Name: detection of inter-chromosomal stable aberrations by multiple fluorescence in situ hybridization (mfish) and spectral karyotyping (sky) in irradiated mice
Uploaded: 2017-01-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice at JoVE

Bu çalışma Ulusal Havacılık ve Uzay Dairesi aracılığıyla Arkansas Uzay Grant Konsorsiyumu ve Ulusal Uzay Biyomedikal Araştırma Enstitüsü tarafından desteklenen, hibe NNX15AK32A (RP) ve RE03701 (MH-J), ve P20 GM109005 (MH-J) ve US Veterans Administration ( MH-J). Biz yazının hazırlanmasında editoryal yardım için Christopher Fettes, Arkansas Tıbbi Bilimler Üniversitesi Çevre ve İş Sağlığı Bölümü Program Koordinatörü, teşekkür ederim.

Tüm hayvan çalışmaları Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu önerileri ile tam uyum içinde gerçekleştirilmiştir. hayvan protokolü Arkansas Tıbbi Bilimler Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı. temiz hava ve standart kemirgen yiyecek ve suya serbest erişim 15 saatlik döngüler - Bütün hayvanlar 10 ile 20 ± 2 ° C&#39;de standart klimalı hayvan tesis altında tutuldular. Girişte, fareler 1 hafta karantinada tutulan ve sertifikalı kemirgen yemi verilmiştir. 1.Radiation Pozlama ve Metafaz Hücreler Vivo Arrest olarak <ol><li> Açığa bir ışınlama odasında 2 Gy tüm vücut radyasyona fareler un-anestezi. ışınlama sırasında, iyi havalandırılan bir tutma odasında yer fareler serbestçe hareket ve düzgün bir doz almıyorsunuz emin olmak için. </li><li> % 0.05 kolşisin solüsyonu 100 mcL enjekte edilir (ckalsiyum ve magnezyum serbest PBS içinde çözülmüş olchicine toz) karın içinden 1 ml tek kullanımlık şırınga ile eklenmiş 25 G iğne kullanılarak. herhangi bir organ doğrudan enjeksiyon kaçının. </li><li> kemik iliği hücre hasat önce 2 saat için hücre hayvan bırakın. ağrı veya sıkıntı herhangi bir işaret için hayvan gözlemleyin. </li></ol> 2. kemik iliği hücre hasat ve yoğunluk dereceli santrifüj ile kemik iliği Mononükleer Hücreleri İzolasyon <ol><li> CO 2 boğulma fare Euthanize. </li><li> dorsal ve ventral tarafta% 70 etanol püskürtün. </li><li> keskin bir makas ile karın derisi üzerinde 2 cm kesi olun. künt cımbız ile kesi her iki tarafında cilt tutun ve yavaşça karın kasları çekerek açın. </li><li> makasla her iki arka bacaklarını kesti ve hemen% 4 FBS ile önceden soğutulmuş PBS koyun. </li><li> Dikkatle keskin bir jilet ve pamuk gazlı bez bandaj ile arka bacak bağlı tüm kasları temizleyin. </li><li> femur tibia ayırın. Bir traş bıçağı ile her kemiğin her iki ipuçları Trim. </li><li> 3 ml&#39;lik bir şınngaya bağlanmış bir 23 G iğne kullanılarak (% 4 FBS), 3 ml PBS ile kemik iliği muhtevasını temizlemek ve 15 ml santrifüj tüpüne içerik toplamak. tek bir hücre süspansiyonu yapmak için iğne ile hücre süspansiyonu en az 10 kez geçmek. </li><li> Dikkatle hücre süspansiyonu ve lenfosit ayırma ortamı arasındaki arayüzü bozmadan lenfosit ayırma ortamı (3 mL) ve eşit hacimde hücre süspansiyonu kaplar. Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> yeni bir 15 ml santrifüj tüpüne diğer katmanları ve transfer bozmadan dikkatlice buffy coat toplayın. </li></ol> Metafaz Hücre Spread 3. hazırlanması <ol><li> ince beyaz tabakayı içeren bir tüpe 10 ml PBS ilave edin. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Dikkatle süpernatant kaldırmak. Sonra t break upo nazik dokunarak ile pelet hücre ve 10 ml PBS ekleyin. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Hücre pelletini bozmadan süpernatantı pelet kırmak ve önceden ısıtılmış hipotonik 0.075 M potasyum klorür çözeltisi 4 ml. Nazik sabit sallayarak damla hipotonik solüsyon damla ekleyin. </li><li> Bir su banyosu içinde 37 ° C&#39;de 20 dakika boyunca inkübe hücreleri. </li><li> (: Buzlu asetik asit, 3: metanol 1 h / h) hipotonik tedaviden sonra, sabitleyici eşit hacimde (4 mL) ekleyin 15 ml bir tüp içinde ve tersini tüp yavaşça karıştırın. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj ve supernatant atın. </li><li> bir kaç saniye için hafifçe girdap ardından kılavuz çekme ile hücre pelletini parçalamak ve sabit şekilde çalkalanarak damla sabitleyici çözeltisi damla 3 ml. </li><li> Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca inkübe edin ve daha sonra 5 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj. </li><li> Süpernatantı gent ile hücre pelet kırmakle dokunarak ve 3 ml taze fiksatif ekleyin. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj ve supernatant çıkarın. nazik dokunarak hücre pelet kadar Break ve taze 3 ml fiksatif ekleyin. </li><li> Adımı yineleyin 3.12 kez daha fazla. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj ve hücre topağı bozmadan supernatant çıkarın. Ardından 600 uL fiksatif ile 400 ekleyebilir ve pipetleme ile iyice karıştırın. </li><li> 45 ° açıyla eğimli ön temizlenir ve ıslak slaytlar üzerine 30 ul sabit hücrelerin damla ve tamamen bir gecede havada kurumaya slaytlar izin verir. </li></ol> mFISH tarafından 4. Fare Kromozom Boyama <ol><li> kromozom denatürasyonu <ol><li> Oda sıcaklığında 2 dakika için 2X SSC metafaz hücre yayılır içeren slayt yerleştirin. </li><li> % 70 2 dakika her biri,% 80 ve% 100, seri etanol yıkanarak slayt kurutmak. 65 ° C&#39;de 60 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> Ön ısıtma 40 ml denatürasyon çözeltisi (% 70 formamid / 2 x SS° C; 30 dakika boyunca, bir cam kavanoz içinde Coplin 70 ° C (± 2 ° C), pH 7.0). 1.5 dakika - 1 için önceden ısıtılmış denatürasyon çözeltisi slayt inkübe edilerek kromozom denatüre. </li><li> 2 dakikalık denatürasyon işlemini durdurmak için hem de yeniden tavlama ile ilgili denatüre kromozom önlemek için buz soğukluğunda% 70 etanol içinde hemen slayt söndürün. Daha sonra 2 dakika süreyle% 80 etanol ile yıkanarak dihidrat. 2 dakika boyunca% 100 etanol ile etanol yıkama tekrarlayın. Tamamen oda sıcaklığında slayt kurulayın. </li></ol></li><li> Denatürasyon ve Probe Karışımı Hibridizasyon <ol><li> Kısaca, üretici tarafından sağlanan prob karışımı santrifüj, 7 dakika boyunca bir su banyosu içinde 80 ° C (± 2 ° C) inkübe edilerek kap santrifüj tüpü ek 500 mcL prob karışımı 10 ul transfer ve denatüre. </li><li> 10 dakika boyunca 37 ° C&#39;de bir su banyosu içinde prob karışımı ile santrifüj tüpü yerleştirin. </li><li> denatüre chromoso ile slayt üzerine denatüre prob karışımı uygulayınmes. </li><li> Dikkatle 18 mm x 18 mm cam kapak slip ile alanı kapsayacak ve çok yavaşça kaymasına kapak kayma basarak herhangi bir görünür hava kabarcıklarını ortadan kaldırır. Kauçuk çimento ile kapak kayma dört tarafı kapatın ve hibridizasyon için nemli bir oda içinde 37 ° C&#39;de karanlıkta, 16 saat, 12 saat süre ile inkübe edilir. </li></ol></li><li> Mesaj Hibridizasyon Yıkama ve Algılama <ol><li> Dikkatle kauçuk çimento ve kapak kayma çıkarın. </li><li> 5 dakika boyunca 74 ° C (± 2 ° C) önceden ısıtılmış 0.4x SSC yeri slayt. </li><li> 2 dakika boyunca yıkama çözeltisi II (4x SSC /% 0.1 Tween-20) yıkayın kayar. </li><li> DAPI karşıt (1.5 ug / mL) ile anti-solmaya montaj orta 20 mcL ve bir cam kapak ile kaplayın. hafifçe laboratuvar dokusu ile lamel basın hava kabarcıkları ve aşırı montaj çözüm kaldırmak için. oje ile lamel kenarları mühür. </li><li> uygun filtreler ile donatılmış bir floresan mikroskop kullanılarak Görünüm slaytlar. </li></ol></li&gt; </ol> 5. Spektral Karyotipleme Fare Kromozomlar (SKY) <ol><li> Kromozom ve Probe denatürasyonu <ol><li> çalkalamadan, 2 dakika süre ile, oda sıcaklığında 2 x SSC, slayt dengelenmesi. </li><li> Oda sıcaklığında 2 dakika her biri için, bir etanol seri slayt (% 70,% 80 ve% 100 etanol) kurutmak. Tamamen etanolü çıkarmak için slayt hava-kurutun. </li><li> Sıcak 40 ml denatürasyon çözeltisi (% 70 formamid / 2 x SSC, pH 7.0), 30 dakika için bir cam Coplin kavanoz. </li><li> 1 ila 1.5 dakika süreyle önceden ısıtılmış denatürasyon çözeltisi slayt inkübe edin. </li><li> 2 dk denatürasyon işlemini durdurmak için hem de yeniden tavlama gelen denatüre kromozom önlemek için hemen buz gibi soğuk% 70 etanol içine slayt batırmayın. </li><li> Oda sıcaklığında 2 dakika boyunca% 100 etanol içinde, daha sonra 2 dakika süreyle% 80 etanol içine yerleştirerek ve slayt kurutmak. </li><li> 80 ° C (± 2 ° C) ayarlanmış bir su banyosu içinde sky prob (üretici tarafından sağlanan flakon # 1) denatüre7 dakika boyunca, ve sonra hemen, 10 dakika boyunca 37 ° C&#39;ye kadar, farklı bir su banyosuna yerleştirin. </li></ol></li><li> Probe Melezleme <ol><li> denatüre kromozomlar üzerine denatüre SKY probu 10 mcL ekleyin. </li><li> hava kabarcıkları lamel altında sıkışıp böylece dikkatle SKY prob üzerine 18 mm x 18 mm cam lamel yerleştirin. </li><li> lastik çimento ile lamel kenarları mühür. </li><li> nemli bir ışık geçirmeyen bölme slayt yerleştirin ve 36 saat, 24 saat boyunca 37 ° C&#39;de karanlıkta inkübe edilir. </li></ol></li><li> Sonrası hibridizasyon yıkama ve floresans saptama <ol><li> lamel bozmadan çok dikkatli kauçuk çimento çıkarın. </li><li> sabit şekilde çalkalanarak 5 dakika boyunca 72 ° C (± 2 ° C) önceden ısıtılmış, hızlı yıkama çözeltisi (0.4x SSC) içinde slayt yerleştirin. Yıkama çözeltisi III (4x SSC /% 0.1 Tween 20) içine slayt daldırın ve çalkalanarak 1 dakika inkübe edilir. </li><li> İsteğe bağlı: engelleme reaktif 80 uL ekleyinmelezleşme alanı üzerine (üretici tarafından sağlanan flakon # 2), 24 mm x 60 mm plastik lamel ve nemlendirilmiş odacıkta 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de karanlıkta inkübe edilir. </li><li> Yavaşça plastik lamel kaldırmak ve 5 dakika boyunca önceden ısıtılmış (45 ºC) yıkama solüsyonu III slayt yıkayın. </li><li> 80 uL Cy5 boyama reaktif (üretici tarafından sağlanan flakon # 3) uygulanır, 24 mm x 60 mm plastik lamel ve nemlendirilmiş bir odada 40 dakika süreyle karanlıkta 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> içeren bir cam Coplin kavanoza slayt Dip önceden ısıtılmış (45 ° C) yıkama çözeltisi III (4x SSC /% 0.1 Tween 20) ile çalkalanarak 2 dakika için bir su banyosu içinde 45 ° C&#39;de inkübe edin. Bu yıkama adımı 3 kez tekrarlayın. </li><li> 80 uL Cy5.5 boyanması reaktifi (üretici tarafından sağlanan flakon # 4) uygulanır, 24 mm x 60 mm plastik lamel ve nemlendirilmiş bir odada 40 dakika süreyle karanlıkta 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> (Önceden ısıtılmış ile slayt 3 kere yıkayın45 ºC) yıkama solüsyonu III. </li><li> Fazla sıvıyı boşaltmak için bir kağıt havlu karşı eğik pozisyonda slayt tutun. 