Name: observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus
Uploaded: 2016-12-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus at JoVE.com

Najie Zhu ve Liqun Bai, bu çalışmaya eşit katkıda bulundu. Bu eser mali Kamu Refah Orman Bilimsel Araştırma Fonu Özel (201204501) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31170604, 31270688 ve 31570638) tarafından desteklenmiştir. Biz İngilizce yazılı onların yararlı öneriler Dr. Holighaus Gerrit ve Dr Danielle Hickford teşekkür ederim.

Virgin Yetişkin Nematodlar 1. kazanılması <ol><li> Pinewood nematod izolatı ve kültür koşulları B. xylophilus&#39;un Nxy61 aslen Çin&#39;de Zhejiang eyaletinin Ningbo alanında hastalıklı Pinus massoniana elde edildi izole: NOT. <ol><li> (PDA Malzemelerin Tablo bakınız) Patates Dekstroz Agar hazırlayın Botrytis cinerea yetiştirmek için plakaları. </li><li> Aşılaması için, B. cinerea mat 10 mm çaplı mantar mat bir parça zımba ve yeni bir PDA plakanın ortasına koydu. Kültür karanlıkta 25 ° C&#39;de 5 gün boyunca B. cinerea. </li><li> Kültür karanlıkta 25 ° C &#39;de B. cinerea içeren hazırlanmış bir petri çam nematodları. </li></ol></li><li> B. xylophilus&#39;un yumurta kazanılması <ol><li> bir huni altında kenetlenmiş kauçuk tüp yerleştirin ve montajı rafa hazırlanan huni tutunBaermann huni cihazı. huni ağzına filtre kağıdı yerine gazlı bez iki kat yerleştirin. </li><li> huni kurulum mantar kültürleri aktarın ve mantar mat batırılır kadar su ekleyin. 2 saat bekleyin ve nematod, mantar kültürü çıkıp filtre kağıdı çapraz ve Baermann huninin en alt kısmında yerleşmek olacaktır. </li><li> 15 ml tüp içine tüpün tabanından su damlaları ilk çift toplamak ve yavaş tüp kelepçe bırakarak nematodları toplar. </li><li> Oda sıcaklığında 2 dakika boyunca 3000 x g&#39;de yukarıda koleksiyonları santrifüjleyin. </li><li> Bir pipet ile suyun üst tabaka uzaklaştırılır ve çift damıtılmış steril (dd), 1 mL H2O ile yeniden süspanse </li><li> Bir pipet ile, yeni bir cam Petri kabı (6 cm çapında) Yukarıdaki tabanda aktarın. Nematod özgürce yüzmek mümkün olduğundan emin olmak için Petri kabı steril dd H2O 3 mL ekleyin. </li><li> glas nematod tutunKaranlıkta 25 ° C &#39;de 10 dakika süre ile Petri kabı s. Yumurta hamile kadın tarafından döşenecek. Çünkü onların glikoprotein yüzeyinin, yumurta cam Petri kabı altına sopa olacak. </li><li> Yumurta bozmadan dikkatlice su ve solucanları temizler. Kurumasını yumurta önlemek için hemen cam Petri kabı steril dd H2O 3 mL ekleyin. </li><li> Adımı tekrarlayın 1.2.8 3x tüm larvaları ve yetişkin kaldırmak ve saf yumurta elde etmek. Petri kabı steril dd, H2O ilave 2 mL (toplam 5 mL) ilave edilir. </li></ol></li><li> Dördüncü aşama gençlerin kazanılması (J4 larva) <ol><li> Hatch 25 ° C&#39;de karanlıkta, 24 saat boyunca toplanan yumurtalar J2 larva elde edildi. </li><li> 2 dakika boyunca 3000 x g&#39;de 15 ml tüp, santrifüj bir pipet ile J2 larvaları transferi ve suyun üst tabakayı kaldırmak. </li><li> Steril dd, H2O 200 uL J2 larvaları yeniden süspanse ve aktarmakB. cinerea içeren PDA plakası. </li><li> Kültür karanlıkta 25 ° C &#39;de 52 saat boyunca J2 larva. Bu zaman noktasında, en J2 larva J4 larvaların erken aşamada haline olacaktır. </li></ol></li><li> Bakire yetişkin nematod kazanılması <ol><li> bir alkol brülör üzerine ısıtıldıktan sonra bir cam kılcal çizerek nematod toplamak için bir iğne hazırlayın. NOT: Bu kılcal iğne ucu, genellikle tek bir nematodu alınması için bir araç olarak kullanılabilir ve böylece, çapı 50 mikron, yetişkin