Name: vascular reconstruction with the cuff technique in mouse orthotopic liver transplantation
Uploaded: 2023-12-01T13:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Exploring Cold Ischemia and Warm Reperfusion Injury in Fatty Liver Transplantation at JoVE.com

Bu çalışma, 2022 JST temel araştırması (Japon Organ Nakli Derneği) tarafından desteklenmiştir.

Deney protokolü, Kyoto Üniversitesi Hayvan Deneyleri Komitesi tarafından onaylandı. Çalışmada, ticari bir kaynaktan elde edilen, 10 haftadan büyük ve 25 g ile 30 g arasında ağırlığa sahip C57BL / 6 fareleri kullanıldı (bkz. Tüm hayvanlar% 2.5 izofluran ile uyuşturuldu (kurumsal olarak onaylanmış protokoller izlenerek), belirli patojen içermeyen koşullar altında tutuldu ve tüm deneysel prosedürler Kyoto Üniversitesi'nin Hayvan Deneyleri Yönetmeliğine uygun olarak yürütüldü. Çalışma için kullanılan uygun araçlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir ve Şekil 1 ve Şekil 2'de gösterilmiştir.
1. Hayvan seçimi
<ol><li>Vücut ağırlığı 25-30 g olan fareler kullanın. NOT: Fare karaciğer allogreftleri2 genellikle majör histouyumluluk kompleksi bariyeri boyunca kabul edilirken, bu çalışmada soğuk iskemi reperfüzyon hasarının ayrıntılı mekanizmasına odaklanmak için sinjeneik MOLT modelini seçtik10. 25 g'dan daha hafif fareler önerilmez, çünkü ince bir safra kanalına iç stent yerleştirmek imkansızdır. Benzer şekilde, damarların etrafında çok miktarda karın içi yağ bulunması nedeniyle 30 g'dan daha ağır fareler önerilmez.</li>
</ol>2. Manşet yapımı
<ol><li>PV ve IHIVC için sırasıyla 20 G ve 16 G intravenöz kateterler hazırlayın.</li>
	<li>Bir neşter kullanarak, manşeti oluşturmak için kateteri kesin. Manşetin ana gövdesi 2 mm uzunluğunda ve 1 mm'lik bir uzatma kolu ile ölçülmelidir (Şekil 3A). NOT: Sap çok büyükse, manşeti takmak zor olabilir.</li>
	<li>Manşetin yüzeyinde, neşter bıçağının arkasını kullanarak iplik sabitlemesi için sığ bir oluk oluşturun. NOT: Neşter bıçağının arkasını manşete uygularken, bıçağın ucunun yaklaşık 60 derecelik bir açıda olduğundan emin olun ( Şekil 3B'de gösterildiği gibi). İlk oluğu yaptıktan sonra neşter bıçağını sabitleyin ve manşeti döndürün. İdeal olarak, iki oluk önerilir, ancak tek bir oluk sorunsuz bir şekilde yeterli olabilir.</li>
</ol>3. Manşet eki
<ol><li>Dikdörtgen şekilli plastik bir kaba küçük buz küpleri koyun ve üstüne küçük bir metal kap (6 cm çapında) yerleştirin. Kabı organ koruma sıvısı ile doldurun ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve sinjeneik grefti içine yerleştirin.</li>
	<li>Sinjeneik karaciğer greftini (başka bir donör fareden ekstrakte edilen) bir pamuklu çubuk kullanarak nazikçe yuvarlayın ve porta hepatisin yukarı baktığından emin olun. IVC'nin lümeninde depolanan kanı organ koruma sıvısı ile iyice çıkarın.</li>
	<li>PV'yi, örneğin splenik damara bağlı bir iplik kullanarak manşetten geçirin (bkz. Şekil 4A).</li>
	<li>Manşet sapı saat 12 konumundayken, hem tutamağı hem de manşeti bir bulldog kelepçesi ile sabitleyin ( Malzeme Tablosuna bakın) ve PV kenarından 2 ila 3 mm uzağa yerleştirin.</li>
	<li>Ameliyat alanını oluşturmak için büyük vasküler forseps ve bir sabitleme kalıbı kullanarak bulldog kelepçesini daha da sabitleyin (bkz. Şekil 4B).</li>
	<li>PV lümenini yaklaşık 15 ila 20x büyütmede dikkatlice inceleyin. Gerekirse, damlayan su lümenin görünürlüğünü artırabilir.</li>
	<li>PV lümenini nazikçe kavrayın ve manşetten dışsallaştırın.</li>
