JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يسمح البروتوكول الحالي باستعادة الهياكل الشبيهة بالأنبوب التي تشكلت في مقايسة تكوين الأوعية الدموية الكلاسيكية في المختبر حيث تنظم الخلايا ، مثل خلايا الأرومة الغاذية ، في هياكل شبيهة بالشعرات الدموية فوق طبقة من مصفوفة الغشاء القاعدي خارج الخلية. تستخدم الهياكل المستردة لعزل الحمض النووي الريبي والبروتين لمختلف التحليلات الكيميائية الحيوية.

Abstract

أثناء تطور المشيمة ، تغزو خلايا الأرومة الغاذية خارج الزغابات (EVT) الأم لتشكيل الشرايين الحلزونية الرحمية من خلال عملية انتقال اللحمة المتوسطة إلى الشبيهة بالبطانة. تقليديا ، يتم تقييم هذه العملية عن طريق مقايسة تكوين الأنبوب في المختبر ، حيث تنظم الخلايا نفسها في هياكل تشبه الأنبوب عند زرعها فوق مستحضر غشاء القاعدي المبلمر. على الرغم من أنه يمكن قياس العديد من السمات الهيكلية في الصور المجهرية للهياكل ، لتقييم الالتزام الحقيقي ل EVT بالنمط الظاهري من النوع البطاني ، فإن التحليل الكيميائي الحيوي لمستخلصات الخلايا مطلوب. إن كشط الخلايا من طبق الثقافة للحصول على مستخلصات الحمض النووي الريبي و / أو البروتين ليس بديلا لأن الهياكل الشبيهة بالأنبوب ملوثة بشدة بالجزء الأكبر من البروتينات من الغشاء القاعدي المبلمر. وبالتالي ، هناك حاجة إلى استراتيجية لفصل الخلايا عن بروتينات الغشاء القاعدي قبل تحضير مستخلصات الخلايا. هنا ، يتم تقديم طريقة بسيطة وسريعة وفعالة من حيث التكلفة لاستعادة الهياكل الشبيهة بالأنبوب من مقايسة تكوين الأنبوب في المختبر والتحليل اللاحق بواسطة التقنيات الكيميائية الحيوية. تم تحرير الهياكل الشبيهة بالأنبوب التي تشكلت بواسطة خلايا HTR8 / SVneo ، وهي خط خلايا EVT ، من الغشاء القاعدي المبلمر عن طريق حضانة قصيرة مع PBS مكمل بحمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA). بعد الغسيل التسلسلي ، يمكن الحصول على حبيبات جاهزة للاستخدام من الهياكل الشبيهة بالأنبوب النقي. يمكن معالجة هذه الحبيبات لاحقا للحصول على مستخلصات الحمض النووي الريبي والبروتين. أظهر تحليل qPCR التعبير المستحث ل VE-cadherin و alpha v-integrin ، وهما علامتان للخلايا البطانية ، في هياكل تشبه الأنبوب المشتقة من EVT مقارنة بخلايا التحكم ، والتي كانت متسقة مع تحريض علامة الخلية البطانية ، CD31 ، التي تم تقييمها بواسطة التألق المناعي. كشف تحليل اللطخة الغربية لمستخلصات البروتين للهياكل الشبيهة بالأنبوب عن الإفراط في التعبير عن RECK في خلايا HTR8 / SVneo المنقولة. وبالتالي ، تسمح هذه الطريقة البسيطة بالحصول على مستخلصات الخلايا من مقايسة تكوين الأنبوب في المختبر للتحليل اللاحق للحمض النووي الريبي وتعبير البروتين.

Introduction

يعتمد نجاح الحمل على التطور السليم للمشيمة وإنشاء الدورة الدموية للمشيمة. أحد الأحداث الرئيسية المرتبطة بهذه العملية هو إعادة تشكيل الشرايين الحلزونية الرحمية (uSA) 1 ، من وعاء دموي عالي المقاومة ومنخفض التدفق إلى وعاء دموي منخفض المقاومة وعالي التدفق ، مما يزيد من نضح دم الأم في المشيمة2.

