يوفر هذا البروتوكول فرصة لتنسيق الدراسات التي تستخدم نموذج إصابة إصابة السائل الجانبي للفئران من إصابة الدماغ الرضية بالاقتران مع تسجيل تخطيط الكهربى عبر القياس اللاسلكي. ويمكن أن تستخدم لدراسة العوامل التي تؤثر على تكوين الصرع بعد الصدمة واختبار الإمكانات العلاجية العصبية للتدخلات الدوائية، والتي قد تمنع تطور الصرع اللاحق للصدمة. يسمح هذا النهج بتسجيل فيديو tern الطويل للفئران تتحرك بحرية ويسمح بالتلاعب المعتدل للحيوانات دون انقطاع تسجيل تخطيط الانبعاثات.
إثبات الإجراء سيكون ماثيو ماجواير، طالب دكتوراه في الطب من مختبري. راجع المخطوطة المصاحبة لهذا البروتوكول للاطلاع على العمليات الجراحية التفصيلية. جعل 1 1/2 إلى 2 1/2 سنتيمتر شق خط الوسط من خلال الجلد والعضلات من فروة الرأس باستخدام شفرة مشرط رقم 10.
سحب الجلد والعضلات لفضح الجمجمة وتوفير حقل واضح الجراحية. الكهربائي مفيد لتحقيق الهفوة السريعة. بعد ذلك، يحلق أسفل الحافة الجانبيّة للعظم الجداريّ الأيسر باستخدام كُشّة جراحية لإنتاج سطح مُسطّسٍ على نحوٍ سلس بحيث يمكن لقاعدة محور قفل Luer الأنثوي أن تُركّز على الجمجمة.
ري سطح الجمجمة والأنسجة المحيطة بها مع 2.0 ملليغرام في محلول المليلتر جينتاميسين في المالحة العقيمة، ولطخة حل الزائدة مع مسحات معقمة. ثم، تطبيق 3٪ بيروكسيد الهيدروجين على الجمجمة لتجفيف العظام. عند هذه النقطة، إنشاء موقع استئصال القطر قطره خمسة ملليمترات من خلال العظام الجدارية الجدارية اليسرى.
ثم، إزالة رفرف العظام مع curette الجراحية والملبلات الأنسجة الملساء. بعد ذلك، باستخدام مجهر ستيريو، قم بإزالة الحافة الرقيقة من العظام المتبقية مع ملقط الأنسجة الملساء، مع الحرص على عدم تمزق الجافية. ثم، مسحة الجمجمة مع الإيثانول 70٪لإزالة أي غبار العظام وتجفيف الجمجمة.
تطبيق طبقة رقيقة من الغراء سيانوكريلات حول الحافة السفلية من محور قفل لور، وتأمينه على الجمجمة على استئصال الغشاء دون عرقلة فتح ودون السماح الغراء للاتصال dura. ثم، ختم قفل Luer في مكان مع طبقة رقيقة من الغراء حول القاعدة الخارجية من المحور. المقبل، وإعداد الطين من الاسمنت الأسنان، وتطبيق هذا على سطح الجمجمة حول وعلى قاعدة محور قفل لور لتأمين ذلك في مكان.
ثم املأ محور قفل Luer بمحلول خالي من المواد الحافظة المعقم يحتوي على أقطاب متعددة باستخدام حقنة وإبرة. وينبغي أن ينظر إلى bolus محدب من المالحة فوق الجزء العلوي من الحافة. مرة واحدة يتم الشفاء تماما الاسمنت الأسنان، ووقف التخدير الغاز وإزالة الفئران من الإطار stereotaxic.
ضع الجرذ على منصة بجوار جهاز إصابة قرع السوائل في إعادة شغل القص. ثم، تأمين طول 12 سنتيمترا من أنابيب الضغط إلى نهاية طرف الجهاز المنحني، مع نهاية المعاكس إنهاء في اثنين سنتيمتر، الذكور Luer قفل موصل تطور. تأمين الفئران إلى الجهاز عن طريق ربط نهاية الإناث من المحور على جمجمة الفئران إلى موصل الذكور.
مرارا وتكرارا التحقق من الحيوان للعودة منعكس الانسحاب. بمجرد أن يستعيد الجرذ منعكس الانسحاب ولكن لا يزال مخدرًا ، حرر البندول للجهاز ليسبب نبض ضغط واحد يبلغ 20 مللي ثانية ويتسبب في الإصابة. ثم، على الفور فصل الجرذ من جهاز FPI، وضعه في الركون القصي، وتوفير الأكسجين التكميلي عن طريق مخروط الأنف حتى يعود التنفس التلقائي.