	<li>Tamamen dışsallaştırıldıktan sonra, 8-0 kullanarak çift ligasyon ile sabitleyin manşetin oluğu boyunca ipek iplik (Şekil 4C,D). NOT: Bağın gevşek olmadığından emin olun. Ayrıca, manşetin takılmasını engelleyebileceğinden, bağ noktasının çok büyük olmamasına dikkat edin. Ligatür noktası herhangi bir yönde konumlandırılabilir.</li>
	<li>PV için kullanılana benzer bir prosedür kullanarak manşeti IHIVC'ye takın (Şekil 4E). NOT: IHIVC'yi manşetle sıkıştırırken, karaciğer parankimini ısırmaktan kaçının. Boyun PV'den daha kısa olduğundan, sıkıştırma konumunu dikkatlice belirleyin.</li>
	<li>IHIVC'yi geçici olarak bağlamak için ipliği IHIVC'nin tabanının etrafından geçirerek bir kayma düğümü oluşturun (Şekil 5). Bu iplik reperfüzyondan sonra çıkarılacaktır.</li>
</ol>4. Portal ven rekonstrüksiyonu
<ol><li>% 2.5 oranında izofluran ile anestezi indükleyerek alıcı fareyi uyuşturun ve yayınlanmış literatürde açıklandığı gibi doğal karaciğeri çıkarmadan önce% 0.6'ya düşürün2. Laparotomiden önce cerrahi alanı alternatif iyonofor ve% 70 etanol turları ile en az üç kez enfekte edin.</li>
	<li>Hepatik lobun düzgün bir şekilde yerleştirildiğinden ve manşetli PV'nin bükülme ve burulma içermediğinden emin olun.</li>
	<li>Pean forseps kullanarak alıcının PV kenarını nazikçe kavrayın ve bir mengene ile sabitleyin. NOT: Bu yazıda mengene, Pean forsepslerini masaya sabitlemek için kullanılan mekanik bir aparatı ifade eder. Mengene hakkında daha fazla bilgi için Malzeme Tablosu'na bakın.</li>
	<li>Alıcının PV'sine vasküler bir kelepçe uygulayın ve 8-0'ı geçin etrafına ipek iplik.</li>
	<li>PV kenarından yaklaşık 0,5 mm uzakta 1/4 çevresel bölüm oluşturun (Şekil 6A). Özel bir alet (ucu kesilmiş ve L şeklinde bükülmüş 27 G'lik bir iğne) kullanarak tuzlu su solüsyonunu lümenden geçirirken deliği genişletin.</li>
	<li>Manşet kolunu kavramak için düz forseps kullanın ve lümene yerleştirin.</li>
	<li>Tamamen takıldıktan sonra, manşeti 8-0 ipek iplik. Fiksasyon için tek bir ligasyon yeterlidir.</li>
	<li>Vasküler kelepçeyi çıkarın ve karaciğeri yeniden perfüze edin.</li>
	<li>Bezelye forsepslerini dikkatlice serbest bırakın ve portal ven rekonstrüksiyonunu tamamlayın. Tüm PV rekonstrüksiyon süreci yaklaşık 5 dakika sürmelidir.</li>
</ol>5. İnfrahepatik inferior vena kava rekonstrüksiyonu
<ol><li>Karaciğer lobunu uygun şekilde konumlandırın ve alıcı IHIVC dorsaline bağlı Pean forsepslerini greftin sağ alt lobuna hareket ettirin ve bir mengene ile sabitleyin.</li>
	<li>Bir pamuklu çubukla hafifçe ovalayarak alıcının IVIHC'si çevresinde kalan karaciğer dokusunu ortadan kaldırın.</li>
	<li>8-0'ı geç alıcının IVIHC'sinin etrafına ipek iplik.</li>
	<li>Alıcının IVIHC kenarından yaklaşık 0,5 mm'de 1/4 çevresel bölüm oluşturun (Şekil 6B).</li>
	<li>Lümene normal salin solüsyonu verdikten sonra, manşeti lümene yerleştirin. NOT: Kısa boyun nedeniyle, manşet genellikle PV'dekinden daha sığ bir şekilde yerleştirilir.</li>
	<li>Manşeti dikkatlice 8-0 ile sabitleyin ipek iplik ve ardından vasküler kelepçeyi ve Pean forsepslerini çıkarın.</li>
</ol>6. Ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Ameliyat sonrası iyileşmeyi kolaylaştırmak için bir ısıtma yastığı ve ısıtma lambası kullanın.</li>
	<li>Kan basıncını, kalp atış hızını, solunum hızını, vücut ısısını ve ayrıca yiyecek ve su tüketimini sürekli olarak izleyin.</li>
	<li>Ameliyat sonrası ağrıyı hafifletmek için deri altı carprofen enjeksiyonu (her 6 saatte bir veya ihtiyaç duyulana kadar 5 mg / kg) uygulayın. Yerel kurumsal yönergeleri izleyin. NOT: Farelerin durumu kötüleşirse, deney derhal durdurulacak ve farelere karbondioksit solunarak ötenazi uygulanacaktır.</li>
	<li>Doku örneğini toplamak için fareleri yeniden uyuşturun ve IACUC onaylı bir yöntemle ötenazi yapın.</li>
</ol>

