Bu protokol, metodolojinin geliştirilmesine yardımcı olmak ve güvenilir akciğer transplantasyonuna sahip olmak için dört temel alanı tanımlamaktadır. Birincisi, tekrarlanabilir bir kelepçeleme tekniğidir. İkincisi, dördüncü interkostal boşluğun, yaranın tamamen kapatılmasının ve daha sonra analiz için numunelerin nasıl geri kazanılacağı ve elde edileceğinin doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde tanımlanmasıdır.
Bu teknikler, moleküler mekanizmalar üzerinde çalışmak ve terapötik müdahaleler geliştirmek için güvenilir bir akciğer nakli yöntemi geliştirilmesine yardımcı olur. Kalp atış hızı/oksijen doygunluğu izleme ekipmanını açarak ve kartı 42 santigrat dereceye kadar ısıtarak cerrahi cihaz kurulumuna başlayın. Ayrıca, izofluran evaporatörünü önceden ısıtmak için havalandırma ve anestezi makinesini açın.
Bir anestezi şırıngasını 10 mililitre sıvı izofluran ile doldurun ve şırıngayı havalandırma ve anestezi makinesine monte edin. Ardından, cerrahi mikroskobu tercihlere göre ayarlanmış yükseklik ve odak ile açın ve elektrokoter cihazını başlatın. Aynı şekilde, cerrahi aletleri hazırlayın ve yerleştirin.
Birinci tabloya başvurarak sıçanın vücut ağırlığına göre manşetleri yapmak için kullanılacak anjiyo-kateterin doğru ölçer boyutunu belirleyin. Pulmoner arter, bronş ve pulmoner ven için manşetleri hazırladıktan sonra, uygun boyuttaki anjiyo-kateteri cerrahi mikroskop altında steril bir yüzeye yerleştirin. Daha sonra, manşet gövdesinin tepesinde bir milimetre genişliğinde ve yüksekliğinde iki milimetre uzunluğunda bir manşet gövdesi oluşturmak için anjiyo-kateteri 90 derecelik bir açıyla kesmek için 11 numaralı bir kaburga sırtı cerrahi bıçak kullanın.
Ameliyat için sargıyı hazırladıktan sonra, makasla üç ila dört santimetre uzunluğunda orta hat cilt kesisi, orta boyun yapın ve forseps kullanarak deri altı dokuları ve kasları dikkatlice inceleyin. Endotrakeal entübasyon için, trakea etrafına 4-0 ipek bir dikiş ipliği yerleştirin. Daha sonra, trakeaya 16 gauge anjiyo-kateter yerleştirin ve dikişi trakea etrafına çift düğümle sıkıca bağlayın, ardından anjiyo-kateteri yerinde tutmak için tek bir düğümle takip edin.
Sıçanda% 1 ila% 2 izofluran ile cerrahi bir anestezi düzlemini korumak için anjiyo-kateteri ventilatöre bağlayın. Makası laparo-sternotomi, kombine orta hat ve enine insizyon olarak kullanın. Daha sonra, inferior vena kava veya IVC yoluyla bir insülin şırıngası ile kilogram heparin başına 1.000 ünite enjekte edin ve sistemik dolaşım için 10 dakika bekleyin.
Akciğerler havalandırılırken, sağ ve sol kulak kepçelerini mikro diseksiyon yay makası ile kesin ve daha sonra pulmoner arterden yerçekimine 18 gauge anjiyo-kateter sokun, akciğerleri 28 santimetre suda asılı bir şırıngada 20 mililitre koruma çözeltisi ile yıkayın, tüpe ve anjiyo-katetere bağlı. Vücut ağırlığına bağlı olarak uygun miktarda hava ile doldurulmuş beş mililitrelik bir şırıngaya bağlanmak için ventilatörün endotrakeal tüpten bağlantısını kesin. Sıcak iskemiden bir saat sonra, kalp-akciğer bloğunu mikro diseksiyon yay makası ve forseps ile eksize edin ve buz üzerinde steril bir Petri kabı üzerinde buz gibi soğuk PBS ile nemlendirilmiş steril bir gazlı bez üzerine yerleştirin.
