使用硫二甘酸（TGA）估计植物生物质木质素含量

利格宁是一种复杂的异质体，由三种单酚组成。它是地球上仅次于纤维素的第二大富合物。在这里，我们演示了硫化物酸方法，这是估计木质素含量的最可靠方法。

这种方法基于木质素通过硫酸结合硫二甲酸的原则。此外，我们把该协议分为五个阶段。在第一阶段，我们准备植物材料。

在第二阶段，我们分离酒精不溶性提取物。在第三阶段，我们使用硫化物酸和酸性条件沉淀木质素。在第四阶段，我们使用工业竹木质素准备木质素标准曲线。

最后，在第五阶段，我们使用第四阶段准备的标准曲线估计木质素含量。收集植物材料，翻转锅根，在水中彻底清洗，空气干燥两天，将它们转移到标记容器中，并在49摄氏度的孵化器中孵化一周至10天。使用剪刀，组织进一步切成1毫米至3毫米大小的碎片。

或者生物质研磨机用于粉碎植物组织。使用根组织 打开生物质研磨机将碎粉收集到预先标记的容器中。同样，重复茎组织和叶组织。

碎粉被装进研磨花瓶，然后放入冰柜磨坊，以10 CP的速度运行冷冻机三个周期。称20毫克的地面组织粉末，并转移到预制的2毫升管。在实验室笔记本中用组织粉末和组织粉做空管和管子的笔记。

将带盖子在 60 摄氏度开启的管子孵化一小时。孵化后，在15，000 RPM的每个样品涡离心机中加入1.8毫升水，10分钟。丢弃超自然添加1.8毫升甲醇。

在15，000 RPM孵化离心机10分钟后，在预热的60摄氏度区块中涡流和孵育20分钟。再重复一次此步骤。离心后丢弃超自然剂，在真空干燥机中干燥颗粒两到三个小时，或直到托盘完全干燥。

测量并记录实验室笔记本中每个管子的重量，以估算末尾的木质素含量。还包括积极控制工业竹木质在此点开始从0.5毫克到4毫克三脚架。在每个样品漩涡中加入1毫升3种普通盐酸，以及100微升甘油酸，在80摄氏度下孵育3小时。

3小时后孵化将它们转移到机架上，并让它冷却10分钟。然后离心机在 15，000 RPM 10 分钟。离心后，解决方案的颜色看起来像这样。

丢弃超自然人。加入1毫升水。漩涡离心机在 15，000 RPM 10 分钟。

丢弃超自然人。加入1毫升1个正常氢氧化钠。涡流和孵化在37摄氏度摇床过夜。

经过一夜孵化离心机，管子在15，000 RPM下10分钟。将超自然新鲜预标记的 2 毫升管转移到超自然人中，加入 200 微升浓缩盐酸。如此处所示，通过温和的反转混合它们。

在冰箱中以4摄氏度的气温进行孵化。在 15，000 RPM 的孵育离心机后，10 分钟。丢弃超自然人。

加入1毫升氢氧化钠。在室温下在摇床中旋转和孵化10至15分钟。使用光谱仪收集吸收读数280纳米，将2微升氢氧化钠作为空白，因为沉淀的木质素溶解在氢氧化钠中。

将空白归零。同样，重复的样品。使用每个样本中的两个微升器来收集实验室笔记本中的吸收读数。

每个样本需要三个读数，用于三个技术复制。在第一列中，我们有示例编号。在第二列中，我们有生物复制，其中R1、R2、R3代表一条实验线的三个生物复制品。

在第三列中，我们平均吸收读数为280纳米。我们使用公式 y=mx-c 计算了第四列中的木质素含量，其中 x 是平均 OD .m 和 c 值是从编写的标准曲线的回归线绘制的。第五列是甲醇和水洗涤后的重量。

因此，这是用于估计毫克中的木质素含量的方式。因此，我们将第四列获得的价值除以第五列，以获得第六列中每毫克木质素含量的价值。并且这个值乘以1000，以获得每克细胞壁的重量。

木质素含量的百分比是通过将这个值除以1000和乘以100来计算的。最后，我们通过平均每个实验线的三个生物复制品的木质素来获得平均木质素，这些生物复制品将以条形图的形式与另一条实验线的平均值进行比较，以了解木质素含量的差异。我们也可以应用学生测试来测试他们的重要性。

在A列中，我们有商业竹木质素，然后是TGA之前服用的竹木质素的重量，以及它们各自在280纳米的吸收读数。表 A 中的这些值用于在 B 列中绘制一个分散的图形，从而提供带有 m 和 c 值的回归线。在C中，我们比较了使用标准曲线获得的值，工业竹木质素实验线一、二以条形图的形式进行了比较，结果显示它们之间存在差异。