Fare Karaciğer Transplantasyonunda Etkili Vasküler Anastomoz Stratejileri

<ol>
	<li>Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+the+mouse.">Orthotopic liver transplantation in the mouse.</a> Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).</li><li>Yokota, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+mouse+liver+transplantation+to+study+liver+biology+and+allograft+tolerance.">Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance.</a> Nat Protoc. 11 (7), 1163-1174 (2016).</li><li>Shen, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+responses+in+a+new+mouse+model+of+prolonged+hepatic+cold+ischemia+followed+by+arterialized+orthotopic+liver+transplantation.">Inflammatory responses in a new mouse model of prolonged hepatic cold ischemia followed by arterialized orthotopic liver transplantation.</a> Liver Transpl. 11 (10), 1273-1281 (2005).</li><li>Kageyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+in+allogeneic+liver+transplantation:+A+role+of+CD4+T+cells+in+early+allograft+injury.">Ischemia-reperfusion injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury.</a> Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).</li><li>Li, T., Hu, Z., Wang, L., Lv, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Details+determining+the+success+in+establishing+a+mouse+orthotopic+liver+transplantation+model.">Details determining the success in establishing a mouse orthotopic liver transplantation model.</a> World J Gastroenterol. 26 (27), 3889-3898 (2020).</li><li>Tian, Y., R&#252;diger, H. A., Jochum, W., Clavien, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+arterialized+and+nonarterialized+orthotopic+liver+transplantation+in+mice:+Prowess+or+relevant+model.">Comparison of arterialized and nonarterialized orthotopic liver transplantation in mice: Prowess or relevant model.</a> Transplantation. 74 (9), 1242-1246 (2002).</li><li>Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+hepatic+rearterialization+on+reperfusion+injury+and+outcome+after+mouse+liver+transplantation.">Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation.</a> Transplantation. 76 (2), 327-332 (2003).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+various+techniques+of+mouse+liver+transplantation.">A review of various techniques of mouse liver transplantation.</a> Transplant Proc. 45 (6), 2517-2521 (2013).</li><li>Kojima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+carcinoembryonic+antigen-related+cell+adhesion+molecule+1-T+cell+immunoglobulin+domain+and+mucin+domain-containing+protein+3+cross+talk+alleviates+liver+transplant+injury+in+mice+and+humans.">T cell carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1-T cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 3 cross talk alleviates liver transplant injury in mice and humans.</a> Gastroenterology. 165 (5), 1233-1248 (2023).</li><li>Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+transplantation+in+the+mouse:+Insights+into+liver+immunobiology,+tissue+injury,+and+allograft+tolerance.">Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance.</a> Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).</li></ol>