Sol akciğer hilar bölgesini Vannas-Tübingen yay makası ile dikkatlice kesin ve sol pulmoner ven, pulmoner arter ve bronşu temin edin. Manşet tırnağını kapmak için bir sivrisinek hemostatı kullanın. Daha sonra, pulmoner venin, pulmoner arterin veya bronşun distal ucunu uygun manşet gövdesinden alın ve 8-0 ile sabitlemeden önce manşetin etrafındaki ekstra dokuyu aşındırın naylon dikiş.
İşiniz bittiğinde, ekstra dokuyu ve manşet gövdesinin etrafındaki manşeti kesmek için Vannas-Tubingen yay makası kullanın. Alıcı sıçanı hazırlamak için, sıçanın göğsüne suprasternal çentikten ksifoid sürece kadar bir çizgi çizin. Bu çizginin ortasında, göğsün sol tarafı boyunca, ölçümün yarısını suprasternal çentikten ksifoid sürece kadar ölçen bir çizgi çizin.
Endotrakeal entübasyon kitinden bir LED ışığına bağlı fiber optik kabloyu kullanarak, alıcıyı 16 gauge anjiyo-kateter ile görselleştirin ve entübe edin. Akciğerler dışarı çekildikten sonra, Dieffenbach bulldog kelepçesi ile tutarken sol akciğerin etrafına steril bir gazlı bez yerleştirin ve sol akciğer hiler bölgesine mümkün olduğunca yakın bir Yasargil kelepçesi uygulayın. Sıçan hazırlandığında, alıcının pulmoner veninin etrafına 7-0 naylon sütür yerleştirerek pulmoner ven anastomozuna devam edin.
Üst ve alt segmental damarları mümkün olduğunca distal olarak enine keserek Vannas-Tübingen yay makası kullanarak alıcının pulmoner venini kesin ve bir insülin şırıngası kullanarak mililitre heparinize salin başına 0.2 mililitre bir uluslararası birim ile kanı temizleyin. Donör akciğerini buz gibi soğuk, ıslak, steril bir gazlı bezle sarılmış olarak göğüs boşluğuna yerleştirin ve anastomozu önceden konumlandırılmış 7-0 naylon sütür ile sabitlemeden önce donörün kelepçeli pulmoner damarını alıcının pulmoner damarına yerleştirin. Bronşiyal veya bronş anastomozu için, üst ve alt segmental hava yollarını mümkün olduğunca distal olarak enine keserek alıcının bronşunu kesmeden önce alıcının bronşunun etrafına 7-0 naylon bir sütür yerleştirin.
Donörün kelepçeli bronşunu alıcının bronşuna yerleştirdikten sonra, anastomozu önceden konumlandırılmış 7-0 naylon dikiş ile sabitleyin. Daha sonra, pulmoner arter anastomozunu daha önce açıklandığı gibi gerçekleştirin. Nakledilen donör akciğerin reprofüzyonuna ve ventilasyonuna izin vermek için, hilum üzerindeki Yaşargil kelepçesini çıkarın, ardından torakotomi insizyonunu 6-0 naylon bir dikişle kapatın.
BAL sıvısını doğal veya nakledilen akciğerlerden istediğiniz gibi toplayın. Pulmoner ödemi ölçmek için lobların ıslak-kuru ağırlık oranı hesaplandı. Nakledilen lob, donörün veya alıcının doğal lobuna kıyasla ıslak-kuru ağırlık oranında önemli bir artış gösterdi ve pulmoner ödem olmadığını gösterdi.
Bize göre, bu prosedürün iki kritik adımı bir, dördüncü interkostal boşluğu tanımlamak için anatomik işaretleri doğru bir şekilde kullanmak ve daha sonra iki, tekrarlanabilir bir kelepçeleme tekniğine sahip olmak için manşetleri seçmek ve uygun şekilde kullanmaktır. Hem tekrarlanabilir hem de tutarlı bir sıçan akciğer nakli modeli, genel olarak iskemi reprofüzyonu ve transplantasyonuna yönelik moleküler araştırmalar için bir temeldir.