يتم تحقيق إعادة تشكيل uSA بواسطة خلايا الأرومة الغاذية المتخصصة المشتقة من الكيسة الأريمية. بعد زرع الجنين ، يهاجر الأرومة الغاذية خارج الزغابات الجنينية (EVTs) من موقع الزرع عبر الأم والرحم باتجاه uSA3. بمجرد الوصول إلى هناك ، تحفز EVTs هجرة وموت الخلايا المبرمج لخلايا العضلات الملساء المرتبطة بالأوعية الدموية الأمومية (VSMC) والخلايا البطانية (EC) 4. بعد ذلك ، تكتسب EVTs نمطا ظاهريا شبيها بالبطانة من خلال انتقال وسيط إلى بطانة (MELT) 5،6 ، لتحل محل VSMC و EC للوعاء7.

تسمم الحمل (PE) هو متلازمة خاصة بالحمل تتميز بظهور فرط ضغط الدم لدى الأم ، مصحوبة ببيلة بروتينية و / أو أعراض أخرى لخلل في الجهاز النهائي للأم ، يتم تحديدهامنذ الأسبوع العشرين من الحمل8. على الرغم من أن المسببات الدقيقة ل PE غير مفهومة تماما ، إلا أن الفرضية الأكثر قبولا تتعلق بإعادة تشكيل uSA المعيبة9 ، مما يولد حالة دائمة من عدم كفاية تدفق الدم إلى المشيمة ، مصحوبا بتلف المشيمة بسبب نقص التروية وإعادة التروية ، ونقص الأكسجة ، والإجهاد التأكسدي ، مما يؤدي إلى إطلاق عوامل المشيمة في الدورة الدموية للأم ، مما يؤدي إلى ظهور أعراض الأم المميزة ل PE9. وبالتالي ، من الأهمية بمكان تحديد الآليات الخلوية والجزيئية الرئيسية المشاركة في إعادة تشكيل uSA بواسطة خلايا الأرومة الغاذية.

يتم تحقيق تقييم MELT of EVTs بشكل كلاسيكي من خلال اختبار تكوين أنبوب مصفوفة الغشاء القاعدي في المختبر 10 ، والذي من خلاله تهاجر الخلايا الفردية وتنظم نفسها في هياكل ثنائية الأبعاد تشبه الأوعية الدموية. يتطلب هذا البروتوكول بذر خطوط خلايا EVTs على طبقة رقيقة من المصفوفة خارج الخلية المبلمرة ، والتي يشار إليها عادة باسم مصفوفة الغشاء القاعدي ، وهي مصفوفة خارج الخلية متاحة تجاريا تتكون من غشاء أساسي قابل للذوبان مستخرج من ساركوما الفأر Engelbreth-Holm-Swarm ، المخصب ب Laminin ، بالإضافة إلى الكولاجين IV ، وكبريتات الهيباران البروتيوغليكان و entactin / nidogen10. عادة ما يتم تحقيق تحليل الهياكل الشبيهة بالأنبوب المشكلة من خلال تحديد الخصائص الراسخة في الصور المجهرية (على سبيل المثال ، عدد الفروع أو مؤشر الشبكة) وتقديرها بواسطة برنامج ImageJ (البرنامج المساعد لمحلل تكوين الأوعية)11. على الرغم من أن هذه الطريقة تستخدم على نطاق واسع لوصف تكوين الهياكل الشبيهة بالأنبوب12،13،14 ، إلا أنها تقتصر على توصيف تنظيم الخلايا ، حيث لا يمكن جمع هذه الهياكل للتحليل الكيميائي الحيوي12،13،14، ويرجع ذلك إلى حد كبير إلى استحالة فصل الخلايا / الأنابيب عن مصفوفة الغشاء القاعدي ، والتي تحتوي على كمية عالية من البروتينات المختلفة. وبالتالي ، لا يمكن تحديد المساهمة الحقيقية للبروتينات المشتقة من الخلايا ، وهو أمر ضروري لفهم التعبير عن البروتينات الخلوية بشكل صحيح. نظرا لأن معظم البروتينات في هذه المستخلصات ستأتي من مصفوفة الغشاء القاعدي ، فقد تبين أن تمثيل البروتينات الخلوية منخفض جدا ، لذلك يجب تحميل كمية كبيرة من البروتينات في هلام صفحة SDS لتحليلها بواسطة اللطخة الغربية ، مما يؤثر على دقة البروتينات ونقلها. جعل التحليل السليم شبه مستحيل. يؤثر هذا الفائض من البروتينات المشتقة من مصفوفة الغشاء القاعدي أيضا بشكل عميق على استخراج الحمض النووي الريبي بالنقاء المطلوب لمزيد من التحليل.

