Bu prosedürün genel amacı, in vivo farelerde subaraknoid kanamadan sonra serebral vazospazm izlemektir. Bu, izofluran ile anestezi altında yüksek frekanslı renk kodlu dubleks sonografinin uygulanması ile gerçekleştirilir. Görüntüleme verileri intra ve ekstrakraniyal iç karotis arterlerdeki kan akış hızlarını belirlemek için işlenir.
Hızlandırılmış intrakraniyal kan akışı hızı serebral vazospazmı gösterir. Bu çalışmada, 11 ila 12 haftalık C57BL/6N farelerde intrakraniyal ve ekstrakraniyal arterlerin kan akış hızlarının ölçümlerini yaptık. Fareler, başka bir yerde ayrıntılı olarak açıklanan SAH indüksiyonu veya sham ameliyatına tabi tutuldu.
Ultrasonografi muayene anahtarını ultrason makinesine hazırlamak ve hayvan kimliğine girmek için.Ultrason sisteminin ısıtma plakasını 37 santigrat dereceye ısıtın. Rektal sıcaklık probun kullanıma hazır olduğundan emin olun. Ultrason jelini 37 santigrat dereceye ısıtmak için ılık bir su banyosu kullanın.
Epilasyon kremini, elektrotlar için temas kremini ve göz merhemini hazırlayın. Dönüştürücünün mekanik kola düzgün bir şekilde monte edildiğinden emin olun ve anestezi indüksiyon odasının% 4 izofluran ve% 40 oksijen ile yıkanmasını sağlayın. Fareyi bir dakika boyunca odaya koyarak anesteziye neden olur.
Gözleri merhemle koruyun. Sadece yeterince derin bir anesteziye ulaşıldıktan sonra devam edin. Tüm işlem boyunca anestezi maskesi kullanarak %1,5 izofluran ve %40 oksijen ile anesteziyi koruyun.
İlk adımda transkraniyal yüksek frekanslı dubleks sonografi ile intrakraniyal iç karotid arterlerin kan akış hızları belirlenir. Vücut sıcaklığını 37 santigrat derece korumak için fareyi ultrason sisteminin ısıtma plakasına eğilimli konuma yerleştirin. Her iki tarafa da göz merhemi uygulayın.
İlk sınavdan önce occiput'taki kürkü elektrikli tıraş makinesi ile kısaltın. Daha sonra epilasyon kremi kullanarak kalan tüyleri kimyasal olarak çıkarın. Saç dökülmeye başlayana kadar kremi iki dakika boyunca yaymak ve ovalamak için pamuklu çubuk kullanın.
Ek iki dakika sonra kremi ve saçı bir spatula ile çıkarın ve cildi alkollü bir cilt antiseptiği ile dezenfekte edin. Hayvanın dört ekstremitesini iletken macunla kaplayın ve tahtaya gömülü EKG elektrotlarına bantla sabitleyin. Yağlamayı bir rektal sıcaklık probuna yerleştirin ve gerekirse ek ısıtma lambası kullanarak vücut sıcaklığını izlemek için dikkatlice yerleştirin.
Ultrason sisteminin ekranında fizyolojik parametrelerin, EKG ve solunum sinyalinin doğru görüntülenip görüntülenmey olduğunu kontrol edin. Gerekirse, anestezi seviyesi dakikada 4 ila 500 atım hedef kalp atış hızı elde etmek için ayarlanabilir. Ultrason jeli ile kapla.
Ultrason görüntüleri elde etmek ve mekanik kola monte etmek için doğrusal bir dizi dönüştürücü ve saniyede 200 karenin üzerinde bir kare hızı kullanın. Dönüştürücüsü 30 derece geriye doğru eğilmiş oksiput üzerine yerleştirin. Sağ intrakraniyal iç karotid arteri görselleştirmek ve arterlerin maksimum akışını bulana kadar dönüştürücüyu kontrol ünitesiyle ileri geri hareket ettirmek için B modu ve CW-Doppler modunu kullanın.
Anatomik bilgi toplamak için geleneksel B modunu ve CW-Doppler modunu kullanın ve acquire düğmesine tıklayarak edinimi başlatın. İntrakraniyal damarların akış özellikleri hakkında bilgi kaydetmek için darbe dalgası doppler düğmesine tıklayın, geminin ortasına bir örnek hacim yerleştirin ve üç saniyeden uzun bir sinüs döngüsü elde edin. Sol tarafla aynı şekilde ilerleyin.
Bir sonraki adımda ekstrakraniyal iç karotis arterlerin kan akış hızları yüksek frekanslı dubleks sonografi ile belirlenir. 37 santigrat derecelik bir vücut sıcaklığını korumak için fareyi ultrason sisteminin ısıtma plakasındaki supine konumuna yerleştirin. İlk sınavdan önce boynun ön kısmının kıllarını elektrikli tıraş makinesi ile çıkarın.
Daha sonra daha önce açıklandığı gibi epilasyon kremi kullanarak kalan tüyleri kimyasal olarak çıkarın. Hayvanın dört ekstremitesini iletken macunla kaplayın ve tahtaya gömülü EKG elektrotlarına bantla sabitleyin. Yağlamayı bir rektal sıcaklık probuna yerleştirin ve vücut sıcaklığını izlemek için dikkatlice yerleştirin.