bir nematod kabaca gövde genişliği olmalıdır. </li><li> Bir Baermann hunisi monte ve adımları 1.2.1&#39;de tarif edildiği gibi 2 saat boyunca mantar kültürlerinden nematod çıkarmak - 1.2.3. </li><li> Temiz bir Petri kabı içine su ile J4 aktarın. </li><li> Bir stereomikroskop altında nematod gözlemlemek ve Mamiya ve Kiyohara 8 (Şekil 1 tarafından açıklandığı gibi, genital morfoloji kadınlar ve erkekler arasında ayrım </strong&gt;). Hazırlanan kılcal iğne ile istenilen seks nematod Pick up ve erkeklerde veya kadınlarda uygun fungal kültür plaka transfer. NOT: erkeklerden daha fazla kadın 60 kadın yüzdesi ile vardır -% 70. kadın vulva erkek spicule Açıkçası farklıdır. yetişkin ile karşılaştırıldığında, erken evre J4 içinde spicule veya vulva küçük, ama yine de kolayca görülebilir ve ayırt edilebilir. nematod her zaman, bazen kadın ve erkeklerin ayırt zorluk artar, su, hareket ediyor. </li><li> Kültür karanlıkta 25 ° C &#39;de 24 saat daha J4 larva. NOT: Tüm nematod yetişkinler haline, ama onlar unmated olduğundan, bunlar bakire yetişkin olarak kabul edilmektedir. </li><li> Baermann hunileri iki birleştirin ve adımları 1.2.1 açıklandığı gibi, 2 saat boyunca mantar kültürlerden bakire yetişkin ayıklamak - 1.2.3 ve iki ayrı, temiz Petri kapları içine bakire yetişkin erkek ve kadın aktarın. </li></ol&gt; </li></ol> 2. Gözlem ve çiftleşme Davranış Video Kayıt <ol><li> Birkaç içbükey slaytlar hazırlamak ve onların kuyuların her steril dd H2O 200 mcL ekleyin. </li><li> Bir kılcal iğne ile hazırlanan bakire yetişkin erkek veya kadın ve Pick up ve her içbükey slayt suya sadece bir nematod koydu. </li><li> onlara yeni sulu ortama uyum sağlamak için 1 saat boyunca hazne içinde bakire yetişkin tutun. </li><li> Bir pipet kullanarak başka iyi birinden bunlardan biri aktararak bakire erkek ve dişi çifti. </li><li> Bir stereomikroskop altında içbükey slayt 1♀ + 1♂ kombinasyonunun çiftleşme davranışları gözlemlemek. </li><li> bakire yetişkinlerin çiftleşme etkinliğini analiz etmek, onların çiftleşme başarı oranını (R) hesaplar ve rastgele seçilen yetişkin çifti ile karşılaştırın. birleşme çalışılan çoğaltır sayısına kıyasla görülmüştür ki çoğaltır yüzdesi olarak R hesaplayın. </li><li&gt; Çiftleşme seçimi ve intrasexual rekabet, grup araştırmak ve iki farklı kombinasyonlar bakire nematod gözlemlemek için: 1♀ + 3♂ ve + 1♂ 3♀. </li><li> kalitatif ve kantitatif analiz için veri toplamak amacıyla, Video mikroskopi kullanılarak çiftleşme davranışı filme. Normal olarak, birleşme sonrası birbirinden ayrıldığı zaman nematod an içbükey sürgünün çukuruna yerleştirilir zaman bütün birleşme işlemi, 2 saat içinde tamamlandı. Bu nedenle, bir tekrar en az 2 saat boyunca sürekli olarak birleşme işlemi kaydedilir. en az 30 Komple her kombinasyon için toplam çoğaltır. Not: kayıt işlemi sırasında buharlaşma için oyuğuna daha steril GG S, her 0.5 H2O (genellikle 50 uL) eklenir. </li></ol> 3. Veri Toplama <ol><li> Bir bilgisayar ekranında dikkatlice videoları görüntülemek ve niteliksel alt davranışları karakterize. </li><li> çiftleşme kullanarak th süresini ölçmekvideo kaydedici, e kare-kare fonksiyonu. El ile bitiş noktası başlayarak zaman çıkarın. </li><li> 1♀ + 1♂ kombinasyonu için, her video kaydını analiz etmek ve aşağıdaki olaylardan süresini ölçmek: <ol><li> Arama süresini ölçmek (yani, kadın ve erkek karşılaştıkları an içbükey slayt kuyuya tanıtıldı ve birbirine temas edildiğinde geçen süre). </li><li> Temas süresini ölçmek (yani, erkek tam ilk çiftleşme için dişinin