小鼠动脉粥样硬化的定量

心血管疾病是全球死亡的主要原因。小鼠模型是研究这种疾病的有用工具，我们的协议可用于量化小鼠动脉硬化。使用此协议，病变大小可以在三个血管位置测量。

主动脉根、主动脉拱和胸脑动脉。在小鼠中对动脉硬化进行量化可能是一项乏味的任务。我们已经提供了详细的步骤，我们希望可以加快这一进程。

其中一些步骤很难以书面形式描述。我们希望，这个视频将帮助您获得强大的动脉硬化病变大小分析。按照标准程序采集小鼠心脏后，将心脏放在软木床上，腹侧放在解剖显微镜下，用针头将心脏固定到软木塞上，穿过顶点。

用解剖钳握住心脏底部，用手术刀在下垂平面上以20度角高角握住，在横向平面上用20度颅骨，切开心脏的三分之二。将大院根和心脏底部嵌入最佳切削温度化合物（或 OCT）中，用钳子轻轻挤压心脏，用复合物填充大院心根并清除任何气泡。将试样转移到充满 OCT 的低温的底部，将大干根垂直于底部表面，将化合物冷冻在干冰上。

然后将组织样品存放在零下80摄氏度的冷冻袋中，直到冷冻。要准备一个固定床进行面膜分析，请折叠一段石蜡膜八次，使表面平整 25 x 25 mm，并在薄膜周围包裹黑色电绝缘胶带，使大音大音具有深色背景。在固定床的背面放置标签，并使用铅笔记录鼠标识别号。

将大阳高拱门转移到固定床，并在组织中加入一滴 PBS。使用立体显微镜，从剩余的脂肪组织中清洁大动脉，并使用 Vannas 剪刀和 Dumont 钳子轻轻剥离所有周围的脂肪组织，而不会操纵或损坏大动脉。接下来，将Vannas剪刀引入大音流明，以暴露刺激表面。

开始在近面方向上切割上升拱门的外曲率，继续切开枝条，包括脑动脉，并保留下降胸腔区域的后缘部分。要显示刺激表面，请切开较小的曲率并折叠打开大母。使用微型 Castroviejo 针架，用细小昆虫针的钝端固定固定到固定床的开放式拱门，无需拉伸标本，在组织固定到位时轻轻弯曲针脚远离标本。

然后在四摄氏度的 PBS 培养皿中存储固定拱脸。对于苏丹IV染色，在70%乙醇的培养皿中冲洗标本5分钟，拱门朝下，然后将标本转移到苏丹IV工作溶液的培养皿中7分钟。在孵育结束时，用两次三分钟在80%乙醇中清洗样品，以去污渍正常的刺激表面，然后用PBS进行最后冲洗，然后再将组织返回其原来的培养皿。

然后在以 10 倍放大倍率连接到数码相机的立体显微镜下获取显微图，获取浸入 PBS 中的固定拱门的图像，使用小金属重量将固定床固定在 Petri 盘的底部。要获得嵌入式大干根的低温，请将低温温度设置为零下20摄氏度，将截面厚度设置为10微米。将包含大音根的 OCT 块安装在试样支架上，心室组织朝外。

如果需要，使用一些额外的 OCT 固定定位。大音根现在应垂直于刀刃。在普通显微镜幻灯片上收集包含心肌组织的初始控制部分，在光学显微镜下每 200 微米检查组织的进展。

当出现第一个大音尖时，将试样向零尖倾斜，使剖面与其他两个尖点对齐，并计算从零点开始切割的每 10 微米截面。开始收集90微米和以后根据幻灯片计划进行分析的截面，直到从零点达到800微米。计算大动脉根总容器面积的病变分数，使数据在剖切过程中对可能的角度差异不那么敏感。

此外，可以说明计算曲线下的面积或每只小鼠的阿瑟托病变大小，并在点图中显示数据，以进一步可视化组内的个体变异。病变脂质积累可以通过颜色阈值油红O阳性区域的总病变面积进行量化。左右冠状动脉通常与主动脉偏离主动脉约250微米，主动脉鼻窦通常与最突出的病变大小相吻合。

移除面大音的代表性图像中的深色背景可以增强视觉显示。病变大小通常分布在组内，允许使用学生 t-test 在组之间进行统计分析。我们建议您使用一些测试材料练习，直到您获得足够的技能来处理实验样品。

如果各组之间的病变大小不同，应确定机制，因为病变组成分析通常是下一步要追求的。