治疗剂与聚乙烯醇包衣医疗器械偶联的验证

我们的研究集中在我们的肠道扩张套和阴道扩张套上，它们都提供分散注意力的力量，已被证明可以显着延长肠道和阴道管。我们希望通过添加基于蛋白质的疗法来优化我们的设备，以帮助最大限度地减少部署这些设备后的局部炎症和纤维化。通过将这些治疗剂直接结合到我们的设备上，我们可以绕过直接针对我们感兴趣区域的局部剂量进行全身给药的需要。

这种定位将允许降低药物剂量，降低全身副作用的风险，并降低治疗成本。未来，我们希望确定这些与我们的 PVA 包衣设备结合的基于蛋白质的疗法的释放率，这对于确定不同类型治疗的药物剂量是必要的。首先，将 5 克 PVA 加入 100 毫升去离子水中，制备 5% 聚乙烯醇或 PVA 溶液。

在热板上搅拌混合物以帮助溶解。接下来，通过将 1 毫克 GLP-2 加入 1 毫升去离子水中，制备每毫升 1 毫克胰高血糖素样肽 2 或 GLP-2 溶液。在玻璃移液器上预收缩肠道扩张套管和阴道扩张套管，用紧紧安装在玻璃移液器和套管周围的切割塑料移液器稳定末端。

使用小画笔用 5% PVA 溶液涂刷预先收缩的套筒。让袖子在室温下干燥 10 分钟，每层之间。第五层涂层干燥后，将预先收缩的套筒放入化学安全罩下的干燥物中。

将 3 毫升 25% 戊二醛和 3 毫升 94% 至 98% 硫酸加入干燥器中单独的开口烧杯中，以允许蒸汽反应并将 PVA 膜交联到袖套上。交联 48 小时后，从腔室中取出套筒，让戊二醛蒸发 15 分钟。将 50 微升 GLP-2 溶液移液到每个交联套筒上以备后用。

为了使 GLP-2 的标准曲线与 PVA 结合，将 50 微升 5% PVA 移液到 24 孔板的 18 个孔的底部。将 6 个孔留空，以固定肠道扩张套管和阴道扩张套管，每种类型的装置有 3 个孔。让 PVA 层在 120 摄氏度的烤箱中干燥一夜。

第二天，将 24 孔板放入化学安全罩下的干燥液中。将 3 毫升 25% 戊二醛和 3 毫升 94% 至 98% 硫酸加入干燥器内单独的开口烧杯中，以允许蒸汽反应并将 PVA 膜交联到 24 孔板上。交联 48 小时后，从干燥器中取出 24 孔板，让戊二醛蒸发 15 分钟。

接下来，通过将 250、150、25 和 0 微升 1 毫克/毫升的 GLP-2 溶液添加到各自的标记孔中来产生浓度梯度。然后，将药物包被的肠道和阴道扩张套管放入各自的孔中。将相应的 GLP-2 浓度和药物包被的肠道扩张套管和阴道扩张套管添加到孔中后，将 24 孔板在 4 摄氏度下冷藏过夜，以允许药物结合。

第二天，向每个孔中加入 2 毫升每毫升 1 毫克的奶粉，溶于去离子水封闭溶液中，持续 1 小时。封闭后，用 PBS 洗涤每个孔 3 次，每次洗涤 5 分钟。将 40 μL 兔抗 GLP-2 抗体添加到 50 mL 去离子水中，制备兔抗 GLP-2 抗体。

然后，向板的每个孔中加入 2 mL 抗体溶液。将盘子在 4 摄氏度下冷藏过夜。第二天，用 PBS 洗涤每个孔 3 次，每次洗涤 5 分钟。

将 20 毫升抗体添加到 40 毫升去离子水中，制备抗兔 IgG 碱性磷酸酶二抗溶液。向每个孔中加入 2 mL 二抗溶液，并在室温下孵育 2 小时。用 PBS 洗涤孔后，向每个孔中加入 2 毫升碱性磷酸酶蓝微孔底物并孵育 20 分钟。

在孵育过程中，当溶液的颜色从黄色变为蓝色时，监测反应。将 200 μL 溶液从每个孔中移液到标记的 96 孔板中，以终止反应。使用吸光度酶标仪在 620 纳米波长下读取 96 孔板。

生成标准曲线并计算 PVA 涂层套筒上 GLP-2 的浓度。肠道扩张套管和阴道扩张套管装置的 GLP-2 浓度平均为每平方厘米 22.69 微克，与 24 孔板上 50 微克孔中的浓度为每平方厘米 23.7 微克相似。