في هذا التقرير ، نصف طريقة بسيطة وسريعة وفعالة من حيث التكلفة ، بناء على معالجة PBS-EDTA ، والتي تسمح بإطلاق هياكل تشبه الأنبوب من مصفوفة الغشاء القاعدي والتي يمكن معالجتها للتحليل الكيميائي الحيوي لمستخلصات الخلايا. تنتج هذه الطريقة كميات كبيرة من الجزيئات الحيوية والحمض النووي الريبي والبروتينات ، وهي متوافقة مع التحليل الكيميائي الحيوي الكلاسيكي ، و qPCR ، واللطخة الغربية. نقترح أن هذه الاستراتيجية يمكن أن تكون قابلة للتطبيق على فحوصات أخرى ، مثل التجزئة الخلوية الفرعية ، وتحديد العلامات اللاجينية عن طريق التروسات البيروسية أو فحوصات الترسيب المناعي للكروماتين. باختصار ، يتكون البروتوكول من حضانة الهياكل الشبيهة بالأنبوب في طبق الاستزراع مع PBS مكمل ب 50 ملي مولار من EDTA عند 4 درجات مئوية لإذابة مصفوفة الغشاء القاعدي. من خلال هذه الحضانة البسيطة ، تظل الهياكل الأنبوبية معلقة ، والتي بعد سلسلة من الغسالات باستخدام PBS للتخلص من EDTA وفائض مصفوفة الغشاء القاعدي المخففة ، يمكن الحصول عليها كحبيبات جاهزة للاستخدام من الهياكل الأنبوبية و / أو الخلايا الفردية. تصف الأقسام اللاحقة بروتوكولات اختبار MELT واستعادة الهياكل الشبيهة بالأنبوب.

Protocol

1. التحضير للفحص

ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الخطوات في ظل ظروف معقمة. يجب أن تكون جميع المواد البلاستيكية معقمة وجديدة تماما. يجب تعقيم الزجاجات عن طريق التعقيم. يجب تعقيم جميع المواد بمحلول إيثانول بنسبة 70٪ قبل استخدامها في خزانة التدفق الصفيحي. يجب تعقيم الحد الأدنى لوسط زراعة الخلايا (RPMI) عن طريق الترشيح بفلتر 0.22 ميكرومتر قبل التكملة بمصل الأبقار الجنينية (FBS). ارتد دائما معدات الحماية الشخصية عند العمل مع النفايات الخطرة بيولوجيا (معطف المختبر ، والقفازات ، والشعر الطويل المربوط للخلف ، وما إلى ذلك).

  1. قم بإعداد وسائط RPMI-1640 (5٪ FBS كامل النمو) عن طريق إضافة RPMI 1640 و FBS المعقمة في زجاجة زجاجية معقمة في خزانة التدفق الرقائقي. للحصول على محلول FBS بنسبة 5٪، أضف 190 مل من RPMI-1640 و10 مل من FBS. قم بتسخين RPMI-1640 Media-5٪ FBS في حمام مائي يتم التحكم في درجة حرارته عند 37 درجة مئوية.
  2. قم بإعداد مصفوفة الغشاء القاعدي على النحو التالي. قم بإذابة مصفوفة الغشاء القاعدي ببطء عن طريق وضع الزجاجة عند 4 درجات مئوية لمدة 3 إلى 4 ساعات وتبريد طبق MW-6 عند -20 درجة مئوية ، لمدة ساعة واحدة قبل الاستخدام. بمجرد الذوبان ، حافظ على مصفوفة الغشاء القاعدي على الجليد. في خزانة التدفق الصفحي ، قم بتخفيف مصفوفة الغشاء القاعدي إلى 70٪ مع RPMI1640 البارد المثلج بدون FBS.
    ملاحظة: يجب تخزين مصفوفة الغشاء القاعدي عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. بعد الذوبان ، يجب أن يعمل كل شيء عند 4 درجات مئوية لتجنب البلمرة المبكرة للمصفوفة.
  3. إعداد PBS-EDTA عن طريق إذابة الكمية المناسبة من EDTA في PBS للوصول إلى تركيز نهائي يبلغ 50 ملي مولار من EDTA. حافظ على PBS-EDTA عند 4 درجات مئوية.

