温缺血/再灌注损伤的大鼠肺移植模型:改善结局的优化

该方案确定了四个关键领域，以帮助改进方法并获得可靠的肺移植。首先是可重复的袖带技术。其次是准确且可重复地识别第四肋间隙，彻底闭合伤口，然后如何恢复和获取样品进行分析。

这些技术有助于开发一种可靠的肺移植方法，以研究分子机制并开发治疗干预措施。首先设置手术设备，打开心率/血氧饱和度监测设备并将电路板预热至 42 摄氏度。另外，打开通气和麻醉机以预热异氟醚蒸发器。

用10毫升液体异氟醚填充麻醉注射器，并将注射器安装到通气和麻醉机上。接下来，打开手术显微镜，根据喜好调整高度和焦点并启动电灼装置。同样，准备和布置手术工具。

通过参考表1，根据大鼠的体重确定用于制作袖带的血管导管的正确规格尺寸。准备好肺动脉、支气管和肺静脉的袖带后，将适当大小的血管导管放在手术显微镜下的无菌表面上。然后，使用11号肋背手术刀片将血管导管切割成90度角，形成一个两毫米长的袖带体，袖带主体顶部的宽度和高度为1毫米。

准备好手术包裹后，用剪刀在颈部中部做一个三到四厘米长的中线皮肤切口，用镊子小心地解剖皮下组织和肌肉。对于气管插管，在气管周围穿一条 4-0 丝缝线。然后，将 16 号血管导管插入气管，并用双结将气管周围的缝合线紧紧地绑住，然后打一个结以将血管导管固定到位。

将血管导管连接到呼吸机，以维持大鼠用1至2%异氟醚的手术麻醉平面。使用剪刀进行腹腔胸骨切开术，作为中线和横向切口的组合。然后，通过下腔静脉或IVC用胰岛素注射器注射每公斤肝素1， 000单位，并允许10分钟进行体循环。

当肺部通气时，用微型解剖弹簧剪刀切割左右耳廓，然后通过肺动脉引入 18 号血管导管，在悬挂在 28 厘米水中的注射器中用 20 毫升保存溶液重力冲洗肺部，连接到管道和血管导管。断开呼吸机与气管插管的连接，以连接到根据体重填充适当空气量的 5 毫升注射器。温暖缺血一小时后，用微型解剖弹簧剪刀和镊子切除心肺阻滞，并放在用冰冷的PBS蘸湿的无菌纱布上，放在冰上的无菌培养皿上。

用Vannas-Tubingen弹簧剪刀小心修剪左肺门区域，并获取左肺静脉，肺动脉和支气管。使用蚊子止血器抓住袖带标签。然后，将肺静脉、肺动脉或支气管的远端通过适当的袖带体，并清除袖带周围的额外组织，然后用 8-0 固定尼龙缝合线。

完成后，使用Vannas-Tubingen弹簧剪刀修剪袖带身体周围的多余组织和袖带。为了准备受体大鼠，在大鼠的胸部从胸骨上切口到剑突画一条线。在这条线的中间，沿着胸部左侧画一条线，测量从胸骨上切口到剑突的一半测量值。

使用连接到气管插管套件的 LED 灯的光缆，使用 16 号血管导管观察并插管接受者。一旦肺被拔出，在左肺周围放置无菌纱布，同时用迪芬巴赫斗牛犬夹住它，并在左肺门区域尽可能近端应用Yasargil夹。当大鼠准备好时，通过在受体的肺静脉周围放置7-0尼龙缝合线来进行肺静脉吻合。

使用Vannas-Tubingen弹簧剪刀切开接受者的肺静脉，尽可能远端横向切割上段和下段静脉，并使用胰岛素注射器用每毫升肝素化盐水0.2毫升一个国际单位冲洗血液。将用冰冷、湿、无菌纱布包裹的供体肺放入胸腔，并将供体的袖带囊肺静脉插入受者的肺静脉，然后用预先定位的 7-0 尼龙缝合线固定吻合口。对于支气管或支气管吻合术，在通过横向切开上段和下节段气道尽可能远方切开受者的支气管之前，在受体的支气管周围放置 7-0 尼龙缝合线。

将供体的带袖口支气管插入接受者的支气管后，用预先定位的 7-0 尼龙缝合线固定吻合口。接下来，如前所述进行肺动脉吻合术。为了允许移植的供体肺的再灌注和通气，取下肺门上的Yasargil钳，然后用6-0尼龙缝合线关闭开胸切口。

根据需要从天然或移植的肺中收集BAL液。计算肺叶干湿重比以测量肺水肿。与供体或受体的自体叶相比，移植叶的湿重与干重比显着增加，表明没有肺水肿。

在我们看来，该程序的两个关键步骤是，一，准确地使用解剖标志来识别第四肋间隙，然后二，选择并适当使用袖带以具有可重复的袖带技术。既可重复又一致的大鼠肺移植模型是缺血再灌注和一般移植的分子研究的基础。