Hiçbir yazarın açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Vasküler rekonstrüksiyonu öğrenmek, başarılı MOLT'a ulaşmanın en zorlu yönüdür. Manşetin kalitesi, farelerin küçük boyutu göz önüne alındığında, rekonstrüksiyonun zorluğunu önemli ölçüde etkiler5. Bu makale, manşet hazırlığı, takılması ve rekonstrüksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar.
Manşet hazırlığı ve bağlantı 2,5 ile ilgili önceki raporlardan büyük farklılıklar olmasa da, bazı küçük noktalar dikkate alınmalıdır. İlk olarak, manşet sapının kalınlığı toplam çevrenin yaklaşık 1 / 6'sı ile sınırlandırılmalıdır. Çok inceyse, sap kolayca bükülebilir ve kavranması zorlaşabilir. Çok kalınsa, alıcının karnında ele alınması zor olabilir. Kişisel tercihinizi erkenden belirlemek çok önemlidir.
İkincisi, arka tabladaki lümenin görünürlüğü çok önemlidir. PV lümenini doğrulamak için donörün dalak damarına bir dönüm noktası olarak tutturulmuş bir 10-0 naylon iplik kullanılır. Naylon iplik, aşırı bükülmeyi önlemek için saat 8 konumuna yerleştirilmiştir. Damar duvarı, saat 3 ve saat 9 pozisyonlarında iki forseps ile kavranarak ve saat 6 pozisyonunda manşet duvarına bastırılarak dışsallaştırılır. 8-0 ile fiksasyon İpek ipliği dikkatli hareketler gerektirir. Oluğa sabitlenerek yeterli sabitleme sağlanır. Taktıktan sonra, çıkmadığını doğrulamak için manşeti kaldırın.
Üçüncüsü, rekonstrüksiyon sırasında, alıcı damarda çok büyük bir delik oluşturmamak önemlidir, çünkü manşet yerleştirildikçe delik doğal olarak genişler. Büyük bir delik açmak, arızanın en yaygın nedeni olan damar bölünmesine yol açabilir. Özellikle IHIVC rekonstrüksiyonunda, IHIVC'nin daha kısa uzunluğu, bir PV'den daha kolay çekilmesini sağladığından daha küçük delikler açılmalıdır. Salin solüsyonunu lümenden geçirirken, aşağı doğru değil yukarı doğru kuvvet uygulayarak manşet yerleştirmeyi destekleyin.
Yaygın başarısızlık nedenleri ve önlemler ayrıntılı olarak tartışılmıştır. En önemli noktalar, iç damar lümeninin net bir şekilde görüntülenmesini sağlamak ve damar ayrılmasını önlemek için manşet yerleştirme sırasında gereksiz kuvvetten kaçınmayı içerir. Manşet yöntemi için bu teknik ipuçlarının becerileri artırdığına ve araştırmayı ilerlettiğine inanılmaktadır.

Fare ortotopik karaciğer nakli (MOLT) ilk olarak 1991 yılında bildirilen etkili bir deneysel yöntemdir1. Genetik olarak modifiye edilmiş fareler ve çeşitli araştırma reaktifleri kullanan bu deneysel model, sıcak ve soğuk iskemi ve reperfüzyon yaralanmalarının araştırılmasında çok önemli bir rol oynamıştır. Bununla birlikte, modelin yüksek teknik karmaşıklığı, karaciğer nakli için temel tıbbın geliştirilmesini engellemiştir2. MOLT üç ana adımı içerir: (1) karaciğerin donör fareden alınması, (2) arka masa cerrahisi ve (3) karaciğerin alıcıya implantasyonu. Bu alıcı prosedürler arasında vasküler anastomoz en büyük zorluğu oluşturmaktadır. Suprahepatik inferior vena kava anastomozu tipik olarak elle dikilerektamamlanırken, infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) ve portal ven (PV) elle dikilen dikişler yerine plastik manşetler kullanılarak daha verimli bir şekilde yeniden yapılandırılabilir.
Anhepatik dönem, alıcının doğal karaciğerinin çıkarılması ile greft implantasyonu arasındaki süreyi ifade eder. Tutarlı sonuçlar elde etmek için, anhepatik süreyi 20 dakikadan daha az bir süre ile sınırlamak zorunludur. Sonuç olarak, bu modeli kullanan çalışmalar belirli kurumlarla sınırlandırılmıştır 3,4,5,6,7,8,9. MOLT'un çeşitli aşamaları arasında, anhepatik zamanı en aza indirmek ve başarılı bir transplantasyon sağlamak için düzgün PV ve IHIVC rekonstrüksiyonu elde etmek çok önemlidir.
PV ve IVC rekonstrüksiyonu genellikle vasküler manşetler kullanılarak gerçekleştirilir, çünkü manşet tekniği elle dikilen sütürlere kıyasla vasküler anastomozu basitleştirir 2,5,8. Vasküler manşetin hazırlanması ve manşetin güvenli bir şekilde takılmasında yer alan teknik, alıcı vasküler rekonstrüksiyonun karmaşıklığını önemli ölçüde etkiler. Amacımız, manşet yöntemiyle ilgili çok sayıda teknik ipucu için ayrıntılı görsel rehberlik sağlamak ve böylece öğrenme eğrisini azaltmaktır. Bu video klipler, alıcı cerrahisi sırasında manşetin damarlara nasıl takılacağının ve PV ve IHIVC'nin nasıl yeniden yapılandırılacağının net bir şekilde anlaşılmasını sağlayacaktır.