20 uL, anti-solmaya DAPI ayıracı (üretici tarafından sağlanan flakon # 5) ekleyin ve dikkatlice hava kabarcıklarını tanıtan olmadan 24 mm x 60 mm cam lamel yerleştirin. oje ile lamel kenarları mühür ve SKY görüntüleri yakalamak için donatılmış bir Epifloresans mikroskop ile gözlemlemek. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Kodama, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+chromosome+aberrations+in+atomic+bomb+survivors:+results+from+25+years+of+investigation.">Stable chromosome aberrations in atomic bomb survivors: results from 25 years of investigation.</a> Radiat Res. 156, 337-346 (2001).</li><li>Lucas, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytogenetic+signature+for+ionizing+radiation.">Cytogenetic signature for ionizing radiation.</a> Int J Radiat Biol. 73, 15-20 (1998).</li><li>Zaccaria, A., Barbieri, E., Mantovani, W., Tura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+radiation-induced+aberrations+in+patients+with+Hodgkin's+disease.+Possible+correlation+with+second+malignancy?.">Chromosome radiation-induced aberrations in patients with Hodgkin's disease. Possible correlation with second malignancy?.</a> Boll. Ist. Sieroter. Milan. 57, 76-83 (1978).</li><li>Fisher, N. L., Starr, E. D., Greene, T., Hoehn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+and+limitations+of+chromosome+banding+in+pre-+and+postnatal+service+cytogenetics.">Utility and limitations of chromosome banding in pre- and postnatal service cytogenetics.</a> Am J Med Genet. 5, 285-294 (1980).</li><li>Hande, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+chromosome+aberrations+persist+in+individuals+many+years+after+occupational+exposure+to+densely+ionizing+radiation:+an+mFISH+study.">Complex chromosome aberrations persist in individuals many years after occupational exposure to densely ionizing radiation: an mFISH study.</a> Genes Chromosomes. Cancer. 44, 1-9 (2005).</li><li>Gall, J. G., Pardue, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+and+detection+of+RNA-DNA+hybrid+molecules+in+cytological+preparations.">Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 63, 378-383 (1969).</li><li>Bauman, J. G., Wiegant, J., Borst, P., van, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+fluorescence+microscopical+localization+of+specific+DNA+sequences+by+in+situ+hybridization+of+fluorochromelabelled+RNA.">A new method for fluorescence microscopical localization of specific DNA sequences by in situ hybridization of fluorochromelabelled RNA.</a> Exp Cell Res. 128, 485-490 (1980).</li><li>Hopman, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-color+detection+of+two+target+DNAs+by+non-radioactive+in+situ+hybridization.">Bi-color detection of two target DNAs by non-radioactive in situ hybridization.</a> Histochemistry. 85, 1-4 (1986).</li><li>Nederlof, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-color+fluorescence+in+situ+hybridization+for+the+simultaneous+detection+of+multiple+nucleic+acid+sequences.">Three-color fluorescence in situ hybridization for the simultaneous detection of multiple nucleic acid sequences.</a> Cytometry. 10, 20-27 (1989).</li><li>Nederlof, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+fluorescence+in+situ+hybridization.">Multiple fluorescence in situ hybridization.</a> Cytometry. 11, 126-131 (1990).</li><li>Szeles, A., Joussineau, S., Lewensohn, R., Lagercrantz, S., Larsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+spectral+karyotyping+(SKY)+in+biodosimetry+for+the+triage+situation+following+gamma+irradiation.">Evaluation of spectral karyotyping (SKY) in biodosimetry for the triage situation following gamma irradiation.</a> Int J Radiat Biol. 82, 87-96 (2006).</li><li>Camparoto, M. L., Ramalho, A. T., Natarajan, A. T., Curado, M. P., Sakamoto-Hojo, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translocation+analysis+by+the+FISH-painting+method+for+retrospective+dose+reconstruction+in+individuals+exposed+to+ionizing+radiation+10+years+after+exposure.">Translocation analysis by the FISH-painting method for retrospective dose reconstruction in individuals exposed to ionizing radiation 10 years after exposure.</a> Mutat. Res. 530, 1-7 (2003).</li><li>Edwards, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critique+of+'Collaborative+exercise+on+the+use+of+FISH+chromosome+painting+for+retrospective+biodosimetry+of+Mayak+nuclear-industrial+personnel.">A critique of 'Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel.</a> Int J Radiat Biol. 78, 867-871 (2002).</li><li>Bauchinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaborative+exercise+on+the+use+of+FISH+chromosome+painting+for+retrospective+biodosimetry+of+Mayak+nuclear-industrial+personnel.">Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel.</a> Int J Radiat Biol. 77, 259-267 (2001).</li><li>Hieber, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+rearrangements+in+post-Chernobyl+papillary+thyroid+carcinomas:+evaluation+by+spectral+karyotyping+and+automated+interphase+FISH.">Chromosomal rearrangements in post-Chernobyl papillary thyroid carcinomas: evaluation by spectral karyotyping and automated interphase FISH.</a> J Biomed. Biotechnol. 2011, 693691 (2011).</li><li>Cohen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=detection+of+chromosome+rearrangements+in+two+cases+of+tMDS+with+a+complex+karyotype.">detection of chromosome rearrangements in two cases of tMDS with a complex karyotype.</a> Cancer Genet Cytogenet. 138, 128-132 (2002).</li><li>Pathak, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Vitamin+E+Analog+Gamma-Tocotrienol+(GT3)+Suppresses+Radiation-Induced+Cytogenetic+Damage.">The Vitamin E Analog Gamma-Tocotrienol (GT3) Suppresses Radiation-Induced Cytogenetic Damage.</a> Pharm Res. , (2016).</li><li>Spurbeck, J. L., Zinsmeister, A. R., Meyer, K. J., Jalal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+chromosome+spreading.">Dynamics of chromosome spreading.</a> Am J Med Genet. 61, 387-393 (1996).</li><li>Deng, W., Tsao, S. W., Lucas, J. N., Leung, C. S., Cheung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+improving+metaphase+chromosome+spreading.">A new method for improving metaphase chromosome spreading.</a> Cytometry A. 51, 46-51 (2003).</li><li>Hande, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Past+exposure+to+densely+ionizing+radiation+leaves+a+unique+permanent+signature+in+the+genome.">Past exposure to densely ionizing radiation leaves a unique permanent signature in the genome.</a> Am J Hum Genet. 72, 1162-1170 (2003).</li><li>Tug, E., Kayhan, G., Kan, D., Guntekin, S., Ergun, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evaluation+of+long-term+effects+of+ionizing+radiation+through+measurement+of+current+sister+chromatid+exchange+(SCE)+rates+in+radiology+technologists,+compared+with+previous+SCE+values.">The evaluation of long-term effects of ionizing radiation through measurement of current sister chromatid exchange (SCE) rates in radiology technologists, compared with previous SCE values.</a> Mutat. Res. 757, 28-30 (2013).</li><li>Kanda, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-fluorescent+chromosome+painting+using+the+peroxidase/diaminobenzidine+(DAB)+reaction.">Non-fluorescent chromosome painting using the peroxidase/diaminobenzidine (DAB) reaction.</a> Int J Radiat Biol. 73, 529-533 (1998).</li><li>Kakazu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+spectral+colour+banding+in+cytogenetic+analysis.">Development of spectral colour banding in cytogenetic analysis.</a> Lancet. 357, 529-530 (2001).</li><li>Rithidech, K. N., Honikel, L., Whorton, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mFISH+analysis+of+chromosomal+damage+in+bone+marrow+cells+collected+from+CBA/CaJ+mice+following+whole+body+exposure+to+heavy+ions+(56Fe+ions).">mFISH analysis of chromosomal damage in bone marrow cells collected from CBA/CaJ mice following whole body exposure to heavy ions (56Fe ions).</a> Radiat Environ Biophys. 46, 137-145 (2007).</li><li>Abrahams, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metaphase+FISHing+of+transgenic+mice+recommended:+FISH+and+SKY+define+BAC-mediated+balanced+translocation.">Metaphase FISHing of transgenic mice recommended: FISH and SKY define BAC-mediated balanced translocation.</a> Genesis. 36, 134-141 (2003).</li><li>Savage, J. R., Simpson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+scoring+of+FISH-&amp;#34;painted&amp;#34;+chromosome-type+exchange+aberrations.">On the scoring of FISH-&amp;#34;painted&amp;#34; chromosome-type exchange aberrations.</a> Mutat. Res. 307, 345-353 (1994).</li><li>Savage, J. R., Simpson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+"painting"+patterns+resulting+from+complex+exchanges.">FISH "painting" patterns resulting from complex exchanges.</a> Mutat. Res. 312, 51-60 (1994).</li><li>Tucker, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PAINT:+a+proposed+nomenclature+for+structural+aberrations+detected+by+whole+chromosome+painting.">PAINT: a proposed nomenclature for structural aberrations detected by whole chromosome painting.</a> Mutat. Res. 347, 21-24 (1995).</li><li>Knehr, S., Zitzelsberger, H., Bauchinger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH-based+analysis+of+radiation-induced+chromosomal+aberrations+using+different+nomenclature+systems.">FISH-based analysis of radiation-induced chromosomal aberrations using different nomenclature systems.</a> Int J Radiat Biol. 73, 135-141 (1998).</li><li>Lucas, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+translocation+frequency+analysis+in+humans+decades+after+exposure+to+ionizing+radiation.">Rapid translocation frequency analysis in humans decades after exposure to ionizing radiation.</a> Int J Radiat Biol. 62, 53-63 (1992).</li><li>Braselmann, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKY+and+FISH+analysis+of+radiation-induced+chromosome+aberrations:+a+comparison+of+whole+and+partial+genome+analysis.">SKY and FISH analysis of radiation-induced chromosome aberrations: a comparison of whole and partial genome analysis.</a> Mutat. Res. 578, 124-133 (2005).