Bir biyo-kontrol ajanının uzun süreli araştırılması ve kullanılması, etkili ve ekonomik yetiştirme tekniklerinin mevcudiyetine bağlıdır ve bu protokolün bu parazitoidin yetiştirilmesinde etkili olduğu kanıtlanmıştır. Şu anda bu parazitoidin araştırma veya saha salınımı için yetiştirilmesine büyük ilgi var ve protokol gelecekteki uzun vadeli araştırmalara ve bu umut verici biyo-kontrol ajanının kullanımına fayda sağlayacak. İlk kullanıcıların, makalede verilen ilgili referansları ve yöntemlerin bazı uygulamalarını okuyarak ilgili böceklerin bazı temel biyolojisini anlamaları gerekebilir.
Ev sahibi diyetini yapmak için, öncelikle, diyetin sıvı kısmını makalede açıklandığı gibi hazırlayın. Daha sonra, 250 mililitrelik boş bir şişeye 25 ila 30 gram yaban mersini püresi ekleyin. Daha sonra, sıvıyı şişeye dökün, sıvı sadece yaban mersini püresinin üstünü kaplar.
Daha sonra, ev sahibi Drosophila suzuki'yi yetiştirmek için, önce bir parça emici kağıt havlu kesin ve merkezde bükün. Ardından, kağıt havlunun bükülmüş orta bölümünü diyet şişesine yerleştirin. Nemi korumak için, kağıt havluyu ve diyeti ıslatmak için damıtılmış su kullanın.
Daha sonra, cinsel olarak olgun yetişkin sinekleri aktarmak için, bir sinek kolonisi şişesinin tıpasını dikkatlice çıkarın ve diyet şişesine ters çevirin. Bu maruziyetten bir hafta sonra, sineklerin ortaya çıkması için sinekleri üç hafta boyunca bir çevre odasında tutun. Konakçı larvaları parazitoidlere maruz bırakmak için, önce yetişkin sinekleri ve kağıt havluyu şişeden çıkarın, sinek yumurtalarını ve larvalarını bırakın.
Larvalar için bir yavru substrat görevi görmek için, yeni bir emici kağıt havlu katlayın ve şişeye yerleştirin. Daha sonra parazitoid G3 Ganaspis brasiliensis'in altı dişi ve erkek çiftini şişeye aspire edin ve köpük tıpanın dibine ince bir bal tabakası çizin. Parazitoidleri toplamak ve depolamak için, yetişkinleri beş gün sonra çıkarın.
Daha sonra şişeyi daha önce belirtilen koşullar altında 35 gün boyunca çevre odasında saklayın. Yetişkin eşekarısı ortaya çıkmasıyla, haftada üç kez aspire edin. Eşekarısı tutmak için, önce nemlendirilmiş ancak damıtılmış suyla doyurulmamış bir kağıt havluyu 2,5 x 9,5 santimetrekarelik bir Drosophila şişesinin dibine yerleştirin.
Ardından, yaklaşık 60 eşekarısı şişeye aktarın ve ortaya çıkış tarihini işaretleyin. Şişeyi çevre odasında saklayın. Haftada iki kez, şişelerin köpük tıpasının dibine ince bir bal tabakası çizin.
İlk olarak, Drosophila suzuki'nin büyük ölçekli yetiştirilmesini, büyük, örülmüş, ağ kaplı bir kafese 50: 50 cinsiyet oranında 1.500 ila 2.000 cinsel olarak olgun yetişkin sinek yerleştirerek düzenleyin. Ardından, suya batırılmış pamuklu bir tabak ve kafese standart Drosophila ortamına sahip dört ila altı Petri kabı yerleştirin. Haftada iki kez, maruz kalan Petri yemeklerini taze olanlarla değiştirin.
Her istila edilmiş Petri kabını kapaksız olarak 800 mililitrelik plastik bir kaba yerleştirin ve bardağı ince bir ağ ile örtün. Daha sonra, bardakları 12 ila 15 gün boyunca 23 santigrat derecede ve% 75 bağıl nemde inkübe edin. Kuluçkadan sonra, yeni yumurtadan çıkmış yetişkin Drosophila suzuki'yi bir yetiştirme kafesine aktarın.