2. فحص تشكيل الأنبوب

  1. أضف 60 ميكرولتر / سم2 من مصفوفة الغشاء القاعدي المخفف كما هو موضح في الخطوة 1.2. إلى الأطباق. تجنب الفقاعات التي تتداخل مع الصورة المجهرية اللازمة لقياس الهياكل الأنبوبية.
    ملاحظة: في حالة الآبار المتعددة -6 (MW6 ، بمساحة 9.6 سم2) ، يكون الحجم 580 ميكرولتر من مصفوفة الغشاء القاعدي -70٪.
  2. انقل الأطباق ذات مصفوفة الغشاء القاعدي إلى حاضنة خلية (5٪ CO2 و 37 °C) لمدة ساعتين لتعزيز بلمرة مصفوفة الغشاء القاعدي.
    ملاحظة: خلال آخر ساعة واحدة من البلمرة ، قم بإعداد تعليق الخلية للخلايا التي سيتم استخدامها في الفحص ، بهدف إكمال ساعتين من البلمرة عندما تكون الخلايا جاهزة للبذر.
  3. بذرة 80,000 خلية / سم2 من HTR8 / SVneo (خط خلايا EVTs) مخففة في 2 مل من RPMI-1640- 5٪ FBS فوق مصفوفة الغشاء القاعدي المبلمر وأيضا فوق الأطباق غير المطلية كمراقبة. قم بزرع الخلايا بعناية على طول جدار البئر لتجنب تدمير مصفوفة الغشاء القاعدي.
    ملاحظة: قم بشراء توزيع خلوي متجانس على Matrigel ، وإلا فلن تتشكل الأنابيب في المناطق التي يوجد بها عدد أقل من الخلايا أو حيث تكون الخلايا مكتظة.
  4. انقل الخلايا المصنفة إلى حاضنة الخلية وزراعتها لمدة 12 ساعة و 24 ساعة و 48 ساعة عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 و 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: عادة ما تكون 24 ساعة كافية لتحليل التركيب الأنبوبي ، ولكن إذا كانت هناك حاجة إلى تعبير البروتين الحركي أو الحمض النووي الريبي أثناء هذه العملية ، فقم باحتضان الخلايا من أجل: 3 ساعات و 6 ساعات و 12 ساعة و 24 ساعة و 48 ساعة.

3. استعادة الخلية من مصفوفة الغشاء القاعدي

  1. بمجرد وصول وقت الحضانة المحدد (على سبيل المثال ، 12 ساعة ، 24 ساعة ، 48 ساعة) ، استرجع الوسط المكيف لإجراء القياس المفضل عليه.
  2. اغسل الخلايا برفق باستخدام 1x PBS المثلج ، 3x على الأقل للتخلص من بقايا الخلايا. إذا كانت هناك حاجة إلى صور مصغرة ، اسكب 1 مل من PBS البارد في كل بئر والتقط الصور في غضون 10 دقائق.
  3. قم بإزالة PBS وأضف 700 ميكرولتر من PBS-EDTA إلى كل بئر واحتضن الطبق على الجليد لمدة 3-5 دقائق.
    ملاحظة: سيقوم PBS-EDTA بإذابة مصفوفة الغشاء القاعدي ، لذلك ستظل شبكة الخلايا بأكملها معلقة.
  4. استرجع تعليق الشبكة الأنبوبية برفق باستخدام ماصة دقيقة (p1.000) في أنبوب سعة 1.5 مل.
  5. جهاز الطرد المركزي التعليق عند 1,000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. في النهاية ، يجب أن تكون حبيبات بيضاء من الخلايا مرئية.
  6. تخلص من المادة الطافية عن طريق انعكاس الأنبوب ، في محاولة لتركه جافا قدر الإمكان.
  7. أضف 1 مل من PBS عند 4 درجات مئوية وأعد تعليق حبيبات الخلية برفق باستخدام ماصة دقيقة p.1000 لغسل الخلايا وإزالة مصفوفة الغشاء القاعدي الذائبة و EDTA. كرر 2x على الأقل.
    ملاحظة: خطوات الغسيل هذه بالغة الأهمية. يمكن ملاحظة مصفوفة الغشاء القاعدي المتبقية كطبقة لزجة فوق حبيبات الخلية. كرر عمليات الغسيل حتى يتم التخلص من معظم طبقة مصفوفة الغشاء القاعدي.
  8. بعد الغسيل النهائي ، استخدم حبيبات الخلية مباشرة لاستخراج البروتين أو الحمض النووي الريبي. بدلا من ذلك ، قم بإعادة تعليق الحبيبات في 1 مل من PBS وتوزيعها على أنابيب مختلفة ، اعتمادا على المتطلبات: على سبيل المثال ، 300 ميكرولتر لاستخراج الحمض النووي الريبي و 700 ميكرولتر المتبقية لاستخراج البروتين ، إلخ.
  9. الطرد المركزي الأنابيب عند 1,000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية للحصول على حبيبات الخلية.
    ملاحظة: يمكن أن يكون تقسيم تعليق الخلية في PBS بالنسبة المطلوبة ، على سبيل المثال ، 1: 1 أو 1: 2 أو 1: 3 إلى RNA: البروتين. هنا يتم استخدام نسبة 1: 2 RNA: البروتينات. في هذه المرحلة ، قم بتخزين كريات الخلية إذا لم تكن هناك حاجة إليها على الفور ، جافة قدر الإمكان ، عند -80 درجة مئوية لمدة تصل إلى شهر.