</li><li>Sokolova, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+a+multitarget,+multicolor+fluorescence+in+situ+hybridization+assay+for+the+detection+of+urothelial+carcinoma+in+urine.">The development of a multitarget, multicolor fluorescence in situ hybridization assay for the detection of urothelial carcinoma in urine.</a> J Mol Diagn. 2, 116-123 (2000).</li><li>Lindholm, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodosimetry+after+accidental+radiation+exposure+by+conventional+chromosome+analysis+and+FISH.">Biodosimetry after accidental radiation exposure by conventional chromosome analysis and FISH.</a> Int J Radiat Biol. 70, 647-656 (1996).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Birkaç kritik adımlar mFISH ve SKY başarısını belirler. İlk ve en önemli adım kemik iliği mononükleer hücrelerin in vivo mitotik tutuklama kolşisin tedavisi optimize etmektir. kolşisin konsantrasyonu ve tedavi süresi ayrı ayrı ya da konser etkili kromozom boyama mitotik indeksi yanı sıra kromozom yoğunlaşma iki önemli önkoşul belirler. Yüksek Kolşisin konsantrasyonu veya daha uzun tedavi süresi uygun denatürasyon ve hibridizasyon için uyumsuz son derece yoğun kromozom yol açar. Ayrıca, yoğunlaştırılmış kromozomlu yayılan bir metafaz hücrede kompleks düzenlenmeleri doğru tanımlanması elde etmek kolay bir iş değildir. 22 ve 26 g arasında bir vücut ağırlığına sahip bir farede, 2 saat boyunca 100 uL% 0.05 kolşisin intraperitoneal uygulanması metafaz hücrenin yeterli sayıda orta yoğunlaştırılmış kromozomlar ile yayılır üretir. İkinci kritik adım hipotonik bir tedavi yöntemidir.birim, tedavi süresi ve hipotonik bir solüsyon etkisi kromozom morfolojileri sıcaklığı ve cam slayt üzerine kromozom yayılmasını. kısa bir süre için ya da bir alt-optimal sıcaklıkta bir hipotonik tedavi çakışan kromozomlar ile yayıldı metafaz hücrede sonuçlanan yayılmasını uygun kromozom önleyebilir. Kromozom örtüşen in situ hibridizasyon işlemi, floresan sinyallerin özgüllük ve düzenlenmeleri uygun tanımlanmasında aşağı engeller. Üçüncüsü, post-hipotonik tespit hücre tutam oluşumunu önlemek için önemli bir adımdır. sabitleştirici yumuşak sabit, tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için çalkalanarak bir santrifüj tüpüne tarafında aşağı yavaş yavaş eklenmesi gerekmiştir. Aksi takdirde, metafaz hücre yayılır yığınlarda tuzağa olacak ve kromozom tehlikeye olacak yayılıyor. Bununla birlikte, aynı zamanda yayılan kromozom t, hücre tipi, sıcaklık ve bağıl nem bağlıdırcam slaytlar üzerine hücre süspansiyonu bırakarak ime. Spurbeck tarafından bir önceki çalışmada bildirilen lenfositler için,% 60 bağıl nem ve yüksek metafaz alanında 18 bir 20 ° C sıcaklık sonucu. Buna ek olarak, kurutma süresi de optimum kromozom yaymak için kritik bir adımdır. Metafaz hücre kırık metafaz çok yavaş kuruyan sonuçları 18 kromozom ise kuru çok hızlı, çok örtüşen kromozomlu sıkı yayılır üretmek yayılır. Bununla birlikte, Deng, esas olarak yayılan kromozom kültürlenmiş hücrelerde 19 çeşitli nispi neme bağlı olduğunu göstermiştir. Dördüncü önemli adım kromozom denatürasyon süresini optimize etmektir. Daha uzun ve daha kısa denatürasyon süresi olumsuz prob hibridizasyon etkiler. kısa denatürasyon kromozomlarına prob etkileşimi engellemektedir süre daha denatürasyon, &quot;kabarık&quot; kromozom neden olur. Kromozom &quot;Şişkinlik&quot; azaltmak için başka bir yol, gece boyunca oda sıcaklığında yaşlanmaya slaytlara yapılmazön denatürasyon adımı. Kromozom boyama için kullanılmayan Slaytlar hemen -20 ° C&#39;de bir kurutucuda süresiz olarak saklanabilir. Kromozom denatürasyon süresi slayt yaş, metafaz hücre yayılır etrafında sitoplazma miktarı ve hücreler slaytlar üzerine bırakılan hangi nem ile standardize edilmesi gerekmektedir. Probe denatürasyon ve hibridizasyon de başarılı kromozom boyama için önemlidir. Bu floresan sinyal sinyal yoğunluğu kaybetmek değil bu yüzden parlak ışığa problar doğrudan maruz kaçınılmalıdır. MFISH ve SKY arası kromozomal kararlı sapmaları tespit etmek için güçlü teknikler olduğunu iyi bilinmektedir. Herhangi düzenlenmeleri yanı sıra kayıp veya boyalı kromozom kazanç kolayca bu iki yöntem ile tespit edilebilir. Bununla birlikte, içi kol arası kol kromozom değişimlerinin tespiti, bu teknikler ile mümkün değildir. içi kol ve inter-kol kromozomal değişim tanımlanması artık mümkün beca haline gelmiştirSırasıyla, kromozom kol özgü renkli FISH probları ve mBAND FISH probları geliştirilmesi kullanımı. Eski nükleer işçilere bir önceki çalışma mBAND analiz radyasyon hasarı 20 benzersiz imzaları belirlemek için güçlü bir araç olduğunu göstermiştir. Ayrıca, kardeş kromatid değişiminin tespiti, radyasyon hasarı 21 karakteristik bir özelliği, bu teknikler ile mümkün değildir. Buna ek olarak, mFISH ve SKY hem translokasyon olarak disentrik kromozomun hatalı puanlama neden olabilir kromozomların sentromer bölgesini, boya yeteneği sınırlıdır. teknikler translokasyon tesisinin kesme lokalizasyonunu belirlemek için uygun değildir. Buna ek olarak, floresan sinyalleri sürekli korunamaz, sinyal yoğunluğu zamanla azalır, ve flüoresan kromozom boya otomatik bir sistem ile analiz için uygun değildir. Bununla birlikte, flüoresan sinyal yoğunluğu kaydırılabilir depolayarak daha uzun bir süre muhafaza edilebilirDondurucuda es. Kromozom boyama İki geliştirilmiş yöntemler mFISH ve SKY sınırlamaları aşmak için geliştirilmiştir: sırasıyla floresan olmayan kromozom boyama 22 ve spektral renk (TARAMA) 23 bantlama. BALIK resim üzerinde peroksidaz / diaminobenzidin (DAB) ile floresan olmayan kromozom boyama avantajları doğru sentromerik bölgenin belirlenmesi, parlak alan mikroskobu ile kromozomal düzenlenmesi tanımlanmasını ve bu kalıcı korunur olmayan floresan sinyal ve görüntü analizi yapabilir dahil otomatikleştirilebilir. TARAMA Probes, belirli bir kromozom şerit özel genomik DNA dizileri hazırlanır ve böylece, doğru kromozom bant kaynağını belirlemek çünkü, diğer yandan, TARAMA gökyüzünde avantajlıdır. TARAMA da içi kromozomal değişim belirlenmesini kolaylaştırır. gelişmiş tekniklerin yararları göz önüne alındığında, bu rutin kullanım i düşünülmelidirn klinik sitogenetik testler. Bununla birlikte, her bir kromozom çiftinin şerit özel genomik DNA dizisinden sondaların hazırlanması, teknik açıdan zor olan ve moleküler sitogenetik kullanımını sınırlar. tedavi grupları arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlı olup olmadığını belirleme moleküler sitogenetik bir başka önemli yönüdür. Böyle metafaz hücre sayısı gibi Puanlama kriterleri, tedavi grubu, analiz sırasında yayılan metafaz hücre başına kromozom sayısı başına kullanılan hayvan sayısı, isimlendirme vb kromozom boyama sonra gözlenen sapmaları sınıflandırmak istatistiksel belirsizliği belirlenmesinde kritik bir rol oynamak için kullanılan, sayılır yayılır tedavi grupları arasında. Çeşitli laboratuvarlar özel puanlama kriterleri, hücre, en az 3-5 farelerde 40 iyi ayrılmış kromozomlar ile yayılır 100 metafaz 300 ve 20 gol olmasına rağmen genel olarak mFISH ve SKY anal istatistiksel anlamlılık belirlemek için tavsiye edilirSalman kararı, 24, 25. Ayrıca, boyalı kromozomlardaki sapmaları sınıflandırmak için kullanılan terminoloji seçimi istatistiksel belirsizliği değerlendirmek için önemli bir parametredir. Bütün kromozom boyama sondaları tarafından tespit edilen anormallikleri tanımlamak için kullanılıyor iki popüler isimlendirme sistemi vardır: (1) S &amp; S Tucker ve ark Savage ve Simpson 26, 27 ve (2) BOYA terminoloji ile sınıflandırma yöntemi. 28. Her sistem Yapısal kromozomal anormalliklerin sınıflandırılmasında farklı önkoşullar dayanır ve kendine özgü avantajları ve dezavantajları vardır. BOYA anormal boyama desenleri bir açıklama sağlarken S &amp; S sistemi, sapma kökenli mekanik yorumlanması için öncelikle uygundur. Knehr ve arkadaşları tarafından çalışmalar. BALIK boyalı kromozomlarda radyasyona bağlı kromozomal anomaliler üzerinde BOYA yöntemi, S &amp; S sistemi gibi, aynı zamanda bazı modifikasyonların ile sapma kaynağını belirlemek için kullanılabileceğini göstermektedirve puanlama kriterleri üzerinde pratik uygulama 29 için en yararlı olacaktır. Hem mFISH ve SKY yöntemleri kendi sınırlamaları vardır. Örneğin, mFISH ancak, sapmaları frekansını ölçmek için tüm kromozomlar ekran etmez küçük eğitimle hızlı puanlama izin verir ve çalışmada kullanılan boya kromozom sayısına bağlı olarak, sadece kısmi sapmaları frekansı göstermektedir. Ancak, bütün kromozom boyama tarafından gözlemlenen toplam değişim bir kısmını aslında Lucas ve ark öne formül ile tahmin edilebilir. 30 ve daha fazla BRASELMANN ve arkadaşları tarafından modifiye. 31. Bu matematiksel formül boyalı kromozomlar arasında ve boyalı ve zıt kromozomlar arasındaki değişimi dikkate alır. Örneğin, F p boyalı kromozom kapsadığı genomun fraksiyonel toplamını temsil izin 1 (F 1), 2 (F2) ve 3 (F 3) whe1 = 0,0696, 2 F = 0,0649 ve F F 3 = 0.0570 yeniden değerleri dişi farelerde tek tek kromozom genomik içeriğini temsil etmektedir. (- F p 1) = 0.808 Bu nedenle, f (p = f 1 + f 2 + f 3) = 0.192 ve zıt kesir olur. Boyalı ve zıt kromozom (F P) içeren değişim frekansı kolayca binom genişleme çapraz ürün (p + q) hesaplanabilir 2 p = 2 + 2PQ + q 2, s = F p ve q = (1 - f p). Böylece, F P = 2PQ = 2f p (1 - f p) = 0.310, anlamı kromozomal değişim% 31 fare kromozomu-1, -2 boyadıktan sonra gözlemlenebilir ve -3. Bu nedenle, 1 / 0.31 = 3.23 hücre, bir geniş bantlı metafaz hücrelerinin ya da bir tüm genom eşdeğer eşit atılır gerekir. Ayrıca, mFISH ve sky hem Belir yeteneği sınırlıdırically sapma oluşumunda rol ve aynı zamanda küçük duplications, inversiyon ve silme algılamak için hangi genlerin ve kesmenoktaları tespit. mFISH ve SKY analizi uygulaması, temel araştırma ile sınırlı değildir. Her ikisi de düzenli olarak klinik çalışmalarda kullanılmaktadır. Bu teknikler aynı zamanda doğum öncesi ve sonrası tanı, risk değerlendirmesi ve kanser çeşitli belirlenmesine uygulanmıştır. Ayrıca, her iki Teknikler kromozom boya kullanılabilir. Sokolova, ilk kez 32 interfaz kromozom boya mFISH kullanılır. Bu teknikler aynı zamanda radyasyon 11, 33 iyonlaştırıcı yanlışlıkla ya da kasıtlı maruz kaldıktan sonra insanlarda sonrası ışınlama dozu tahmini ve risk değerlendirmesi için kullanılmaktadır. Bu nedenle, mFISH veya SKY kısmi veya tam genom analizi, sırasıyla çeşitli çalışmalar için arası kromozomal kararlı sapmaları tespit etmek için yararlı araçlardır.