Daha sonra, yaban mersini bir dakika boyunca soğuk suda durulayarak konakçı larvaları hazırlamaya başlayın ve meyveleri üç dakika boyunca% 5'e seyreltilmiş bir ağartıcı çözeltisi ile doldurulmuş bir havzaya batırın. Ardından, dokuz santimetrelik Petri bulaşıklarını yıkanmış yaban mersini ile doldurun. Öğleden sonra geç saatlerde, Petri bulaşıklarını yetiştirme kafesine koyun ve gece boyunca bırakın.
Ertesi sabah, sinekleri meyvelerden çıkarmak ve meyveleri yetiştirme kafesinden çıkarmak için Petri tabaklarına hafifçe dokunun. Bu arada, parazitoid G1 Ganaspis brasiliensis için bir parazitizm kafesi ve bir yaban arısı ortaya çıkma kafesi hazırlayın. Her iki kafesin de bir veya daha fazla besleyiciyi askıya almak için tavanın altında ince bir ip bulunmalıdır.
Her kafeste, su içeren bir Drosophila şişesini askıya alın ve bağıl neme bağlı olarak her beş ila yedi günde bir tavandan baş aşağı bir selüloz asetat tıkacı ile kapatın. Drosophila suzuki kafesinden istila edilmiş yaban mersini çıkardıktan hemen sonra, onları iki ila üç gün boyunca 1.500 ila 2.000 Ganaspis brasiliensis eşekarısı ile parazitizm kafesine koyun. Daha sonra, meyveleri altta emici kağıt bulunan 800 mililitrelik plastik bir bardakta toplayın.
Açık kabı ortaya çıkma veya eklozyon kafesinde en az 28 gün boyunca 21 santigrat derecede ve% 65 bağıl nemde inkübe edin. Kuluçkanın ikinci ve üçüncü haftalarında, erken konakçı eklosyonu için kafesi haftalık olarak kontrol edin. Ardışık parazitoid toplamayı kolaylaştırmak için yetişkin sinekleri çıkarın.
Kuluçkanın dördüncü haftasının sonunda, kafese bir besleyici ve bir su kaynağı sağlayın. Yetişkin eşekarısının yaklaşık% 10 ila% 15'ini toplayın ve eski ve verimsiz eşekarısı yerine geçmek için parazitizm kafesine aktarın. Eklozyon kafesinin kalan eşekarısından, suyla doldurulmuş ve bardağın dibinde bir diş pamuklu rulo ile kapatılmış iki mililitrelik bir tüp içeren 800 mililitrelik bir plastik bardak ile 50: 50 cinsiyet oranında 700 yetişkine kadar saklayın.
Bardağı bir aya kadar bir çevre odasında belirgin bir çıkış durumuna sahip olarak saklayın. Parazitoidleri nakletmek için, yaklaşık 200 yetişkini 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin. Ardından, tüm tüpleri buz paketleriyle birlikte yalıtkan bir nakliye kabına koyun.
Bu protokol, laboratuvarda tarımsal haşere Drosophila suzuki'ye karşı parazitoid bir ajan olan G3 Ganaspis brasiliensis'in küçük ölçekli başarılı bir şekilde yetiştirilmesiyle sonuçlandı. Yavru üretimi, parazitoid yoğunluk ve maruz kalma süresindeki farklılıklardan etkilenmedi. Büyük ölçekli G1 Ganaspis brasiliensis üretimi de sağlanabilir, üretim ev sahibi Drosophila suzuki'ye ilk maruz kaldıktan beş hafta sonra başlar.
8. haftadan 22. haftaya kadar, parazitoid üretimi onlara maruz kalan meyve miktarıyla orantılı hale geldi. Uygun bir yetiştirme sıcaklığını korumak, nemi kontrol etmek ve yetişkin böcekler için her zaman yiyecek sağlamak kritik öneme sahiptir. Yöntemler, eşekarısı üremesini en üst düzeye çıkarmak için konakçı ve parazitoidin yetiştirme yoğunluklarını optimize ederek ve bu parazitoidi alternatif konakçılar üzerinde yetiştirme olasılığını araştırarak daha da geliştirilebilir.