<table><tbody><tr><td>16 G intravenous catheter</td><td>TERUMO</td><td>SR-FF2032</td><td>IHIVC cuff</td></tr><tr><td>20 G intravenous catheter</td><td>TERUMO</td><td>SR-FF1651</td><td>PV cuff</td></tr><tr><td>8-0 braid silk</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>CR9-80B2</td><td>8-0 silk</td></tr><tr><td>Belzer UW Cold Storage Solution&amp;nbsp;</td><td>Astellas</td><td></td><td>Organ preservation fluid</td></tr><tr><td>Bulldog clamp</td><td>B BRAUN</td><td>FB329R</td><td>Bulldog clamp</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Oriental Bio Service</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane inhalation solution</td><td>Viatris</td><td></td><td>Anesthesic</td></tr><tr><td>Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm&amp;nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>11253-20</td><td>Straight microforceps</td></tr><tr><td>Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock</td><td>F.S.T</td><td>18056-14</td><td>Vessel clip applicator</td></tr><tr><td>Micro Serrefines&amp;nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>18055-4</td><td>Vessel clip</td></tr><tr><td>No.11 Spare Blades</td><td>FEATHER Safety Razor</td><td>11</td><td>Blades</td></tr><tr><td>Ophthalmic scissor, round handle</td><td>B BRAUN</td><td>FD103R</td><td>Microscissor</td></tr><tr><td>Plastic rectangular-shaped container&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Daiso</td><td></td><td>10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high</td></tr><tr><td>SuperGrip Tips</td><td>F.S.T</td><td>00649-11&amp;nbsp;</td><td>Curved microforceps</td></tr><tr><td>SZX7</td><td>Olympus</td><td>SZX7</td><td>Microscope</td></tr><tr><td>Vise</td><td>Niigataseiki</td><td>00505351</td><td>A mechanical tool to secure Pean forceps on the table</td></tr></tbody></table>

vascular reconstruction with the cuff technique in mouse orthotopic liver transplantation

Fare ortotopik karaciğer transplantasyonu, karaciğer iskemisi ve reperfüzyon hasarının altında yatan mekanizmaları araştırmak için etkili bir metodolojidir. Bununla birlikte, teknik zorluklar, bu değerli deneysel modelin kullanılmasının ve bu becerilerin gelecek nesillere aktarılmasının önünde bir engel teşkil etmektedir. Bu prosedürün en zorlu yönü, portal ven (PV), infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) ve suprahepatik inferior vena kava dahil olmak üzere vasküler rekonstrüksiyondur. Sütürler yerine plastik manşetlerin kullanılması, daha düzgün PV ve IHIVC rekonstrüksiyonuna izin verir. Greft damarının ucuna intravenöz bir kateterden yapılmış bir manşet takılarak ve manşetin alıcı damara yerleştirilmesiyle damarlar yeniden yapılandırılır. En önemli iki husus, geminin iç lümenini düzgün bir şekilde görselleştirmek ve aşırı güç kullanımından kaçınmaktır. Amacımız, alıcı cerrahisinde manşet tekniği kullanılarak yapılan vasküler rekonstrüksiyonlara teknik bir bakış sağlamaktır. Manşet tekniği için bu teknik ipuçlarının, mikro cerrahların vasküler rekonstrüksiyonu kolaylaştırmasına ve araştırmalarını ilerletmesine yardımcı olması bekleniyor.