The two most reliable methods of identifying radiation-induced inter-chromosomal stable aberrations are multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH), which allows the painting of two or more chromosomes simultaneously, and spectral karyotyping (SKY), which imparts a distinct color to each homologous chromosome pair in the genome. Unlike unstable aberrations, stable aberrations are persistent in nature and may be propagated for several generations in irradiated populations1, and are regarded as critical molecular "signatures" of radiation-induced cytogenetic lesions2. Studies by various groups have shown that stable aberrations are associated with the pathogenesis and development of a number of diseases, including cancer3. Before the era of chromosome painting (also referred as molecular cytogenetics), the conventional G-banding technique was the only method for detecting stable chromosomal aberrations. However, chromosome banding is a challenge to cytogeneticists because the resolution is limited, reproducibility is uncertain, it is a labor-intensive procedure, and it requires highly skilled and experienced cytogeneticists for reliable data interpretation4. Moreover, the classic banding technique does not allow detection of complex chromosomal rearrangements, which involve the interaction of three or more breaks distributed among two or more chromosomes, a common outcome of radiation damage. Complex aberrations may persist in individuals many years after radiation exposure, making them useful for retrospective biodosimetry5. Therefore, an alternate approach was required to overcome the limitations of conventional banding techniques to detect stable chromosomal rearrangements. 
In the late 1960s, the pioneering work of Gall and Pardue (1969) on molecular hybridization using nucleic acid probes labeled with radioactive material commenced a new era in the field of cytogenetics, which allowed detection of a specific DNA sequence on chromosomes6. However, the use of radioactive probes for molecular hybridization had several drawbacks: radioactive probes are relatively unstable, probe activity depends on radioactive decay of the isotope used, hybridization takes a longer time, the resolution is limited, the probes are relatively costly, and the radioactive materials are a health hazardous. Thus, it became necessary to develop and design non-radioactive probes. The introduction of fluorescent tagged nucleic acid probes in the 1980s and 1990s overcame the limitations of radioactive probes and greatly enhanced the safety, sensitivity, and specificity of the hybridization technique7-10. Fluorescent probes give rise to extremely bright signals when observed under fluorescence microscopes equipped with the appropriate excitation and emission filters. Any loss, gain, or rearrangement of fluorescent labeled chromosome/s or a part of the chromosome is easily identifiable with this FISH technique.
Analysis of chromosomal aberrations by FISH painting has led to marked progress in cytogenetic research over the years. Designing fluorescent labeled probes for specific applications ranging from locus-specific probes to whole-chromosome painting probes has advanced the field significantly; this has also facilitated the detection of submicroscopic ("cryptic") rearrangement, which was not possible by conventional chromosome banding. Chromosome painting by mFISH and SKY have proven to be valuable tools for the identification of simple and complex inter-chromosomal rearrangements. The basic principles for both techniques are similar, but the method of detection and discrimination of fluorescent signal after in situ hybridization and the process of image acquisition are different. In mFISH, separate images of each of the four fluorochromes are captured by using narrow bandpass microscope filters; dedicated software is then used to combine the images. While in SKY, image acquirement is based on a combination of epifluorescence microscopy, charge-coupled device imaging, and Fourier spectroscopy, which allows the measurement of the entire emission spectrum with a single exposure at all image points. In both mFISH and SKY, monochrome images are captured independently, then merged, and finally, unique pseudo-colors are assigned to the chromosomes in monochromatic images based on the specific dye attached to each fluorochrome probe.
The contribution of mFISH and SKY analysis in the radiation biology field is remarkable, particularly for retrospective dose estimation of human exposure to IR (radiation biodosimetry)11-14, radiation carcinogenesis risk assessment15, as well as detection and risk estimation of radiotherapy-related secondary cancer16. A recent study on mice has shown that a FISH-based chromosome painting technique is also an important tool for evaluating the efficacy of radiation countermeasure17. In the present study, the effect of total body radiation exposure on the induction of stable chromosomal aberrations in the bone marrow cells of mice has been demonstrated using mFISH and SKY techniques.

