使用附睾白色脂肪组织进行脂肪覆盖的胰岛移植

该协议可以评估胰岛植入白色脂肪组织的机制。这种脂肪覆盖的胰岛移植方法的主要优点是它在技术上易于复制。该方法可应用于其他疾病模型。

例如，它可用于创建癌症的小鼠模型。演示该程序的将是福冈大学副教授Naoaki Sakata。在解剖显微镜下，使用P 200微量移液管从胰腺消化中去除任何额外的胰岛成分，包括腺泡和纤维组织。

然后使用细胞过滤器过滤掉单个腺泡细胞。将过滤后的胰岛转移到含有补充有牛血清或白蛋白的适当培养基或缓冲溶液的新培养皿中，并旋转培养皿以将胰岛定位在中心。使用 P 200 微量移液器，将各个胰岛挑入适当的收集管中。

将一个新的 40 微米细胞过滤器放在 50 毫升塑料管的顶部。使用1000微升移液器将胰岛添加到过滤器中，以分离胰岛和单个腺泡细胞。使用镊子将过滤器倒置在新的60或100毫升大小的未处理培养皿上，该培养皿含有培养基或适当的缓冲溶液，并补充有牛血清或白蛋白。

使用新鲜培养基或缓冲液将胰岛冲洗到新的培养皿中，然后在培养皿中加入足够的培养基或缓冲液，以达到约20毫升的总体积。在显微镜下计数胰岛，并根据供体动物的数量在单独的1.5毫升塑料离心管之间平均分配胰岛的数量。在室温下以2， 100G离心胰岛一分钟，弃去上清液。

大约 20 至 30 微升的残留溶液通常会留在管中。从腹部去除毛发以防止感染后，将鼠标置于仰卧位。对腹部和腹股沟区域进行消毒后，在较低的中位区域切开皮肤，形成长约2厘米的皮肤切口。

用镊子或牵开器夹住左腹壁，并将组织拉到小鼠的左侧以固定手术区域。使用棉签将小肠和大肠移动到小鼠的右侧。腹腔中的左表皮白色脂肪组织位于左腹股沟区域。

将表皮白色脂肪组织和左侧睾丸移动到腹部外侧并伸展组织。使用 P 200 微量移液器从一个 1.5 毫升管中收集整个胰岛体积，注意收集时管中没有胰岛。让收集的胰岛通过重力沉淀在移液器的尖端。

将微量移液器吸头轻轻放在膨胀的脂肪组织上，注意防止吸头中的培养基或缓冲液过度冲洗。小心地将胰岛播种到组织上。播种后，在解剖显微镜下确认胰岛的正确放置。

用表皮白色脂肪组织覆盖胰岛，然后将左睾丸置于游离体白色脂肪组织下，并将组织返回腹膜腔。使用4-o缝合线将皮肤封闭成两层。完成后，将鼠标放在加热灯下并监视它，直到完全恢复。

为了比较脂肪覆盖胰岛移植与腹膜内胰岛移植后的移植效果，将相同数量的胰岛植入对照受体糖尿病动物左侧结肠旁间隙的腹膜上。观察到脂肪覆盖胰岛移植小鼠的血糖水平与腹膜内胰岛移植小鼠相比逐渐显着降低。移植后一个月进行腹膜内葡萄糖耐量试验。

脂肪覆盖胰岛移植小鼠的血糖维持在低于腹膜内胰岛移植小鼠观察到的水平。组织学检查用于评估胰岛植入表皮白色脂肪组织的情况。在脂肪覆盖的胰岛移植受者动物中，苏木精始新世染色显示表皮白色脂肪组织中存在胰岛。

此外，胰岛素阳性胰岛的荧光偶联抗体染色有助于检测所有受体小鼠表皮白色脂肪组织中的血管性血友病因子阳性微血管。为了成功进行此过程，请确保让胰岛完全沉降在移液器的尖端，并将它们播种到脂肪组织上而不会溢出。