Chlamydomonas reinhardtii'de Fotodavranışın Gözlemlenmesi

Bu yöntemin ele aldığı kilit soru, ilginç Chlamydomonas'ın bir suşunun fotoğraf davranışları yeteneğini koruyup korumadığıdır. Bu yöntem, ilginç bir suşun fotoğraf davranışları sergileyip sergilemediğini test etmek için basit, hızlı ve kolaydır. Bu yöntem, siliyer motilitenin fotobiyolojisine ve hücre biyolojisine katkıda bulunabilir.

Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan bir laboratuvar teknisyeni olan Atsuko Isu olacak. Başlamak için, 3,5 santimetrelik bir Petri kabına iki ila üç mililitre hücre süspansiyonu ekleyin ve çanağı bir ışık kutusuna yerleştirin. Hücreleri düzgün bir şekilde dağıtmak ve aydınlatmadan önce bir resim elde etmek için çanağı hafifçe sallayın.

Çanağı bir taraftan masaüstünün karanlık odasında yeşil ışık yayan bir diyot veya LED ile aydınlatın. Görüntüleri almadan önce tabağı yaklaşık beş dakika bekletin. Hücre kültürü damlacıkları kullanılarak yapılan fototaksis testi için, 25 mikrolitre hücre süspansiyon damlacığını bir mikro pipet kullanarak doğrudan beyaz plastik bir plakaya yerleştirin.

Karanlık bir masaüstü odasında damlacıkları bir taraftan yeşil bir LED ile aydınlatın ve görüntüleri almadan önce üç dakika bekletin. Bir cam sürgü üzerine 30 mikrolitre hücre süspansiyonu yerleştirin ve yan tarafta ara parçalar bulunan 18 x 18 milimetrelik bir kapak kayması yerleştirin. Kapak kaymasının bir tarafından alınan numuneleri yeşil LED'li bir ara parça olmadan aydınlatın ve loş kırmızı ışık altında 10X objektif lensle karanlık alan mikroskobu altındaki hücreleri gözlemleyin.

Işık aydınlatmasından sonra, kamera donanımlı bir mikroskop kullanarak hücre aydınlatmasını 20 saniye boyunca kaydedin. Fotoşok tepki testi için, bir cam slaytın üzerine 30 mikrolitre hücre süspansiyonu yerleştirin ve slaytın üstüne ara parçalı bir kapak kayması yerleştirin. Hücreyi mikroskop altında loş kırmızı ışıkla gözlemleyin.

Hücre hareketini kaydederken bir kamera flaşı kullanarak flaş aydınlatması uygulayın. Chlamydomonas reinhardtii'deki negatif fototaksisin beş dakikalık yan aydınlatmadan sonra temsili bir örneği burada gösterilmiştir. Hücrelerin çoğu ışık kaynağının karşı tarafında birikir.

Fotoşok yanıt testinde, hemen hemen tüm hücreler fotoşok tepkisini sergiledi. Hücreler kısa bir süre geriye doğru yüzdüler ve ileri doğru yüzerek iyileştiler. Bu prosedürü gerçekleştirmek için, aridimigudolfaz hücrelerini kullanın ve tahlilden önce bunları kırmızı ışığa maruz bırakın.

Kırmızı ışığa maruz kalmazsa, hücreler ışığa duyarsız hale gelecektir. Bu teknik, fotoşok yanıtlarının anormal fototaksisleri ile çeşitli mutantları izole eder. Ek olarak, fotoğraf davranışlarını etkileyen çeşitli hücre içi ve hücre dışı faktörler tanımlanmıştır.