<table><tbody><tr><td>Formamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221198-100ML</td><td></td></tr><tr><td>SSC Buffer 20&amp;times; Concentrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6639-1L</td><td></td></tr><tr><td>SKY Laboratory Reagent for Mouse</td><td>Applied Spectral Imaging</td><td>FPRPR0030/M40</td><td></td></tr><tr><td>CAD - Concentrated Antibody Detection Kit</td><td>Applied Spectral Imaging</td><td>FPRPR0033</td><td></td></tr><tr><td>Single Paints Customized - 3 Colors; Mouse chromosome 1: Red, Mouse chromosome 2: Green, Mouse chromosome 3: Aqua</td><td>Applied Spectral Imaging</td><td>FPRPR0182/10</td><td></td></tr><tr><td>Glass coverslips</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545B</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP337-100</td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric acid, 37%, Acros Organics</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC45055-0025&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Glass Staining Dishes&amp;nbsp; with Screw Cap</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-816</td><td></td></tr><tr><td>KaryoMAX Potassium Chloride Solution&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>10575-090</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Colcemid powder</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-464-757&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque-1083&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10831</td><td></td></tr><tr><td>Shepherd Mark I, model 25&lt;sup&gt; 137&lt;/sup&gt;Cs irradiator</td><td>J. L. Shepherd &amp;amp; Associates</td><td>Model 484B</td><td></td></tr><tr><td>Syringe 1 mL</td><td>BD Biosciences</td><td>647911</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl Alcohol, 200 Proof</td><td>Fisher Scientific</td><td>MEX02761</td><td></td></tr><tr><td>PBS, (1x PBS Liq.), w/o Calcium and Magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN1860454</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-437-010</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A454SK-4</td><td></td></tr><tr><td>Glacial acetic acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC295320010</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Microscope</td><td>Zeiss</td><td>AXIO Imager.Z2</td><td></td></tr></tbody></table>