vulva konumlandırılmış an ilk temas süresi). </li><li> Copulating süresini ölçmek (yani, o boşalma sonra yerde kadın vücudundan kayarak kadar erkek tam dişinin vulva konumlandırılmış tarihten itibaren zaman). Not: Bazı nematod 2 saat içinde birkaç kez copulate edebilirsiniz. Bu gibi durumlarda, LAS sonunda ilk çiftlerin çiftleşme süresinin ölçülmesiarasındaki zaman dahil olmak üzere, t, bir,. </li><li> Kalan süresinin ölçülmesi (yani, birleşme sonrası dönem erkek ve dişi yüzmek birbirinden uzağa daha fazla nematodlar vücut uzunluğundan daha bir mesafe ile ayrılır kadar (genellikle, 1 mm)). </li></ol></li><li> Çiftleşme frekansı ve her birleşme süresi ve farklı kombinasyonlarının her biri için 2 saat tüm çiftleştirerek ortalama süreyi saymak (yani, 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ ve 1♀ + 3♂). </li><li> derhal ve hiç ara vermeden yapılan ilk temas, sonra çiftleşme başarı oranı gibi farklı kombinasyonlar için ilk temas (P) çiftleşme başarı oranını hesaplayın. temas aşamasında, çeşitli temas gerçek birleşme öncesi gözlenen olabilir. <ol><li> iki kişi arasındaki mesafe vücut uzunluğundan daha fazla olduğu zaman, bitecek bir kişiyi düşünün. bir tekrarında, kayıt P 100% olarak çiftleşme is ara vermeden, ilk temastan hemen sonra görülen veya 0.00% no çiftleşme gözlendi ya da eğer çiftleşme ancak iki ya da daha fazla temas sonra varsa. NOT: Burada anlatılan her kombinasyon için 30 suret vardı. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Tokushige, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+sp.+in+the+wood+of+dead+pine+trees.">Bursaphelenchus sp. in the wood of dead pine trees.</a> J. Jap. For. Soc. 51, 193-195 (1969).</li><li>Sun, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+xylophilus+was+discovered+in+Sun+Yet-sen's+mausoleum+in+Nanjing.">Bursaphelenchus xylophilus was discovered in Sun Yet-sen's mausoleum in Nanjing.</a> J. Jiangsu Fore. Sci. Tech. (in Chinese). 4, 47 (1982).</li><li>Mota, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+Portugal+and+in+Europe.">First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe.</a> Nematology. 1, 727-734 (1999).</li><li>Robertson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+the+pine+wood+nematode+Bursaphelenchus+xylophlius+Steiner+&amp;+Buhrer,+1934+(Nickle,+1970)+in+Spain.">Incidence of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophlius Steiner &amp; Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain.</a> Nematology. 13, 755-757 (2011).</li><li>Vicente, C., Espada, M., Vieira, P., Mota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pine+wilt+disease:+a+threat+to+European+forestry.">Pine wilt disease: a threat to European forestry.</a> Euro. J. Plant Path. 133, 89-99 (2012).</li><li>Jones, J. T., Moens, M., Mota, M., Li, H., Kikuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+xylophilus:+opportunities+in+comparative+genomics+and+molecular+host-parasite+interactions.">Bursaphelenchus xylophilus: opportunities in comparative genomics and molecular host-parasite interactions.</a> Mol. Plant. Path. 9, 357-368 (2008).</li><li>Mamiya, Y., Furukawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecundity+and+reproduction+of+Bursaphelenchus+lignicolus.">Fecundity and reproduction of Bursaphelenchus lignicolus.</a> Jap. J. Nemat. 7, 6-9 (1977).</li><li>Mamiya, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+Bursaphelenchus+lignicolus.+n.+sp.