النتائج

لتقييم البروتوكول الموصوف في هذا التقرير ، قمنا أولا بإنشاء الهياكل الشبيهة بالأنبوب. كما هو موضح في الشكل 1 أ ، أنتجت خلايا HTR8 / SVneo (EVT) هياكل تشبه الأنبوب في 12 ساعة و 24 ساعة و 48 ساعة من الحضانة فوق مصفوفة الغشاء القاعدي. لم يلاحظ أي هياكل تشبه الأنبوب في أطب...

Discussion

مقايسة التكوين الشبيهة بالأنبوب هي أداة مستخدمة على نطاق واسع لتقييم التفاعل بين الخلايا في عمليات تولد الأوعيةالدموية 19. نصور هنا الخصائص الوعائية للخلايا غير البطانية ، مثل EVTs ، في إعادة تشكيل أوعية الرحم الوعائية ، وهو حدث حرج أثناء المشيمة6

Disclosures

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.

Acknowledgements

مصدر التمويل FONDECYT 1221362 ، ANID ، ل JG. Convocatoria Nacional Subvención a la Instalación en la Academia, ANID, No. SA77210087 ل ICW.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Cell Culture Dishes laboratory (100mm)Nest704201
Cell Culure 6-PlateNest0917A
Cell Culure MicroscopeOlympusCKX53SF
CentrifugeThermo ScientificMega Fuge 8R
Circular Analog Magnetic Hotplate StirrerSCI LogexMS-H-S
CO2 IncubatorThermo ScientificHERA cell Vios 160i
Cultrex PathClear Basement Membrane Extract (2 x 5 mL) R&D SYSTEMSRD.3432-010-01
Dry Heat IncubatorsHESMK 200-1
Ethylenediaminetetraacetic Acid (EDTA)WinklerBM-0680
Fetal Bovine Serum Heat InactivatedCapricorn ScientificFBS-HI-12A
Freezer VerticalDEAWOOFF-211VSM
HTR8/SVneoATCCCRL-3271
Laboratory bench rockerTCLS2025
Laminar flow cabinetBIOBASEBSC-1300
Luminescent Image AnalyzerHealth CareImage Quant LAS 500
Matrigel Matrix Growth Factor Reduced, Phenol Red-Free 10 ml R&D SYSTEMS356231
Micro CentrifugeSCI LogexD1008
Micropipete Lambda Plus, P10Corning4071
Micropipete Lambda Plus, P1000Corning4075
Micropipete Lambda Plus, P2Corning4070
Micropipete Lambda Plus, P20Corning4072
Micropipete Lambda Plus, P200Corning4074
Microscope Camera-SetMOTICMoticam 2300
Pen-strep-amphot b/AntimBiological Industries03-029-1B
pHmeterHANNAHI2221
Phophate Buffer Saline 10X (PBS10X)Corning46-013-CM
Pippete micro tip with filter, sterile, P10JetbiofilPMT231010
Pippete micro tip with filter, sterile, P1000JetbiofilPMT252000
Pippete micro tip with filter, sterile, P200JetbiofilPMT231200
PowerPacBIO-RADE0203
RadwagTCLWTB 200
Remote water Purification SystemMilliporeDirect-Q 5 UV
RPMI 1640 Medium, powderGibco31800-022
Thermal CyclerBioer TechnologyTC-96/G/H(b)C
Thermoregulated bathThermo ScientificTSGP10
Trypsin EDTA 10XCapricorn ScientificTRY-1B10
Ultrasonic ProcessorsSONICSVCX130PB
Vacuum PumpHESROCKER 300
Vortex MixerThermo ScientificLP Vortex Mixer

