يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الآليات الخلوية التي تنطوي على التسبب في التهاب العنبية الخلفي البشري بوساطة المناعة. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو الدراسة الانتقالية لالتهاب القزحية البشري في مراقبة فعالية الأدوية الجديدة وتوفير نظرة ميكانيكية على تطور المرض الكيميائي. الميزة الرئيسية لاستخدام هذا النموذج هي موثوقية تحريض المرض واستخدام تقنيات التنظير الداخلي غير الغازية التي تسمح لنا بمراقبة تطور المرض.
هنا نصف كيفية تحفيز المرض وتقييم علم الأمراض باستخدام العديد من القراءات لإعداد IRBP 1-20 أكمل مساعد Freund أو CFA ، أعد تعليق كمية محسوبة من الببتيد في حجم لا يقل عن 100٪ DMSO. عندما يذوب المسحوق تماما ، أضف كميات صغيرة من PBS إلى الأنبوب حتى تصل إلى الحجم النهائي المحسوب من PBS وفقا لعدد الفئران المراد حقنها باستخدام التقليب اللطيف لخلط المحلول. بعد تحضير مساعد Freund الكامل ، قم بماصة المحلول برفق وبشكل متكرر لتشكيل مستحلب لزج وموزع بالتساوي مع إضافة محلول الببتيد DMSO PBS بالتنقيط بنسبة واحد إلى واحد إلى التعليق.
لتهوية المحاليل ، استخدم ماصة 1000 ميكرولتر مضبوطة على 700 ميكرولتر لماصة المحلول بشكل متكرر حتى يتم الحصول على مستحلب سميك كريمي. قبل حقن معلق الببتيد ، ضع كل فأر ليتم حقنه في قفص منفصل واستخدم حقنة ملليلتر واحد مجهزة بإبرة قياس 23 لتوصيل 1.5 ميكروغرام من توكسين بورديتيلا السعال الديكي في 100 ميكرولتر من وسط RPMI 1640 مكمل بمصل فأر 1٪ لكل. عندما يتم حقن محلول توكسين السعال الديكي ، يجب وضع الماوس في وضع يشبه القفا وقرص الجلد لتشكيل هيكل يشبه الخيمة على الجزء الخلفي من الرقبة.
قم بربط الإبرة بالفراغ بين الإصبع والإبهام ، وحقن 200 ميكرولتر من مستحلب IRBP على جلد الخيام ، مع الحفاظ على الضغط بعد الحقن وتدوير رأس الإبرة لإغلاق الجلد قبل التراجع. لتسجيل المرض السريري ، في اليوم 21 بعد الحقن ، تأكد من عدم الاستجابة لمنعكس البتلة في الفأر حقن الببتيد المخدر وكبح جماح الحيوان في. ضع موضعيا 1٪ تروبيكاميد و 2٪ فينيليفرين على قرنية كل عين مباشرة بعد الحقن.
عندما يتوسع التلاميذ بالكامل ، ضع الماوس على مرحلة مجهر مصممة لهذا الغرض. ضع المجهر للوصول الكامل إلى شبكية العين. اضبط قطعة العين طوال عملية التصوير حسب الضرورة لرؤية القرص البصري والشبكية والحصول على صور لمنطقة الشبكية بأكملها ، وضبط وتغطية جميع زوايا المحيط.
لقياس تسرب الأوعية الدموية ، قم بإدارة 100 ميكرولتر من 2٪ فلوريسئين تحت الجلد في الجزء الخلفي من الرقبة وأعد وضع الماوس بحيث تكون شبكية العين في منتصف الصورة الحية. اضبط منظار القاع على مرشح إثارة الضوء الأزرق عند 465 إلى 490 نانومتر قبل الحصول على صورة لكل منهما عند 1.5 وبعد سبع دقائق من حقن الفلورسنت. عندما يتم الحصول على جميع الصور ، قم بتوصيل حقن مضاد للتخدير داخل الصفاق للتعافي ووضع الفأر في قفص على حصيرة مسخنة مسبقا مع إمكانية الوصول إلى نظام غذائي مبلل مع مراقبة حتى يستعيد الفأر وعيه.
لتسجيل الأمراض السريرية للصور ، قم بتأسيس التقييم السريري على شدة التهاب القرص البصري ، وتكبيل الأوعية الدموية في شبكية العين ، وتسلل أنسجة الشبكية ، والأضرار الهيكلية. سجل كل من هذه المعلمات على مقياس من واحد إلى خمسة. يمثل المجموع الجماعي المرض السريري للعين بأكملها بحد أقصى 20 درجة يمكن الحصول عليها لكل عين.
بعد تصوير قاع العين لنقطة النهاية السريرية النهائية للدراسة ، القتل الرحيم للفأر. للتحليل النسيجي ، قم بفصل الجفون للوصول إلى العين بأكملها ، ثم ضع ملقط منحني خلف الكرة الأرضية للإمساك بالنسيج الضام المداري والعصب البصري واستئصال العين. ضع العين منزوعة النواة في واحد إلى خمسة ملليلتر من 4٪ جلوتارالدهيد لمدة لا تقل عن 15 دقيقة قبل نقل العضو إلى واحد إلى خمسة ملليلتر من 10٪ فورمالديهايد لمدة 24 ساعة على الأقل.
بعد تلطيخ الأنسجة النسيجية ، وفقا للبروتوكولات القياسية ، تم تعيين درجات على مقياس من صفر إلى ثلاثة بناء على مستوى تسلل الخلايا المناعية ودرجة تلف الشبكية. تصنف التغيرات القاعية أثناء تطور المرض على أنها تغيرات التهابية تشمل أنسجة الشبكية والتهاب الأوعية الدموية والقرص البصري والأضرار الهيكلية للشبكية بالإضافة إلى التغيرات النسيجية القائمة على تسلل الخلايا المناعية والإعاقات الهيكلية. يمكن تصنيف هذه التغيرات السريرية والنسيجية المرضية وتسجيلها لتقييم تطور المرض وتقييم فعالية التدخل العلاجي.
تسرب الأوعية الدموية هو أيضا سمة مرضية للنموذج والتهاب القزحية البشري. كما هو موضح في هذا التحليل ، يمكن استخدام الفلوريسئين لتصور تسرب الأوعية الدموية كقراءة أخرى لهذا النموذج. من الضروري للباحثين التأكد من تحضير المستحلب بشكل صحيح دون علامات الفصل بين المحاليل.
يجب خلطها جيدا ويجب أن يكون المنتج النهائي ناعم الملمس. يمكن دمج هذا الإجراء مع طرق أخرى لإدارة الدواء والقياس الخلوي للتنميط الظاهري الذي يتسلل إلى مجموعات الخلايا المناعية في شبكية العين.
