يصف هذا البروتوكول بالتسلسل الخطوات التي ينطوي عليها تحريض التهاب سطح العين وجمع الأعضاء المصابة المرتبطة بها المشاركة في خلل وظيفي في غدة ميبوميان. يتيح هذا النموذج الجديد من MGD التحقيق في الجانب المناعي الفطري للمرض ، وخاصة تشكيل مصائد العدلات خارج الخلية التي تسد غدة Meibomian. يمكن توسيع التقنية المعروضة في البروتوكول لتقديم التدخلات العلاجية الموضعية في مرحلة ما قبل السريرية.
علاوة على ذلك ، فإن مجموعة الإفرازات والأعضاء العينية تعكس فعالية العلاج. لإجراء الحقن داخل الصفاق لمحلول المناعة ، أمسك أنثى الفأر الأسود C57 البالغ من العمر سبعة إلى تسعة أسابيع برفق من الذيل أثناء الإمساك بشبكة القفص. ثم أمسك جلد الظهر ومنطقة الرقبة بإحكام بين الإبهام والسبابة وثبت الذيل والأطراف السفلية بين الخاتم والإصبع الصغير ضد راحة اليد.
مع إبقاء الماوس ثابتا برأسه لأسفل ، قم بحقن 100 ميكرولتر من محلول المناعة المحضر في الربع الأيمن أو الأيسر من تجويف البطن السفلي. لأداء تحدي سطح العين بعد التحصين ، ضع خمسة ميكرولتر من البومين البيضاوي أو البويضة أو المحلول الملحي لكل عين من الفأر المخدر ، وانتظر لمدة خمس دقائق حتى تمتص العين القطرة. بعد ذلك ، اجمع إفرازات العين عن طريق وضع 50 ميكرولتر من المحلول الملحي المعقم على العين مباشرة بعد التحدي.
لاستئصال أنسجة سطح العين ، ضع الماوس على سطح مستو وقم بتطهير المنطقة المدارية حول العين بمسحة الإيثانول بنسبة 70٪. لتشكيل شق حول العين ، قم بعمل شق بين الأذن والجيب خلف الحجاج وعلى طول السطح فوق العظم الحرشفية عموديا ، مع تمديد الشق أفقيا أسفل الجفن السفلي على طول عظم الفك العلوي وفوق الجفن العلوي على طول العظم الجبهي. أمسك الأنسجة المشرحة بعناية حول العين باستخدام ملقط منحني ، واسحب الأنسجة ومقلة العين للخارج.
ضع الأعضاء المستأصلة في PBS معقمة. ثم باستخدام مشرط تحت مجهر الاستريو ، قم بقص أنسجة عضلات الوجه الزائدة حول الجفون العلوية المستأصلة. لجمع الملتحمة ضع الجفن العلوي على طبق بتري جاف.
ثم باستخدام ملاقط دقيقة ومشرط قشر طبقة المخاط الأبيض بلطف من السطح الداخلي للجفن. بجانب تشريح القرنية ، ضع كرة العين على طبق بتري جاف جديد فوق الثلج الجاف. بعد ثلاث دقائق ، ضع الطبق على سطح المقعد في وضع ثابت.
استخدم مقصا دقيقا وحادا لعمل شق صغير على حدود القرنية بجوار الليمبوس. استمر في الشق بالمشرط حول كرة العين ، وفصل الصلبة عن القرنية. ثم قم بإزالة القزحية وبقايا العدسة من مؤخرة القرنية عن طريق التنظيف بسخاء بمحلول ملحي.
لتقييم غدة ميبوميان وفتحاتها ، ضع الجفون المستأصلة في وضع رأسي تحت مجهر ستيريو. ثم وفقا لوقت التعرض للكاميرا وإعدادات ISO ، التقط الصور تحت إضاءة الضوء الأبيض. لتقييم منطقة غدة ميبوميان ، ضع الجفون المستأصلة في وضع أفقي وقم بتشغيل الإضاءة الخلفية لمجهر ستيريو المجهز بكاميرا تعمل بالأشعة تحت الحمراء.
التقط الصور عن طريق ضبط وقت التعرض وفقا ل ISO للكاميرا. أظهرت الفئران التي تدار بالمحلول الملحي أسطح عين صحية بعيون مفتوحة على مصراعيها. وبالمقارنة ، يؤدي تطبيق البويضات إلى التهاب شديد في سطح العين ، والفتح الضيق للعينين ، وعلامات الإصابة الكيميائية.
أظهرت الجفون المستأصلة انسدادات كبيرة تسد فتحات غدة ميبوميان والوذمة ، على عكس الجفون السليمة التي تظهر سدادات صغيرة من الغدة المبطنة للجفن. يكشف الفحص الإضافي لإضاءة الغدة بالأشعة تحت الحمراء عن المظهر الراسيمي لأسيني غدة ميبوميان. أظهرت جفون الفئران المالحة التي تحدت الأسيني المستدير.
وبالمقارنة ، تسببت تطبيقات البويضات في تدمير وفقدان بعض الغدد مع مرض حساسية العين أو AED. أظهر التحليل النسيجي للجفون غدد ميبوميان المتوسعة مقارنة بالفئران التي تم إعطاؤها بمحلول ملحي فقط. احتضان مقلة العين على الثلج الجاف يسمح شق في القرنية بجانب الحافة وفصل القرنية عن الصلبة.
سهلت هذه الدراسة جمع القرنية. بالإضافة إلى ذلك ، تسببت إدارة البويضات في التهاب شديد في الملتحمة مع مظهر مفرط. تسهل المستويات المرتفعة من chemokine CXCL-1 تسرب العدلات ، والبلعمة ، وإزالة التحبب ، ولوحظ أن الإنترلوكين -6 يتوسط في استجابة المرحلة الحادة وتسلل العدلات في طاف الفئران AED.
من ناحية أخرى ، لم يظهر تركيز إنترلوكين -10 أي تغييرات كبيرة في كل من الفئران الساذجة و AED. يتيح هذا النموذج الجديد تطوير وتقييم فعالية الأدوية التي تستهدف مسارات المناعة الفطرية ، ويساعد بشكل كبير في استخراج البيانات بطريقة إعطاء العوامل المضادة للالتهابات. بعد الجمع المناسب للأعضاء ، تتوافق طرق تعدد الإرسال للغاية مثل تسلسل الخلية المفردة وقياس الكتلة الخلوية للتصوير مع هذا البروتوكول.