PV rekonstrüksiyonu, portal venin klempini açtıktan sonra kıvrımlılık olmadığında ve karaciğer düzgün bir şekilde perfüze edildiğinde başarılıdır. Anhepatik süre 20 dakikanın altında olmalıdır, çünkü 25 dakikayı aşan anhepatik zamanlar fare ölüm riskini artırır. Greftten kan yetersizliği yoksa IHIVC rekonstrüksiyonu başarılı kabul edilir.
Greftin organ koruma solüsyonu kullanılarak 1 saat soğuk sıcaklıklarda saklanması, reperfüzyondan 6 saat sonra yaklaşık 2.000 U/L'lik bir serum alanin aminotransferaz seviyesi ile sonuçlanır (Şekil 7A). Transplantasyondan 7 gün sonra sağkalım oranı %100'dür (Şekil 7B). Bununla birlikte, hepatik arter anastomozu olmayan modelimizde, alıcı fareler transplantasyondan yaklaşık 30 gün sonra intrahepatik biloma ile ilgili sorunlara yenik düşebilir
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66215/66215fig01.jpg"> Şekil 1: Vasküler rekonstrüksiyon aletleri. Durum ve ameliyat alanı için gerektiği gibi düz veya kavisli forseps kullanılır. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/66215/66215fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66215/66215fig02.jpg"> Şekil 2: Mikroskop. Mikroskop, 10x büyütmeli bir objektif lens ve en az 0.8x büyütmeli bir mercek merceği ile donatılmıştır. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/66215/66215fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66215/66215fig03.jpg"> Şekil 3: Manşetin hazırlanması. (A) PV ve IHIVC için manşet. (B) Manşet üzerinde bir oluk oluşturma işleminin şematik bir temsili. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/66215/66215fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66215/66215fig04.jpg"> Şekil 4: Manşet eki. (A) PV'ye bağlı iplik manşete geçirilir. (B) Manşet bağlantısı için cihaz kurulumu. (C) Manşeti 8-0 ile sabitlemek ipek ligasyonları. (D) Vasküler eksternalizasyonun ve manşete fiksasyonun şematik gösterimi. (E) Tamamlanmış manşet eki. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/66215/66215fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66215/66215fig05.jpg"> Şekil 5: IHIVC kökünün geçici ligasyonu. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/66215/66215fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66215/66215fig06.jpg"> Şekil 6: Vasküler rekonstrüksiyon. Bu resim, (A) PV ve (B) IHIVC için delik oluşturma yerlerini göstermektedir. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/66215/66215fig06large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66215/66215fig07.jpg"> Şekil 7: Ameliyat sonrası sonuçlar. (A) Reperfüzyondan 6 saat sonra serum alanin aminotransferaz (ALT) seviyeleri. CIT, soğuk iskemik zaman; Tx, transplantasyon. p < 0.0001. (B) MOLT'tan sonra alıcının hayatta kalması. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/66215/66215fig07large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Exploring Cold Ischemia and Warm Reperfusion Injury in Fatty Liver Transplantation at JoVE.com

Yazar Spotlight: Yağlı Karaciğer Transplantasyonunda Soğuk İskemi ve Sıcak Reperfüzyon Hasarının Araştırılması

Bu protokol, fare ortotopik karaciğer transplantasyonunda manşet tekniği kullanılarak damar rekonstrüksiyonu için teknik bilgi sağlar.

Fare Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunda Cuff Tekniği ile Vasküler Rekonstrüksiyon

Mouse orthotopic liver transplantation is an effective methodology for investigating the underlying mechanisms of liver ischemia and reperfusion injury. ...

