هذه طريقة غير مكلفة تجمع بين مزايا تضخم الهواء وثبات التشوه الوعائي للحفاظ على الرئتين للتحليلات الهيكلية والوظيفية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي الحفاظ على كل من مورفولوجيا الخلية والموقع داخل المجال الجوي للرئة. وينبغي توخي الحذر أثناء وضع محول كعب إغراء في القصبة الهوائية وإبرة التغلغل في البطين الأيمن لضمان التضخم الكافي والتثبيت.
لإعداد جهاز تضخم الهواء، ضع حقنة لعمود الماء في حامل حلقة وقياس ارتفاع عمودي قدره 25 سنتيمترا من منصة الحيوان إلى 25 سنتيمترا على عمود الماء. نعلق على نهاية أنبوب عمود الماء إلى stopcock على غرفة الهواء وإرفاق أنبوب من إغراء الإناث من غرفة الهواء إلى stopcock على حاوية معالجة الحيوانات. تأكد من أن الغطاء إلى غرفة الهواء و stopcock على السطح الخارجي للحيوان تجهيز حاوية مغلقة، وأن stopcock على أنابيب المؤدية من عمود المياه إلى غرفة التضخم الهواء مفتوح.
ثم ملء المحقنة بالماء إلى علامة 25 سم. سوف تتدفق المياه من خلال الحقنة والأنابيب في غرفة الهواء. بمجرد أن يتم معادلة الضغط، سوف تتوقف المياه عن التدفق.
لإعداد الرئتين للتضخم جعل شق واحد الجانبية في جدار البطن تحت القفص الصدري للفأر القتل الرحيم، وشق جدار البطن الجانبي الثاني فوق الوركين. قطع على طول خط الوسط من الشق الداخلي نحو شق متفوقة، واستخدام مقص حادة لجعل بعناية شق في الجانب الجانبي من الحجاب الحاجز. يجب أن تنهار الرئتين بمجرد ثقب الحجاب الحاجز.
قطع عرضية على طول الحجاب الحاجز لفتح تجويف الصدر وقطع متفوقة على طول القص من عملية xiphoid إلى درجة المشعوذ، وجانبيا فوق القفص الصدري لفضح تماما القلب والرئتين. دبوس أسفل جانبي القفص الصدري وجعل شق خط الوسط في الرقبة، فوق القصبة الهوائية. إزالة الجلد والعضلات والغدة الدرقية والأنسجة الضامة المحيطة القصبة الهوائية واستخدام ملقط منحنية لشريحة قطعتين من خياطة تحت القصبة الهوائية الخلفية.
استخدام قطعة واحدة من خياطة لعقد التضخم إغراء كعب محول في مكان واستخدام مقياس 18 بواسطة إبرة بوصة واحدة لجعل ثقب صغير في القصبة الهوائية. إدراج محول كعب الروتين إغراء قياس 20 في الحفرة وربط خياطة حول القصبة الهوائية على الفور distal إلى حيث دخول المتبني كعب إغراء الحفرة. ثم نقل الحيوان إلى حاوية معالجة الحيوان وإرفاق محول كعب الروتين إغراء إلى إغراء الإناث في داخل حاوية معالجة الحيوانات.
لتضخيم الرئتين، ضع مقياس 25 بواسطة إبرة 5/8 بوصة متصلة بجهاز النفخ في البطين الأيمن للقلب وقطع الشريان الأورطي البطني للسماح للدم بالانزاف من القلب وتعزيز تدفق التشوه عبر الرئتين. فتح stopcock على السطح الخارجي للحيوان تجهيز حاوية وتضخيم الرئتين في 25 سنتيمترا من الماء لمدة خمس دقائق، مع الحرص على أن مستوى المياه في المحقنة لا ينخفض بسرعة كبيرة جدا. خلال اللحظة الأخيرة من تضخم الرئة، قم بتشغيل المضخة العجميلية إلى معدل تدفق يبلغ 10 ملليلترات في الدقيقة.
يجب أن يتدفق محلول الهيبارين من الزجاجة عبر الأنابيب إلى الحيوان. بعد تضخيم الرئتين لمدة خمس دقائق، إيقاف المضخة وتحويل perfusate من الهيبارين إلى مثبت. خفض حقنة عمود الماء إلى 20 سنتيمترا.
من الطبيعي أن تتحرك فقاعات الهواء داخل عمود الماء مع تغير الضغط. تحقق من مستوى المياه في الحقنة. يجب أن يكون عند علامة ال 25 سنتيمتر
ثم انتظر دقيقة واحدة للسماح للرئتين لتفريغ من 25 إلى 20 سنتيمترا من ضغط الماء قبل إعادة تشغيل المضخة بمعدل تدفق 6.5 ملليلتر في الدقيقة لمدة 10 إلى 15 دقيقة، وتشويش مثبت الأوعية الدموية. لاستخراج أنسجة الرئة المتضخمة والثابتة ، قم بربط القطعة الثانية من الخيط بإحكام حول القصبة الهوائية ، وابعد محول كعب الروتين إغراء ، وأزل محول كعب الإغراء من القصبة الهوائية. إزالة الإبرة من القلب واستخدام مقص حاد لقطع النسيج الضام، الخلفي إلى mediastinum، لتحرير الرئتين والقلب من تجويف الصدر مع الحرص على تجنب ثقب الرئتين.
إزالة القلب بعناية من الرئتين ووضع الرئتين في 20 إلى 25 ملليلتر من المثبتة في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. سحب خياطة عقد القصبة الهوائية من خلال فتح في أنبوب مخروطي وتأمين خياطة من خيوط الغطاء. ثم عكس الأنبوب لضمان أن الرئتين المزدهرة، والهواء المتضخم لا تزال مغمورة بالكامل في التثبيت ومعالجة الرئتين للدراسات النسيجية وفقا للبروتوكولات القياسية.
عندما يتم إدخال الحجاب الحاجز أثناء تشريح، سيتم إلغاء سلامة الفضاء الجنبي والرئتين يجب أن تنهار. عند تطبيق 25 سنتيمترا من ضغط الماء ، سيدخل الهواء إلى الرئتين عبر القصبة الهوائية ويجب ملاحظة التضخم بسهولة. بمجرد أن تتوسع الرئتين بشكل كامل ، يمكن تقليل ضغط التضخم إلى 20 سنتيمترا للحفاظ على تضخم الرئتين دون الإفراط في التمدد.
يجب أن تظل الرئتين متضخمتين بعد ربط القصبة الهوائية وإزالتها من الصدر. يمكن أن يحدث الانكماش إذا ثقبت الرئتين أثناء إعداد الحيوان أو استخراج الرئة. يكشف التحليل النسيجي لأقسام الرئة المتضخمة أن عددا قليلا جدا من الخلايا المناعية موجودة في تجويف مجرى الهواء للأنسجة الثابتة باستخدام التضخم التقليدي القائم على السائل.
في المقابل ، يتم الحفاظ على الخلايا الالتهابية داخل المجال الجوي للأنسجة الثابتة عن طريق التشوه الوعائي مع تضخم الهواء. بعد تضخم الهواء مع تثبيت وفرة، قد تكون جزءا لا يتجزأ من أنسجة الرئة في الفورمالين لقسم الأنسجة والتحليل اللاحق عن طريق تقنيات الأنسجة، بما في ذلك تلطيخ، الكيمياء المناعية، والتصوير المناعي.