لاحظ أن انقطاع النفس هو نتيجة متوقعة للإصابة. إذا لزم الأمر، وتوفير الأنفاس اليدوية الدورية عن طريق قناع صمام كيس حتى يبدأ الجرذ في التنفس تلقائيا من تلقاء نفسها. رصد مستمر، وتسجيل وقت العودة من رد فعل الحق.
بعد أربع ساعات من الإصابة، مرة أخرى تخدير الجرذ، ووضعها مرة أخرى في إطار stereotactic لإزالة محور قفل Luer وأسمنت الأسنان. تطبيق قطرة صغيرة من 0.5٪ bupivacaine هيدروكلوريد إلى الجمجمة في كل من المواقع التي يتم فيها حفر خمسة ثقوب التجريبية. ثم، حفر الثقوب التجريبية من خلال الجمجمة مع بت حفر 0.1 ملليمتر المحمولة.
بعد ذلك، تأمين مسامير القطب الفولاذ المقاوم للصدأ. أولاً، ضع برغي مرجعياً في اللامدا، فوق المخيخ. ثم، مكان تسجيل الأقطاب الكهربائية في المواقع الأربعة كما رأينا هنا.
تأكد من مسح الجمجمة مع 70٪ الإيثانول لإزالة أي غبار العظام. ثم، تغطية موقع استئصال الغشاء القراني مع طبقة رقيقة من شمع العظام المعقم لتغطية دورا المكشوفة. الآن، قم بتوصيل مجموعة القطب الكهربائي إلى أقطاب EEG الخمسة من خلال التفاف الطرف المكشوف من سلك قطب مرمز بالألوان بإحكام حول المسمار القطب المقاوم للصدأ المعين.
جمع أسلاك القطب في لفائف تحت اللب، وتأمين الأسلاك ولبنددال في مكان مع الاسمنت العظام. عقد العلّة في موضعه حتّى يشفى أسمنت العظام. وأخيراً، قم بتوصيل جهاز الإرسال اللاسلكي ببطاريات جديدة إلى البددال قبل إزالة الحيوان من الإطار المجسم.
بدءًا من يوم الإصابة، استخدم برنامج تجميع EEG الخاص بالشركة لصناعة EEG لتسجيل فيديو EEG باستمرار، وربط كل جهاز إرسال لاسلكي عبر تردد فريد بجهاز استقبال محدد. تسجيل الفيديو من كل الفئران مع الكاميرا الخاصة بها تكوين لتسجيل في 30 لقطة في الثانية الواحدة. افحص يدوياً من خلال تسجيلات EEG لتحديد أحداث الفهرس التي تحدد نشاط المضبوطات.
ويبين هذا الرقم تباطؤ دلتا متقطعة أحادية الجانب التي تم جمعها في يوم من TBI معتدلة. هنا، نرى أثر EEG 90 ثانية من فأر مراقبة صوري غير مصاب، مع تحليل FFT من 2، 048-millise2d مختارة EPOC. ثم، هنا نرى أثر EEG من مصاب بشكل معتدل، مما يدل على متقطعة، نمط تباطؤ دلتا من جانب واحد وتحليل FFT من 2، 048 مللي ثانية مختارة EPOC.
ويبين هذا الرقم تباطؤ دلتا الثنائي والمستمر التي تم جمعها في يوم TBI شديدة، وذلك باستخدام تقنيات التحليل نفسه. هنا، نرى أثر 90 ثانية EEG، الذي يدل على استمرار، نمط تباطؤ دلتا الثنائية من مصاب بجروح خطيرة. هنا، نرى نشاط المضبوطات الكهربائية غير التشنجية التي تم جمعها بعد ثلاثة أيام TBI الشديدة.
يتم عرض البيانات من الفئران التحكم بعد ثلاثة أيام من الجراحة، فضلا عن تتبع EEG 90 ثانية ثلاثة أيام بعد الإصابة الخطيرة، وتحليل FFT من 2، 048 مللي ثانية مختارة EPOC. وأخيرا، هذا الرقم يظهر نشاط الاستيلاء الكهربائي المتشنجة التي تم جمعها تسعة أيام بعد TBI، مع تحليل FFT من هذا الحيوان. هنا، نرى أيضا صور تمثيلية للتسرب إشارة متقطعة في بعض الأحيان وفقدان إشارة بسبب فشل البطارية.
من المهم التأكد من عدم تعطل الجافا ويبقى سليمًا بعد استئصال القرانية وأن محور قفل Luer مغلق بإحكام على الجمجمة. من المهم أيضا التأكد من أن أسلاك القطب جعل اتصال جيد مع مسامير التسجيل التي يتم وضعها في الجمجمة. وأخيراً، تأكد من أن الجمجمة خالية من الغبار وجافة لضمان أن أسمنت العظام يلتصق بالرأس على المدى الطويل.