Araştırmalarımızı karaciğer nakli, özellikle soğuk iskemi ve sıcak reperfüzyon hasarı üzerine yoğunlaştırıyoruz. Bu amaçla bir araştırma aracı olarak fare karaciğer nakli modeli kullanılmıştır. Teknik zor olduğu için öğrenmek ve tutarlı sonuçlar elde etmek uzun zaman alabilir.Gelecekte, yağlı karaciğer nakli ile ilgili araştırmalar yapmak istiyoruz. Bu, klinik karaciğer transplantasyonunda hala üstesinden gelinmesi gereken bir sorundur.

vascular-reconstruction-with-cuff-technique-mouse-orthotopic-liver

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

Vascular Reconstruction with the Cuff Technique in Mouse Orthotopic Liver Transplantation

1.2K Görüntüleme.  Kyoto University. Araştırmalarımızı karaciğer nakli, özellikle soğuk iskemi ve sıcak reperfüzyon hasarı üzerine yoğunlaştırıyoruz. Bu amaçla bir araştırma aracı olarak fare karaciğer nakli modeli kullanılmıştır. Teknik zor olduğu için öğrenmek ve tutarlı sonuçlar elde etmek uzun zaman alabilir.Gelecekte, yağlı karaciğer nakli ile ilgili araştırmalar yapmak istiyoruz. Bu, klinik karaciğer transplantasyonunda hala üstesinden gelinmesi gereken bir sorundur.

Video: Yazar Spotlight: Yağlı Karaciğer Transplantasyonunda Soğuk İskemi ve Sıcak Reperfüzyon Hasarının Araştırılması

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

Sıçanlarda Ortotopik Karaciğer Nakli

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Tıp

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. To better understand the mechanism behind these surgical procedures, a rat partial liver transplantation (PLTx) model was established for relevant surgical studies. Because of the complexity of the rat PLTx model, a protocol with detailed descriptions is required. An article published previously reported a protocol in which ex vivo hepatectomy was used to achieve 50% rat PLTx. In contrast to this protocol, we introduced a re-arterialized PLTx with an in vivo 70% hepatectomy. An updated vessel-oriented hepatectomy was incorporated into the rat PLTx to refine the microsurgical procedure. The portal veins and hepatic arteries of the left lateral lobe and the median lobe were individually dissected and ligated before removal of the liver parenchyma, thereby decreasing the probability of bleeding in the remnant liver stump. Furthermore, an end-to-side vessel anastomosis between the common hepatic artery and the enlarged proper hepatic artery was introduced to re-arterialize the hepatic artery. By using this end-to-side vessel anastomosis technique, the diameter of the anastomosis was enlarged, thereby decreasing the difficulty of hand suture and maintaining a high rate of anastomotic patency. Moreover, the cuff anastomosis of the infrahepatic vena cava was slightly modified. A section of circumferential liver parenchyma around the vena cava of a recipient was preserved during cuff anastomosis to maintain the three-dimensional shape of the vascular lumen. This section of liver parenchyma was removed after completing the anastomosis. With this modification, the step involving placement of stay sutures was omitted, thereby further shortening the cuff anastomosis time. By using this protocol of rat PLTx, a low liver enzyme level, an intact liver lobular architecture and a high survival rate were achieved after microsurgery.

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Here, a protocol involving re-arterialized rat partial liver transplantation is presented. Specifically, 70% liver was resected in vivo by using an updated technique of vessel-oriented hepatectomy. The hepatic artery was reconstructed in an end-to-side manner. The cuff technique was modified to shorten the anastomosis time of the infrahepatic vena cava.

Yeniden Arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli bir vivo içinde gemi odaklı % 70 ile Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep learning curve. The introduction of the cuff technique for anastomosis of the portal vein (PV) and infrahepatic vena cava (IHVC) has significantly simplified the transplant procedure in rats. However, due to the short anterior wall of the recipients' suprahepatic vena cava (SHVC), the cuff technique is very difficult to use for the reconstruction of the SHVC. Most researchers in this field still use the hand-suture technique for SHVC reconstruction, which makes it the bottleneck step in rat orthotopic liver transplantation. The magnetic anastomosis technique (i.e., magnamosis) is a method of connecting two vessels using the attractive force between two magnets. Our recent study has shown that the magnetic anastomosis technique is superior to the hand-suture technique for SHVC reconstruction in rats. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using the novel magnetic anastomosis technique. In this model, the reconstruction of the PV and IHVC was performed by the standard cuff technique, while the reconstruction of the bile duct (BD) was performed by a stent technique. The hepatic re-arterialization was not performed. The magnetic anastomosis technique made SHVC reconstruction much easier and significantly shortened the anphepatic phase. After a reasonable learning curve, even researchers without advanced microsurgical skills can produce reliable and reproducible results using this rat model of OLT.