Gerekirse ek ısıtma lambası kullanma. Fizyolojik parametrelerin ekranda doğru görüntülenmesi için tekrar kontrol edin. Boynun önünü 37 santigrat dereceye kadar ısıtılmış ultrason jeli ile kaplayın.
Dönüştürücüsü hayvana paralel yerleştirin ve sağ şahdamarının boyuna görüntülerini elde etmek için pozisyonu ayarlayın. Sağ şahdamarını görselleştirmek için B modu CW-Doppler modunu kullanın. Görüntüde sağ ortak karotis arter, sağ iç şahdamar ve sağ dış şahdamarı yer almalıdır.
Anatomik bilgi toplamak için geleneksel B modunu ve CW-Doppler modunu kullanın ve acquire düğmesine tıklayarak edinimi başlatın. Ekstrakraniyal karotid arterin akış özellikleri hakkında bilgi kaydetmek için nabız dalgası doppler düğmesine tıklayın, numune hacmini ortak şahdamarının ortasına iç karotis arter ve dış karotid arterin ortasına yerleştirin ve üç saniyeden uzun bir sinevizyon döngüsü elde edin. Sol tarafla aynı şekilde ilerleyin.
Anesteziyi sonlandırın ve hayvanı ısıtma plakasından çıkarın ve hipotermiyi önlemek ve tam iyileşmeyi kontrol etmek için bir saat boyunca 36 santigrat dereceye ısıtılmış bir inkübatöre yerleştirilen bir kafese koyun. Bir sonraki adım ultrasonografi verilerini işlemektir. Yüksek frekanslı ultrason verilerinin sonrası işlenmesi için harici iş istasyonunun kullanılması.
B modu, CW-Doppler modu ve PW-Doppler modu görüntülerini ve cine döngülerini Vevo LAB yazılımına dışa aktarın. İhraç edilen ultrason çalışmasını açın. Bir hayvan seçin ve intrakraniyal karotid arterin PW-Doppler cine döngüsünü açın.
Bu protokolde genellikle karşılık gelen akış hızı eğrilerinde yedi ila sekiz kalp atışı kaydedilir. Cine döngüsünü duraklatın ve ölçüm düğmesine tıklayın. Vasküler paketi seçin ve sağ intrakraniyal karotid arterin tepe sistolik basıncını ölçmek için RICA PSV'ye tıklayın.
Şimdi bir hız eğrisinin zirvesinde sola tıklayın ve düz çizgiyi sıfır çizgisine çekin. Sağ fare düğmesiyle bir tıklamayla ölçümü belirleyin. Şimdi uç diyastolik hızını ölçmek için RICA EDV'yi seçin.
Diyastole'nin sonundaki hız eğrisinin minimum döküntüsüne sola tıklayın. Çizgiyi doğrudan sıfır çizgisine çekin ve sağ fare düğmesiyle bir tıklamayla ölçümü belirleyin. Hız süresi integralini ölçmek için RICA VTI'yi seçin.
Hız eğrisinin başında sola tıklayın ve diyastolik platonun sonuna kadar eğriyi fareyle izleyin. Ve sonra ölçümü belirlemek için tekrar sağa tıklayın. Rapor düğmesini kullanarak intraserebral iç karotid arterlerin verilerini dışa aktarın.
Dışarı aktar'a basın ve verileri VSI rapor dosyası olarak kaydedin. Doğru ekstrakraniyal iç karotid arterlerin PSV, EDV ve VTI ölçümlerinde aynı yaklaşımı kullanın ve verileri buna göre dışa aktarın. Sol tarafla aynı şekilde ilerleyin ve LICA PSV, EDV ve VTI kullanın.
Beş farede ve üçü SAH indüklenirken ikisi sham ameliyatı elde edilirken intrakraniyal iç arterin ve ekstrakraniyal iç karotid arterin kan akış hızları ameliyattan bir gün önce ve ameliyattan bir, üç ve yedi gün sonra belirlendi. Ameliyattan önce, ekstra ve intrakraniyal kan akışı hızlarının yanı sıra intrakraniyal kan akışı oranı SAH ve sham hayvanları arasında benzerdi. SAH indüksiyonu sonrası ilk gün intra veya ekstrakraniyal kan akışı hızlarında veya intrakraniyal ve ekstrakraniyal kan akışı arasındaki oranlarda büyük bir değişiklik olmadı.
Üçüncü ve yedinci günlerde iç karotid arterin intrakraniyal kan akışı hızları belirgin bir şekilde arttı ve SAH'dan sonra serebral vazospazmı gösteren SAH hayvanlarından ikisi. Ekstrakraniyal kan akışı hızları neredeyse değişmeden kaldığından, serebral vazospazmı gösteren SAH hayvanlarında intrakraniyal ve ekstrakraniyal kan akışı hızlarının oranları da yedinci günde önemli ölçüde artmıştır. Sonuç olarak, farelerde intrakraniyal kan akışının hızlarının in vivo ölçümlerini yapmak için yüksek frekanslı renk kodlu transkraniyal dubleks sonografi kullanılabilir.
İnsan hastalardaki duruma benzer şekilde intrakraniyal kan akışı hızları, vasospazmı gösteren SAH'dan sonra farelerde hızlanır. Burada gösterilen ultra sonografik yöntem hızlı ve az invazivdir. Murine SAH modellerinde vazospazmin boyuna çalışmalarına izin verir.