+(Nematoda:+Aphelenchoididae)+from+pine+wood+and+histophathology+of+nematode-infested+trees.">Description of Bursaphelenchus lignicolus. n. sp. (Nematoda: Aphelenchoididae) from pine wood and histophathology of nematode-infested trees.</a> Nematologica. 18, 120-124 (1972).</li><li>Liu, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+features+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+the+mating+process.">Behavioural features of Bursaphelenchus xylophilus in the mating process.</a> Nematology. 16, 895-902 (2014).</li><li>Simon, J. M., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+mate+finding+cue+in+the+hermaphrodite+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Evidence of a mate finding cue in the hermaphrodite nematode Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 1598-1603 (2002).</li><li>Barr, M. M., Garcia, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mating+behaviour.">Male mating behaviour.</a> The C. elegans Research Community Wormbook. , (2006).</li><li>Shinya, R., Chen, A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+attraction+and+mating+in+Bursaphelenchus+okinawaensis+and+B.+xylophilus.">Sex attraction and mating in Bursaphelenchus okinawaensis and B. xylophilus.</a> J. Nematol. 47 (3), 176-183 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Davranış testleri, kimyasal ekoloji, nörobiyoloji, moleküler biyoloji ve genetik bir temel yönü vardır. Nematodlar, ve özellikle de C. elegans, yoğun bu alanda araştırmalar için kullanılmaktadır. C. elegans &#39;çiftleşme davranışı, daha önce 10-11 araştırılmıştır. Bununla birlikte, B xylophilus&#39;un gonochoristic ve hermafrodit C. elegans farklıdır, ve birleşme işlemi farklı davranış özellikleri 9 sahiptir. Son zamanlarda, Bursaphelenchus okinawaensis, B. xylophilus&#39;un bir Hermaphroditic kardeş türlerin çiftleşme davranışı 12 bildirilmiştir. Farklı deneysel yöntemler kullanılmıştır rağmen, bu hermafrodit türlerin, B. xylophilus&#39;un benzer seks cazibe gösterdi ve aralarında türler arası Görülecek gözlenmiştir. Bu Hermaphroditic kardeş tür Bursaphelenchus biyolojisi üzerine daha fazla araştırma yapmak için bir model olarak kullanılmış olabilir. Bu protokol gözlemlemek ve B. xylophilus&#39;un çiftleşme sırasında davranışsal özelliklerinin araştırılması için nasıl bir kılavuz sağlar. Bulgularımız bakire yetişkin nematod kullanarak başarıyla çiftleşme sürecinin (Şekil 1) gözlemleme şansı artırmak için kritik olduğunu göstermiştir. J4 larva elde edilmesi ve tam onların cinsiyetleri ayırt bakire yetişkinler edinimi için iki önemli temel adımlardır. Deneysel koşullar altında (yani, karanlıkta, 25 ° C&#39;de), 52 saat süre J2 larva J4 elde etmek için uygun bir zaman olduğu altında. Ancak, erken J4 aşamasında seks ayırt çoğunlukla kişisel deneyim bağlıdır. farklı insanlar seks tahsisi iki kez kontrol etmek için doğruluğunu sağlamak için, gereklidir. Çiftleşme sürecinin B. xylophilus&#39;un sırasında davranışsal özellikler dört sürelerini farklı kaydederek kalitatif tarif ve kantitatif analiz edilebilirent fazlar, ilk temas, çiftleşme sıklığı ve farklı kombinasyonlar çiftleşme süreden sonra çiftleşme başarısı yüzdesi. İlginçtir, ilk defa, biz kadın ve erkeklerde ve kadınlarda hem de güçlü içi cinsel rekabetin çiftleşme seçim gözlendi. Hiçbir karışıklık gözlendi; Ancak, bu bizim araştırmada kullanılan nematod sınırlı sayıda nedeniyle olabilir. Bu protokol, tek B. xylophilus&#39;un çiftleşme davranışı incelemek için kullanılamaz, fakat aynı zamanda, diğer nematodlar için bir referans olarak yararlı ve değerli olabilir.

