of the ocular lens are essential to its function as a variable power optical element. These properties change dramatically with age in the human lens, resulting in a loss of near vision called presbyopia. However, the mechanisms of these changes remain unknown. Lens compression offers a relatively simple method for assessing the lens' biomechanical stiffness in a qualitative sense and, when coupled with appropriate analytical techniques, can help quantify biomechanical properties. A variety of lens compression tests have been performed to date, including both manual and automated, but these methods inconsistently apply key aspects of biomechanical testing such as preconditioning, loading rates, and time between measurements. This paper describes a fully automated lens compression test wherein a motorized stage is synchronized with a camera to capture the force, displacement, and shape of the lens throughout a preprogrammed loading protocol. A characteristic elastic modulus may then be calculated from these data. While demonstrated here using porcine lenses, the approach is appropriate for the compression of lenses of any species.

Autor im Rampenlicht: Besseres Verständnis altersbedingter Veränderungen der Linsensteifigkeit 

We present an automated method for characterizing the effective elastic modulus of an ocular lens using a compression test.

Automatisierte Kompressionsprüfung der Okularlinse

The biomechanical properties of the ocular lens are essential to its function as a variable power optical element. These properties change dramatically ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

Entwicklung eines nichtinvasiven, laserunterstützten Versuchsmodells des cornealen Endotheliaalzellverlustes

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...

Medizin

Microfabrication of Implantable Optics Integrated in a Microstructured Imaging Window for Advanced In Vivo Imaging

In the context of biomaterials and drug testing in animal models, this study presents a streamlined protocol for fabricating a novel implantable integrated imaging window. The micro-device comprises a sophisticated system of microlenses coupled with micro-scaffolds specifically designed for in vivo quantification of the immune response using advanced non-linear excitation microscopy. The protocol is based on two-photon polymerization (2PP) of the biocompatible photoresist SZ2080, which enables the fabrication of micro-scaffolds and micro-lenses in a continuous sequence to enhance manufacturing efficiency and precision. To further improve speed, accuracy, and structural integrity, a hybrid optics fabrication approach was implemented, involving the 2PP of the microlens outer shell followed by UV bulk crosslinking of the inner core. This innovative technique optimizes the optical properties of the microlenses while streamlining the production process. The resulting micro-device demonstrates high reproducibility and mechanical stability, making it an effective method for prototyping microscale optical systems for a range of biomedical applications.

This protocol describes the fabrication of an implantable integrated imaging window using 3D laser printing. The window consists of a system of microlenses coupled with micro-scaffolds. The method involves two-photon polymerization (2PP) of the biocompatible photoresist SZ2080 in a continuous sequence, optimizing manufacturing efficiency and alignment between the different components.

Mikrofabrikation von implantierbaren Optiken, die in ein mikrostrukturiertes Bildgebungsfenster integriert sind, für fortschrittliche In-vivo-Bildgebung

In the context of biomaterials and drug testing in animal models, this study presents a streamlined protocol for fabricating a novel implantable ...

Organ Culture System for Assessing the Toxicity of Intraocular Treatment Excipients and Pharmaceuticals

As the leading cause of blindness, cataracts are a significant burden for the tens of millions of people affected globally by this condition. Chemical exposures, among other environmental factors, are an established cause of cataracts. Ocular toxicity testing can assess whether pharmaceuticals and their components may contribute to lens damage that may lead to cataracts or aid the treatment of cataracts. 
In vitro studies and in vivo animal testing can be used for assessing the safety of chemicals prior to clinical studies. The Draize test-the current in vivo standard for ocular toxicity and irritancy testing-has been criticized for lack of sensitivity and objective measurements of determining ocular toxicity. In vitro cell-based assays are limited as cell cultures cannot appropriately model an intact functional lens. 
The method described here is a sensitive in vitro alternative to animal testing, designed to evaluate the response of the intact bovine lens to treatment at both the cellular activity level and for overall refractive performance. The non-toxic reagent resazurin is metabolized in proportion to the level of cell activity. The lens laser-scanner assay measures the ability of the lens to refract incident beams of light to a single point with minimal error, directly relevant to its natural function. The method may be used to determine both acute and delayed changes in the lens, as well as the recovery of the lens from chemical or environmental exposures.

The goal of this protocol is to evaluate changes in metabolic activity and refractive function of the lens in response to experimental treatment.

As the leading cause of blindness, cataracts are a significant burden for the tens of millions of people affected globally by this condition. Chemical ...

Entwicklung eines

Zusammenfassung

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Mikrofabrizierten Plattformen für Mechanisch Dynamische Cell Culture

Einrichtung von einem klinisch relevanten

Synthese von weichen Polysiloxan-Harnstoff-Elastomeren für Intraokularlinsen Anwendung

Anterior Segment Organ Culture Platform zur Verfolgung von Open Globe Verletzungen und therapeutischer Leistung

Automatisierte Kompressionsprüfung der Okularlinse

Automatisierte Kompressionsprüfung der Okularlinse

Automatisierte Kompressionsprüfung der Okularlinse

Entwicklung eines nichtinvasiven, laserunterstützten Versuchsmodells des cornealen Endotheliaalzellverlustes

Mikrofabrikation von implantierbaren Optiken, die in ein mikrostrukturiertes Bildgebungsfenster integriert sind, für fortschrittliche In-vivo-Bildgebung

Organ Culture System for Assessing the Toxicity of Intraocular Treatment Excipients and Pharmaceuticals