detection of inter-chromosomal stable aberrations by multiple fluorescence in situ hybridization (mfish) and spectral karyotyping (sky) in irradiated mice

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially compromised, can easily be identified by conventional chromosome staining techniques. However, detection of stable aberrations, which involve exchange or translocation of genetic materials without considerable modification in the chromosome morphology, requires sophisticated chromosome painting techniques that rely on in situ hybridization of fluorescently labeled DNA probes, a chromosome painting technique popularly known as fluorescence in situ hybridization (FISH). FISH probes can be specific for whole chromosome/s or precise sub-region on chromosome/s. The method not only allows visualization of stable aberrations, but it can also allow detection of the chromosome/s or specific DNA sequence/s involved in a particular aberration formation. A variety of chromosome painting techniques are available in cytogenetics; here two highly sensitive methods, multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH) and spectral karyotyping (SKY), are discussed to identify inter-chromosomal stable aberrations that form in the bone marrow cells of mice after exposure to total body irradiation. Although both techniques rely on fluorescent labeled DNA probes, the method of detection and the process of image acquisition of the fluorescent signals are different. These two techniques have been used in various research areas, such as radiation biology, cancer cytogenetics, retrospective radiation biodosimetry, clinical cytogenetics, evolutionary cytogenetics, and comparative cytogenetics.

Total vücut ışınlaması ışınlanmış farelerde kemik iliği hücrelerinde çok sayıda kromozom sapmaları neden olur. Mevcut protokolü radyasyona maruz kaldıktan sonra, kemik iliği hücreleri, in vivo mitotic durmanın için optimize edilmiştir, yoğunluk gradyanlı santrifüj metafaz hücre mamullerin hazırlanmasında, ve daha sonra ışınlanmış farelerde, kemik iliği tek çekirdekli hücreleri tecrit arka ayakları arasında kemik iliği hücrelerinin hasat mFISH ve SKY teknikleri ile radyasyona bağlı istikrarlı kromozomal anormalliklerin tespiti. Kromozom bu teknikler algılamak ve çeşitli patofizyolojik durumların riskini değerlendirmek için kullanılabilir kullanarak boyama. Şekil 1 temsilci metafaz hücresi normal ve anormal fare kromozom çiftleri-1, -2, -3 ve yayılır gösterir. Şekil 2 normal ve anormal fare metafaz kromozom spektral karyotiplemesi gösterir.Bu sonuçlar, temel olarak iyonize radyasyon çeşitli hücre tiplerine kendini yenileme ve farklılaşması için sorumlu olan kök ve projenitör hücreleri oluşur çoğalan fare kemik iliği hücreleri, arası kromozomal stabil sapmaları indüklediğini göstermektedir. kök ve progenitör hücrelerde sitogenetik değişiklikler kanser olmak üzere çeşitli klinik hastalıkları ile ilişkilendirmek gösterilmiştir, ve hastalığın şiddetine ve genel sağkalım için en güçlü belirleyiciler olduğu kabul edilir. Nedenle, radyasyona bağlı stabil arası kromozomal anormallikler iyonlaştırıcı kanser gelişme riski neden olabileceğini anlaması mantıklı. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55162/55162fig1.jpg" /> Şekil 1: mFISH ile Saptanan gibi bir Işınlanmış Mouse Kemik İliği Hücrelerinin Radyasyonun etkisi. A ve B ch normal çiftleri ile bir fare metafaz hücresi yayılmasını gösterirromosome-1 (kırmızı), kromozom-2 (yeşil) ve kromozom-3 ​​(aqua). Diğer tüm kromozomlar DAPI (mavi) ile zıt olan. Cı diğer bir kısmı, bir asentrik fragmanı oluşmuşken kromozom 1, kromozom-1&#39;in bir parçası olmayan bir boya (DAPI) kromozomda entegre edilmiş kapsayan stabil sapmaları göstermektedir. D kromozom 2&#39;nin bir parçasının bir parçası olmayan bir boya kromozomda entegre edilmiş olduğunu gösterir. E kromozom-3 içeren kararlı sapmayı temsil etmektedir. F üç boyalı kromozomu içeren istikrarlı bir sapmayı göstermektedir. Mola noktaları ve renk kavşak oklarla gösterilir. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55162/55162fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55162/55162fig2.jpg" /> Şekil 2: Kemik Marr Radyasyonun EtkisiSKY ile Saptanan olarak Işınlanmış Mouse akış hücreleri. üst panel C57BL / 6 dişi fare normal bir spektral karyotiplemesi (SKY) gösterir. orta panel kromozomu-4 ve kromozom-12 içeren istikrarlı bir sapmayı göstermektedir. alt panel kromozom-7 ve kromozom-10 içeren istikrarlı bir kromozom sapma ile fare spektral karyotiplemesi gösterir. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/55162/55162fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice at JoVE

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice

The present protocol describes the usefulness of multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH) and spectral karyotyping (SKY) in identifying inter-chromosomal stable aberrations in the bone marrow cells of mice after exposure to total body irradiation.

Çoklu Floresan Inter-kromozomal Kararlı sapmaları Algılama<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridizasyon (mFISH) ve ışınlanmış Farelerde Spektral Karyotipik (SKY)

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially ...

detection-inter-chromosomal-stable-aberrations-multiple-fluorescence

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Genetics

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization (mFISH) and Spectral Karyotyping (SKY) in Irradiated Mice

9.8K Görüntüleme.  University of Arkansas for Medical Sciences. The present protocol describes the usefulness of multiple fluorescence in situ hybridization (mFISH) and spectral karyotyping (SKY) in identifying inter-chromosomal stable aberrations in the bone marrow cells of mice after exposure to total body irradiation. 

Video: Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic effect is lacking and the exact mechanisms of its action are unclear. Here, we report an animal model that allows for direct testing of the effects of tumor hypoxia on ES dissemination and investigation into the underlying pathways involved. This approach combines two well-established experimental strategies, orthotopic xenografting of ES cells and femoral artery ligation (FAL), which induces hindlimb ischemia. Human ES cells were injected into the gastrocnemius muscles of SCID/beige mice and the primary tumors were allowed to grow to a size of 250 mm3. At this stage either the tumors were excised (control group) or the animals were subjected to FAL to create tumor hypoxia, followed by tumor excision 3 days later. The efficiency of FAL was confirmed by a significant increase in binding of hypoxyprobe-1 in the tumor tissue, severe tumor necrosis and complete inhibition of primary tumor growth. Importantly, despite these direct effects of ischemia, an enhanced dissemination of tumor cells from the hypoxic tumors was observed. This experimental strategy enables comparative analysis of the metastatic properties of primary tumors of the same size, yet significantly different levels of hypoxia. It also provides a new platform to further assess the mechanistic basis for the hypoxia-induced alterations that occur during metastatic tumor progression in vivo. In addition, while this model was established using ES cells, we anticipate that this experimental strategy can be used to test the effect of hypoxia in other sarcomas, as well as tumors orthotopically implanted in sites with a well-defined blood supply route.

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

This manuscript describes the development of an animal model that allows for the direct testing of the effects of tumor hypoxia on metastasis and the deciphering the mechanisms of its action. Although the experiments described here focus on Ewing sarcoma, a similar approach can be applied to other tumor types.

Tümör metastaz üzerinde Hipoksi Test Etkisinin Vivo Modeli

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

Kanser Araştırmaları

Application of Laser Micro-irradiation for Examination of Single and Double Strand Break Repair in Mammalian Cells

Highly coordinated DNA repair pathways exist to detect, excise and replace damaged DNA bases, and coordinate repair of DNA strand breaks. While molecular biology techniques have clarified structure, enzymatic functions, and kinetics of repair proteins, there is still a need to understand how repair is coordinated within the nucleus. Laser micro-irradiation offers a powerful tool for inducing DNA damage and monitoring the recruitment of repair proteins. Induction of DNA damage by laser micro-irradiation can occur with a range of wavelengths, and users can reliably induce single strand breaks, base lesions and double strand breaks with a range of doses. Here, laser micro-irradiation is used to examine repair of single and double strand breaks induced by two common confocal laser wavelengths, 355 nm and 405 nm. Further, proper characterization of the applied laser dose for inducing specific damage mixtures is described, so users can reproducibly perform laser micro-irradiation data acquisition and analysis.

Confocal fluorescence microscopy and laser micro-irradiation offer tools for inducing DNA damage and monitoring the response of DNA repair proteins in selected sub-nuclear areas. This technique has significantly advanced our knowledge of damage detection, signaling, and recruitment. This manuscript demonstrates these technologies to examine single and double strand break repair.

Lazer mikro-ile kullanma için tek incelenmesi ve çift Strand Break onarım memeli hücrelerinde

Highly coordinated DNA repair pathways exist to detect, excise and replace damaged DNA bases, and coordinate repair of DNA strand breaks. While molecular ...

Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being analyzed 1, 2. This classical banding technique, however, is not reliable in identifying complex chromosomal aberrations such as those associated with cancer. To overcome the limitations of the banding technique, Spectral Karyotyping (SKY) is introduced to provide much reliable information on chromosome abnormalities.
SKY is a multicolor fluorescence in-situ hybridization (FISH) technique to detect metaphase chromosomes with spectral microscope 3, 4. SKY has been proven to be a valuable tool for the cytogenetic analysis of a broad range of chromosome abnormalities associated with a large number of genetic diseases and malignancies 5, 6. SKY involves the use of multicolor fluorescently-labelled DNA probes prepared from the degenerate oligonucleotide primers by PCR. Thus, every chromosome has a unique spectral color after in-situ hybridization with probes, which are differentially labelled with a mixture of fluorescent dyes (Rhodamine, Texas Red, Cy5, FITC and Cy5.5). The probes used for SKY consist of up to 55 chromosome specific probes 7-10.
The procedure for SKY involves several steps (Figure 1). SKY requires the availability of cells with high mitotic index from normal or diseased tissue or blood. The chromosomes of a single cell from either a freshly isolated primary cell or a cell line are spread on a glass slide. This chromosome spread is labeled with a different combination of fluorescent dyes specific for each chromosome. For probe detection and image acquisition,the spectral imaging system consists of sagnac interferometer and a CCD camera. This allows measurement of the visible light spectrum emitted from the sample and to acquire a spectral image from individual chromosomes. HiSKY, the software used to analyze the results of the captured images, provides an easy identification of chromosome anomalies. The end result is a metaphase and a karyotype classification image, in which each pair of chromosomes has a distinct color (Figure 2). This allows easy identification of chromosome identities and translocations. For more details, please visit Applied Spectral Imaging website (<a href="http://www.spectral-imaging.com/" target="_blank">http://www.spectral-imaging.com/</a>).
SKY was recently used for an identification of chromosome segregation defects and chromosome abnormalities in humans and mice with Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease (ADPKD), a genetic disease characterized by dysfunction in primary cilia 11-13. Using this technique, we demonstrated the presence of abnormal chromosome segregation and chromosomal defects in ADPKD patients and mouse models 14. Further analyses using SKY not only allowed us to identify chromosomal number and identity, but also to accurately detect very complex chromosomal aberrations such as chromosome deletions and translocations (Figure 2).

Spectral Karyotyping (SKY) is an advanced cytogenetics technique to identify genomic and chromosomal aberrations. This technique takes advantage of chromosome painting probes, which allow classification of all chromosomes. SKY can also identify complex chromosome aberrations and segregation defects in mice and humans with various diseases, including polycystic kidney disease.

Polikistik Böbrek Hastalığı Olan İnsanlar ve Fareler kromozom anomalileri Eğitim Spektral Karyotipik

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being ...

Tıp

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage response induced by neutron-gamma mixed-beam used in boron neutron capture therapy (BNCT). Specifically, the proposed methodology is applied for the detection of repair proteins activation which can be visualized as foci using antibodies specific to DNA double-strand breaks (DNA-DSBs). DNA repair foci were assessed by immunofluorescence in colon cancer cells (HCT-116) after irradiation with the neutron-mixed beam. DNA-DSBs are the most genotoxic lesions and are repaired in mammalian cells by two major pathways: non-homologous end-joining pathway (NHEJ) and homologous recombination repair (HRR). The frequencies of foci, immunochemically stained, for commonly used markers in radiobiology like &#947;-H2AX, 53BP1 are associated with DNA-DSB number and are considered as efficient and sensitive markers for monitoring the induction and repair of DNA-DSBs. It was established that &#947;-H2AX foci attract repair proteins, leading to a higher concentration of repair factors near a DSB. To monitor DNA damage at the cellular level, immunofluorescence analysis for the presence of DNA-PKcs representative repair protein foci from the NHEJ pathway and Rad52 from the HRR pathway was planned. We have developed and introduced a reliable immunofluorescence staining protocol for the detection of radiation-induced DNA damage response with antibodies specific for repair factors from NHEJ and HRR pathways and observed radiation-induced foci (RIF). The proposed methodology can be used for investigating repair protein that is highly activated in the case of neutron-mixed beam radiation, thereby indicating the dominance of the repair pathway.

Radiation-induced DNA damage response activated by neutron mixed-beam used in boron neutron capture therapy (BNCT) has not been fully established. This protocol provides a step-by-step procedure to detect radiation-induced foci (RIF) of repair proteins by immunofluorescence staining in human colon cancer cell lines after irradiation with the neutron-mixed beam.

İnsan Kolon Kanseri Hücrelerinde DNA Hasarı ve Onarım Foci İmmünofloresan Görüntüleme

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...

An Automated Microscopic Scoring Method for the &#947;-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes

Ionizing radiation is a potent inducer of DNA damage and a well-documented carcinogen. Biological dosimetry comprises the detection of biological effects induced by exposure to ionizing radiation to make an individual dose assessment. This is pertinent in the framework of radiation emergencies, where health assessments and planning of clinical treatment for exposed victims are critical. Since DNA double strand breaks (DSB) are considered to be the most lethal form of radiation-induced DNA damage, this protocol presents a method to detect DNA DSB in blood samples. The methodology is based on the detection of a fluorescent labelled phosphorylated DNA repair protein, namely, &#947;-H2AX. The use of an automated microscopy platform to score the number of &#947;-H2AX foci per cell allows a standardized analysis with a significant decrease in the turn-around time. Therefore, the &#947;-H2AX assay has the potential to be one of the fastest and sensitive assays for biological dosimetry. In this protocol, whole blood samples from healthy adult volunteers will be processed and irradiated in vitro in order to illustrate the usage of the automated and sensitive &#947;-H2AX foci assay for biodosimetry applications. An automated slide scanning system and analysis platform with an integrated fluorescence microscope is used, which allows the fast, automatic scoring of DNA DSB with a reduced degree of bias.

This protocol presents the slide preparation and automated scoring of the &#947;-H2AX foci assay on peripheral blood lymphocytes. To illustrate the method and sensitivity of the assay, isolated lymphocytes were irradiated in vitro. This automated method of DNA DSB detection is useful for fast and high-throughput biological dosimetry applications.

İnsan Periferik Kan Lenfositlerinde γ-H2AX Odak Analizi için Otomatik Mikroskobik Puanlama Yöntemi

Ionizing radiation is a potent inducer of DNA damage and a well-documented carcinogen. Biological dosimetry comprises the detection of biological effects ...