The reconstruction of the suprahepatic vena cava (SHVC) remains a difficult step in rat orthotopic liver transplantation. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using a novel magnetic anastomosis technique.

Orthotopic fare modeli bir roman manyetik anastomoz teknik Suprahepatic Vena kava imar için kullanılarak karaciğer nakli

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to improve surgical efficiency. In our lab, we have optimized the cuff technique with two major steps. First, we used the inner tube technique to insert a temporary inner tube into the external jugular vein and carotid artery blood vessel to facilitate eversion of the vessel over the cuff. Second, we performed complete heterotopic cardiac transplantation through the collaboration of two experienced surgeons. These modifications effectively reduced the operation time to 25 minutes, with a success rate of 95%. In this report, we describe these procedures in detail and provide a supplemental video. We believe that this report on the improved cuff technique will offer practical guidance for murine heterotopic heart transplantation and will enhance the utility of this mouse model for basic research.

We introduce an inner tube approach to the cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation to help evert the vessel over the cuff. We found that cooperation between two experienced surgeons markedly shortens the operation time.

Murin Kalp Nakli için Manşet Tekniğinin Optimizasyonu

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs

Murine models of cardiac transplantation are frequently utilized to study ischemia-reperfusion injury, innate and adaptive immune responses after transplantation, and the impact of immunomodulatory therapies on graft rejection. Heterotopic cervical heart transplantation in mice was first described in 1991 using sutured anastomoses and subsequently modified to include cuff techniques. This modification allowed for improved success rates, and since then, there have been multiple reports that have proposed further technical improvements. However, translation into more widespread utilization remains limited due to the technical difficulty associated with graft anastomoses, which requires precision to achieve adequate length and caliber of the cuffs to avoid vascular anastomotic twisting or excessive tension, which can result in damage to the graft. The present protocol describes a modified technique for performing heterotopic cervical cardiac transplantation in mice which involves cuff placement on the recipient's common carotid artery and the donor's pulmonary artery in alignment with the direction of the blood flow.

Mouse cardiac transplantation models represent valuable research tools for studying transplantation immunology. The present protocol details mouse heterotopic cervical cardiac transplantation that involves the placement of cuffs on the recipient's common carotid artery and the donor's pulmonary artery trunk to allow for laminar blood flow.

Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Murine models of cardiac transplantation are frequently utilized to study ischemia-reperfusion injury, innate and adaptive immune responses after ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

Modifiye Dikişsiz Manşet Tekniği Kullanılarak Murine Servikal Aort Transplantasyon Modeli

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunun Sıçan Modelinde Arteriyel Reconnection Sonrası Azaltılmış Komplikasyonlar

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

A Modified Cuff Technique for Mouse Cervical Heterotopic Heart Transplantation Model

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for investigating the mechanism of cardiac allograft rejection in preclinical studies because of their high homology with human genes. This understanding would help develop unique approaches to improving patients&#39; long-term survival treated with cardiac allografts. In a mouse model, abdominal donor heart implantation is commonly performed with an end-to-end&#160;anastomosis to the recipient&#39;s aorta and inferior vena cava using stitches. In this model, the donor&#39;s heart is implanted by end-to-end anastomosis to the recipient&#39;s carotid artery and jugular vein by the modified-Cuff technique. The transplantation surgery is performed without stitching and thus may increase the survival of the recipient since there is no interference with the blood supply and venous reflux of the lower body. This mouse model would help investigate the mechanisms underlying the immunological and pathological (acute/chronic) rejection of cardiac allografts.

In the present protocol, a mouse heart transplantation model is used for investigating the mechanism of cardiac allograft rejection. In this heterotopic heart transplantation model, operation efficiency is improved, and the survival of cardiac grafts is ensured by a cervical end-to-end anastomosis of heart implantation using a modified Cuff technique.

Fare Servikal Heterotopik Kalp Transplantasyon Modeli için Modifiye Manşet Tekniği

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for ...