References

  1. Cartwright, J. E., Fraser, R., Leslie, K., Wallace, A. E., James, J. L. Remodelling at the maternal-fetal interface: relevance to human pregnancy disorders. Reproduction. 140 (6), 803-813 (2010).
  2. Burton, G. J., Woods, A. W., Jauniaux, E., Kingdom, J. C. P. Rheological and Physiological Consequences of Conversion of the Maternal Spiral Arteries for Uteroplacental Blood Flow during Human Pregnancy. Placenta. 30 (6), 473-482 (2009).
  3. Huppertz, B. The anatomy of the normal placenta. J Clin Pathol. 61 (12), 1296-1302 (2008).
  4. Bulmer, J. N., Innes, B. A., Levey, J., Robson, S. C., Lash, G. E. The role of vascular smooth muscle cell apoptosis and migration during uterine spiral artery remodeling in normal human pregnancy. FASEB J. 26 (7), 2975-2985 (2012).
  5. Paul, M., Chakraborty, S., Islam, S., Ain, R. Trans-differentiation of trophoblast stem cells: implications in placental biology. Life Sci Alliance. 6 (3), 202201583 (2023).
  6. Pollheimer, J., Vondra, S., Baltayeva, J., Beristain, A. G., Knöfler, M. Regulation of placental extravillous trophoblasts by the maternal uterine environment. Front Immunol. 9, 1-18 (2018).
  7. Sato, Y. Endovascular trophoblast and spiral artery remodeling. Mol Cell Endocrinol. 503, 110699 (2020).
  8. Huppertz, B. The critical role of abnormal trophoblast development in the etiology of preeclampsia. Curr Pharm Biotechnol. 19 (10), 771-780 (2018).
  9. Khong, T. Y., et al. Sampling and definitions of placental lesions Amsterdam placental workshop group consensus statement. Arch Pathol Lab Med. 140 (7), 698-713 (2016).
  10. Kleinman, H. K., Martin, G. R. Matrigel: Basement membrane matrix with biological activity. Semin Can Biol. 15, 378-386 (2005).
  11. Carpentier, G., et al. Angiogenesis analyzer for ImageJ - A comparative morphometric analysis of "Endothelial Tube Formation Assay" and "Fibrin Bead Assay.". Sci Rep. 10 (1), 1-13 (2020).
  12. Arderiu, G., Peña, E., Aledo, R., Badimon, L. Tissue factor-Akt signaling triggers microvessel formation. J Thrombosis Haemostasis. 10 (9), 1895-1905 (2012).
  13. Leung, K. W., et al. Ginsenoside Rb1 inhibits tube-like structure formation of endothelial cells by regulating pigment epithelium-derived factor through the oestrogen β receptor. British J Pharmacol. 152 (2), 207-215 (2007).
  14. Xue, L., Greisler, H. P. Angiogenic effect of fibroblast growth factor-1 and vascular endothelial growth factor and their synergism in a novel in vitro quantitative fibrin-based 3-dimensional angiogenesis system. Surgery. 132 (2), 259-267 (2002).
  15. Ji, L., et al. Placental trophoblast cell differentiation: Physiological regulation and pathological relevance to preeclampsia. Mol Asp Med. 34 (5), 981-1023 (2013).
  16. Liu, C. Y., Lin, H. H., Tang, M. J., Wang, Y. K. Vimentin contributes to epithelial-mesenchymal transition ancer cell mechanics by mediating cytoskeletal organization and focal adhesion maturation. Oncotarget. 6 (18), 15966-15983 (2015).
  17. Kolesnichenko, O. A., et al. Endothelial progenitor cells derived from embryonic stem cells prevent alveolar simplification in a murine model of bronchopulmonary dysplasia. Front Cell Dev Biol. 11, 1209518 (2023).
  18. Gutiérrez, J., et al. Preeclampsia associates with RECK-dependent decrease in human trophoblasts migration and invasion. Placenta. 59, 19-29 (2017).
  19. Ucuzian, A. A., Greisler, H. P. In vitro models of angiogenesis. World J Surg. 31 (4), 654-663 (2007).
  20. Rand, M. D., et al. Calcium depletion dissociates and activates heterodimeric Notch receptors. Mol Cell Biol. 20 (5), 1825-1835 (2000).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

VE cadherin Alphav integrin CD31 HTR8 SVneo RECK

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved