使用腺相关病毒在小鼠中瞄准科菲林操纵的大脑皮层区域的电皮质记录

此协议可用于识别特定单个分子靶点在不同维吉林州电皮质活性调节中的作用。使用腺相关病毒的好处之一是能够精确定位给定的大脑区域和特定的细胞类型。展示协议的将是朱利安·杜福特-格瓦斯，一个来自我团队的研究员。

在确认麻醉的12周大的老鼠对脚趾捏反射缺乏反应后，使用修剪头发器将头发从耳朵后部剃到眼睛之间的前脑勺。在每只眼睛上加入一滴大方的眼科软膏，以防止脱水，并用耳塞小心地将鼠标头部固定在立体定向仪器上。轻轻地把舌头从嘴里拉出来，以免窒息。

将鼠标的鼻子固定在仪器上，并使用 70% 乙醇对头部暴露的皮肤进行消毒。用超细的格雷夫钳子握住皮肤，使用组织剪刀将皮肤从耳朵底部切到眼睛的水平，并在切口的每一侧放置两个手术夹子来伸展皮肤和露出头骨。避免脑缝合，使用剪刀尖划伤头骨表面，以去除腹膜，并在两个或多个方向上创建重叠的条纹。

使用70%乙醇去除骨骼碎片并消毒头骨。用先前准备好的管子固定在立体声臂上，确定布雷格玛和兰姆达的位置，并注意每个的立体定向坐标。使用立体式手臂和笔标记颅骨上1.5毫米横向右至中线和1.5毫米前胸腺的管子位置。

使用 0.7 毫米钻头，小心地刺穿与头骨表面垂直的标记位置的头骨，并与垂直轴对齐，用浸泡在 10% 贝塔丁 povidone 碘溶液中的无菌棉尖清洗头骨，然后用一个微升气泡将 10 微升注射器的柱塞缩回一个微升注射器，用一个微升气泡加载管子。接下来，将感兴趣的 AAV 混合物与慢管混合，并将混合物的 1.7 微升添加到无菌的 Petri 盘中。使用此注射器将溶液的 1.5 微升加载到管中，并在连接的 PE50 管上标记气泡的位置。

垂直对齐管与头骨中的孔，使管子到达骨骼的上边缘，并标记头骨表面的Z坐标。慢慢降低管子，直到尖端达到1.5毫米以下的头骨表面和运动皮层的第五层，并启动注射器泵以0.025微升每分钟流速提供一微升的AAV超过40分钟。使用管中的气泡跟踪喷射，并在必要时进行任何调整。

当整个病毒体积被传递时，将管子留在原位五分钟，以确保充分扩散，避免回流，然后慢慢小心地抬起立体应力臂，将管子从皮层中取出。对于电极植入，使用直 Kelly 钳子用直金丝慢慢拧入注入 AAV 的孔的垂直轴，将至少 2.5 毫米的螺丝留在头骨外，以尽量减少对杜拉和大脑皮层的损害。使用笔标记参考电极的位置 2.6 毫米横向右到中线和 0.7 毫米后布雷格马和后心电图电极的位置在 1.5 毫米横向右到中线和 1.5 毫米前兰姆达和左半球三个维护螺丝的位置，没有特定的坐标， 但尽可能远离对方和电致皮质电极。

使用钻头小心地刺穿头骨垂直于头骨表面的其他电极和螺丝的标记位置，并用10%的碘溶液清洗穿孔头骨。在安装螺丝以防止出血和污染之前，用细腻任务擦拭小卷片块块住孔，并使用直 Kelly 钳子将螺丝插入钻孔中，其角度与孔被刺穿的角度相同。将几滴牙科水泥放入螺丝内环状空间的中心，并使用超细的格雷夫钳子将皮肤提升到颈部肌肉上方。

使用Dumont五号钳子，保持一个电极的弯曲四肢，并将其插入肌肉约一到两毫米。将电极的弯曲侧和折叠点放入牙科水泥中，以同样的方式插入第二个电极。覆盖动物的眼睛后，应用光三到五分钟来凝固水泥，并使用额外的牙科水泥覆盖电致皮质电极和锚螺丝的基础，形成冠状轮廓。

再应用三到五分钟的光线后，用丙烯酸水泥填充蒙太奇的中心，并取出手术夹。使用合成可吸收的单丝缝合线关闭蒙太奇前部和背面的皮肤，使头骨不暴露，并使用弯曲的钳子将连接器固定在蒙太奇上方，小心地将电极的金丝与接头销对齐，然后快速将每个极极四肢焊接到单个相应的连接器销中。将鼠标从框架中取出后，用丙烯酸水泥覆盖连接器和头部之间的空位。

称量后，将鼠标放在一个干净的笼子里，在热垫上盖上非网盖。手术后两周，将小鼠连接到记录电缆，至少一周后，记录电皮质和电致电信号24小时或更长时间。注射部位周围运动皮层内神经元的HA染色证实感染成功，表明存在科菲林S3D HA。与兴奋神经元标记卡姆基阿尔法共同染色表示在高放大下清晰的科菲林 S3D HA 和 CaMKII 阿尔法共同表达。

日志转换了唤醒、慢波睡眠和自相矛盾睡眠的相对功率光谱，显示在 cofilin 灭活下光谱活动的特定状态差异。电皮质记录和AAV介质操纵精确分子靶点的组合也适用于多个大脑区域和其他神经科学子领域，如癫痫或记忆研究，除了睡眠。