Rapid Analysis of Chromosome Aberrations in Mouse B Lymphocytes by PNA-FISH

Defective DNA repair leads to increased genomic instability, which is the root cause of mutations that lead to tumorigenesis. Analysis of the frequency and type of chromosome aberrations in different cell types allows defects in DNA repair pathways to be elucidated. Understanding mammalian DNA repair biology has been greatly helped by the production of mice with knockouts in specific genes. The goal of this protocol is to quantify genomic instability in mouse B lymphocytes. Labeling of the telomeres using PNA-FISH probes (peptide nucleic acid - fluorescent in situ hybridization) facilitates the rapid analysis of genomic instability in metaphase chromosome spreads. B cells have specific advantages relative to fibroblasts, because they have normal ploidy and a higher mitotic index. Short-term culture of B cells therefore enables precise measurement of genomic instability in a primary cell population which is likely to have fewer secondary genetic mutations than what is typically found in transformed fibroblasts or patient cell lines.

DNA repair pathways are essential for maintenance of genomic integrity and preventing mutation and cancer. The goal of this protocol is to quantify genomic instability by direct observation of chromosome aberrations in metaphase spreads from mouse B cells using fluorescent in situ hybridization (FISH) for telomeric DNA repeats.

PNA-FISH ile Fare B Lenfositlerindeki kromozom anormallikleri hızlı Analizi

Defective DNA repair leads to increased genomic instability, which is the root cause of mutations that lead to tumorigenesis. Analysis of the frequency ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Farelerin Profaz Tutuklu Oositlerinde DNA Hasarının Belirlenmesi

Detection of DNA Double-Stranded Breaks in Mouse Oocytes

Oocytes are amongst the biggest and most long-lived cells in the female body. They are formed in the ovaries during embryonic development and remain arrested at the prophase of meiosis I. The quiescent state may last for years until the oocytes receive a stimulus to grow and obtain the competency to resume meiosis. This protracted state of arrest makes them extremely susceptible to accumulating DNA-damaging insults, which affect the genetic integrity of the female gametes and, therefore, the genetic integrity of the future embryo. 
Consequently, the development of an accurate method to detect DNA damage, which is the first step for the establishment of DNA damage response mechanisms, is of vital importance. This paper describes a common protocol to test the presence and progress of DNA damage in prophase-arrested oocytes during a period of 20 h. Specifically, we dissect mouse ovaries, retrieve the cumulus-oocyte complexes (COCs), remove the cumulus cells from the COCs, and culture the oocytes in &#924;2 medium containing 3-isobutyl-1-methylxanthine to maintain the state of arrest. Thereafter, the oocytes are treated with the cytotoxic, antineoplasmic drug, etoposide, to engender double-strand breaks (DSBs). 
By using immunofluorescence and confocal microscopy, we detect and quantify the levels of the core protein &#947;H2AX, which is the phosphorylated form of the histone H2AX. H2AX becomes phosphorylated at the sites of DSBs after DNA damage. The inability to restore DNA integrity following DNA damage in oocytes can lead to infertility, birth defects, and increased rates of spontaneous abortions. Therefore, the understanding of DNA damage response mechanisms and, at the same time, the establishment of an intact method for studying these mechanisms are essential for reproductive biology research.

Yazar Spotlight: Memeli Oositlerinde ve Preimplantasyon Embriyolarında DNA Hasar Tepkisini Anlamak 

Maintaining oocyte genome integrity is necessary to ensure the genetic fidelity in the resulting embryo. Here, we present an accurate protocol for detecting DNA double-strand breaks in mammalian female germ cells.

Fare Oositlerinde DNA Çift Sarmallı Kırılmaların Tespiti

Oocytes are amongst the biggest and most long-lived cells in the female body. They are formed in the ovaries during embryonic development and remain ...

Gelişim Biyolojisi

Chromosomics: Detection of Numerical and Structural Alterations in All 24 Human Chromosomes Simultaneously Using a Novel OctoChrome FISH Assay

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique that allows specific DNA sequences to be detected on metaphase or interphase chromosomes in cell nuclei1. The technique uses DNA probes with unique sequences that hybridize to whole chromosomes or specific chromosomal regions, and serves as a powerful adjunct to classic cytogenetics. For instance, many earlier studies reported the frequent detection of increased chromosome aberrations in leukemia patients related with benzene exposure, benzene-poisoning patients, and healthy workers exposed to benzene, using classic cytogenetic analysis2. Using FISH, leukemia-specific chromosomal alterations have been observed to be elevated in apparently healthy workers exposed to benzene3-6, indicating the critical roles of cytogentic changes in benzene-induced leukemogenesis. 
Generally, a single FISH assay examines only one or a few whole chromosomes or specific loci per slide, so multiple hybridizations need to be conducted on multiple slides to cover all of the human chromosomes. Spectral karyotyping (SKY) allows visualization of the whole genome simultaneously, but the requirement for special software and equipment limits its application7. Here, we describe a novel FISH assay, OctoChrome-FISH, which can be applied for Chromosomics, which we define here as the simultaneous analysis of all 24 human chromosomes on one slide in human studies, such as chromosome-wide aneuploidy study (CWAS)8. The basis of the method, marketed by Cytocell as the Chromoprobe Multiprobe System, is an OctoChrome device that is divided into 8 squares, each of which carries three different whole chromosome painting probes (Figure 1). Each of the three probes is directly labeled with a different colored fluorophore, green (FITC), red (Texas Red), and blue (Coumarin). The arrangement of chromosome combinations on the OctoChrome device has been designed to facilitate the identification of the non-random structural chromosome alterations (translocations) found in the most common leukemias and lymphomas, for instance t(9;22), t(15;17), t(8;21), t(14;18)9. Moreover, numerical changes (aneuploidy) in chromosomes can be detected concurrently. The corresponding template slide is also divided into 8 squares onto which metaphase spreads are bound (Figure 2), and is positioned over the OctoChrome device. The probes and target DNA are denatured at high-temperature and hybridized in a humid chamber, and then all 24 human chromosomes can be visualized simultaneously. 
OctoChrome FISH is a promising technique for the clinical diagnosis of leukemia and lymphoma and for detection of aneuploidies in all chromosomes. We have applied this new Chromosomic approach in a CWAS study of benzene-exposed Chinese workers8,10.

A novel fluorescence in situ hybridization (FISH) method that simultaneously examines both numerical and structural chromosome alterations, particularly the specific chromosomal translocations associated with leukemia and lymphoma, of all 24 human chromosomes on a single device in one hybridization, is described.

Chromosomics: Sayısal ve Yapısal Değişmeler Algılama Tüm 24 İnsan Kromozomlar Aynı zamanda Roman OctoChrome BALIK Test kullanma

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique that allows specific DNA sequences to be detected on metaphase or interphase chromosomes in cell ...

Çoklu Floresan Inter-kromozomal Kararlı sapmaları Algılama

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Tümör metastaz üzerinde Hipoksi Test Etkisinin Vivo Modeli

Lazer mikro-ile kullanma için tek incelenmesi ve çift Strand Break onarım memeli hücrelerinde

Polikistik Böbrek Hastalığı Olan İnsanlar ve Fareler kromozom anomalileri Eğitim Spektral Karyotipik

İnsan Kolon Kanseri Hücrelerinde DNA Hasarı ve Onarım Foci İmmünofloresan Görüntüleme

İnsan Periferik Kan Lenfositlerinde γ-H2AX Odak Analizi için Otomatik Mikroskobik Puanlama Yöntemi

PNA-FISH ile Fare B Lenfositlerindeki kromozom anormallikleri hızlı Analizi

Fare Oositlerinde DNA Çift Sarmallı Kırılmaların Tespiti

Fare Oositlerinde DNA Çift Sarmallı Kırılmaların Tespiti

Fare Oositlerinde DNA Çift Sarmallı Kırılmaların Tespiti

Chromosomics: Sayısal ve Yapısal Değişmeler Algılama Tüm 24 İnsan Kromozomlar Aynı zamanda Roman OctoChrome BALIK Test kullanma