Bu nedenle protokolümüzde, TNBS'nin intrakolonik instilasyonu, damlatma bölgesinde transmural inflamasyona ve inflamasyona yakın segmentte mekanik distansiyona yol açmaktadır. Yani bu stenotik Crohn hastalığını taklit eder. Proksimal segment mekanik olarak şişkin olduğu ancak görünür bir inflamasyon göstermediği için, proksimal segmentin ve inflamasyon bölgesinin karşılaştırmalı bir çalışması, mekanik stresin Crohn kolitinde rol oynayıp oynamadığını belirlemeye yardımcı olur.
Önceki çalışmalar sadece inflamasyon bölgesine odaklanmaktadır. Modeldeki farklı bölgelerde çalışan protokolümüz, Crohn hastalığında, özellikle stenotik Crohn hastalığında mekanik stresin kritik bir rolünü vurgulamaktadır. Başlamak için, sıçanları anestezi masasına sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
Koliti indüklemek için, anal vergeden yaklaşık yedi ila sekiz santimetre boyunca anüs boyunca tıbbi dereceli, açık uçlu, poliüretan bir kateter yerleştirin ve TNBS'yi kolona nazikçe aşılayın. Sahte kontrol sıçanlarını 250 mikrolitre salin ile uygulayın. TNBS veya salinin dağılımına yardımcı olmak ve dökülmeleri önlemek için, sıçanları başları aşağı bakacak şekilde yaklaşık 30 derecelik bir açıyla sırtüstü pozisyonda tutun ve anüs iki dakika boyunca kapalı tutun.
Cerrahi sınıf makas ve forseps kullanarak sıçan karnını açın. Anal kanalın üzerindeki tüm kolonu dikkatlice çıkarın ve kolonu hemen buz gibi soğuk 1x HBSS tamponuna aktarın. Arabellekteki iki noktayı düzeltin ve bir cetvel kullanarak iki nokta üst üste uzunluğunu ölçün.
Naylon bir iplik alın ve kontroldeki kolon segmentlerinin ve TNBS ile tedavi edilen sıçanların dış çevresini ölçmek için kolonun etrafında daire içine alın. Histoloji için tam kalınlıkta dokular alın. Kolonu mezenterik tahta boyunca kesin ve kolonu HBSS tamponu ile iyice temizleyin.
Makroskopik inflamasyon skoru için kolonu, minimum modifikasyonlarla önceden tanımlanmış kriterlere göre değerlendirin. TNBS ile tedavi edilen sıçanlardan P, I ve D.Site P bölgelerindeki kolonik doku örneklerini toplayın, iltihaplanma bölgesinin oral marjından iki ila üç santimetre önceki kısımdır. Site I, TNBS'nin aşılandığı iltihaplanma bölgesidir, tipik olarak kolonun ucundan dört ila altı santimetre uzaklıktadır.
Son olarak, D bölgesi, inflamasyon bölgesinin aboral marjına bir ila iki santimetre distal olan kısımdır. Sıçanlarda TNBS'nin intrakolonik instilasyonu, kalınlaşmış bağırsak duvarı ve distal kolonda damlatma bölgesinde daralmış lümen ile yaklaşık iki santimetre uzunluğunda lokalize bir transmural inflamasyona neden oldu. TNBS damlatma bölgesi bölge I.As transmural inflamasyon ve darlık sonucu bölge I olarak adlandırıldı, hem inflamasyon hem de mekanik stres vardı I. Bölgedeki darlık, TNBS damlatma bölgesine yakın segmentte belirgin lümen distansiyonuna yol açtı, site P ve I'de kolon çevresi ssahte kontrol kolonuna kıyasla anlamlı olarak artmıştır.
Mekanik olarak şişkin olmasına rağmen, P bölgesi görünür inflamasyon göstermedi. Aksine, D bölgesi olarak adlandırılan TNBS instilasyonuna distal kolonik segment ne inflamasyon ne de mekanik distansiyon göstermedi. TNBS ile tedavi edilen sıçanlarda Alan I'deki makroskopik inflamasyon skoru, kolit sıçanlarının P ve D bölgelerindeki sahte kontrollere kıyasla çarpıcı bir şekilde artmıştır.
P ve D bölgelerindeki inflamasyon skorları sahte ile karşılaştırıldığında anlamlı olarak artmadı. Bu nedenle, modelde sadece site I değil, aynı zamanda P ve D bölgelerini incelemek önemlidir, çünkü bu, Crohn hastalığında mekanik stresin patojenik önemini tanımaya yardımcı olur. Mekanik stresin bağırsak iltihabında patojenik bir faktör olup olmadığını daha da belirlemek için, hayvanları yalnızca sıvı diyetle besleyerek mekanik distansiyonu serbest bırakmaya çalışabilir ve bunun iltihaplanma ve bağırsak fonksiyonuna yardımcı olup olmadığını görebilir.