The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity. 
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;B. xylophilus&lt;/em&gt; isolate &lt;em&gt;Nxy61&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Extracted from &lt;em&gt;Pinus massoniana&lt;/em&gt; in Ningbo area of China</td></tr><tr><td>Grey mold strain</td><td></td><td></td><td>Obtained from Forestry Academy of China</td></tr><tr><td>Baermann funnels</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>falcon tubes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterile dd H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td>Sterilized by high pressure of steam at 121 &amp;deg;C for 30 min.</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDA medium</td><td>Huankai Bio.</td><td>021050</td><td></td></tr><tr><td>incubator</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>glass capillary</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Leica</td><td>LED5000 RL</td><td></td></tr><tr><td>inverted stereo microscope</td><td>Zeiss</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>concave slides</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus

Gözlemlemek ve çam nematod, orijinli olanlar çiftleşme davranışı ölçülmesi için bir yöntem olup, bir stereo mikroskop altında kurulmuştur. B. xylophilus&#39;un çiftleşme verimliliğini artırmak ve çiftleşme gözlem şansını artırmak için, bakire yetişkinler kültür ve soruşturma için kullanılır. Yumurta suda nematod tutmak ve dişiler 10 dakika boyunca yumurtalarını bırakmak için izin vererek elde edilmiştir. Ikinci aşama yavru (J2) karanlıkta 25 ° C&#39;de 24 saat boyunca inkübe edilerek yumurta senkronize edildi ve erken J4 bir 52 saat daha, gri küfe, Botrytis cinerea ile J2 kültürlenmesiyle elde edilmiştir. Bu sefer noktada, çoğu J4 nematod genital morfolojisi kullanarak erkek ya da kadın olarak açıkça ayırt olabilir. erkek ve dişi J4 toplandı ve bakir yetişkin nematod için 24 saat boyunca, iki farklı Petri kapları ayrı ayrı kültürlenmiştir. Bir bakire erkek ve bakire kadın wat bir damla eşleştirilmişiçbükey sürgünün oyuk er. çiftleşme davranışı bir stereo mikroskop altında bir video kaydedici ile çekildi. çiftleşme sürecinin tüm dönem 82.8 ± 3.91 dakika (ortalama ± SH) ve 4 farklı aşamalarında bölünmüş olabilir: arama, temas çiftleşen ve kalıcı. süresi ortalama dakika sırasıyla 21.8 ± 2.0, ± 1.9 28.0, 25.8 ± 0.7 ve 7.2 ± 0.5 idi. Onbir alt davranışlar tarif edildi: seyir yaklaşıyor, karşılaşmadan, boğmaca, dokunmadan, yerini, bağlama, ejaculating, sessizliğini ayıran ve dolaşım. bir kadın 3 erkek veya 3 kadın ile bir erkek ile gruplandırılmış zaman İlginçtir, bariz içi cinsel rekabet gözlendi. Bu protokol, B. xylophilus&#39;un çiftleşme davranışı araştırırken, aynı zamanda diğer nematodların etiyolojik çalışmalar için bir referans olarak hareket sadece, kullanışlı ve değerlidir.

Bakire yetişkinlerin çiftleşme başarı oranı (R) rastgele seçilmiş yetişkinlerin önemli ölçüde daha yüksek olduğu, ortalama 86,67% oldu: 13.33 ± 4.65% (F = 1301,71, df = 1, p = 0.0001) (Şekil 2). Bu bulgu B. xylophilus&#39;un rastgele seçilen yetişkinlere göre daha bakir yetişkinlerle çiftleşme davranışlarını gözlemlemek için daha kolay olduğunu göstermektedir. bir erkek bir kadın ile eşleştirilmiş zaman, tüm çiftleşme sürecinin ortalama 82.8 dakika sürdü. Tüm süreç dört farklı aşamadan tarafından tarif edilebilir: arama temas, çiftleşen ve kalıcı. Bu dört aşamadan için süre 21.8 ± 2.0 dk, 28.0 ± 1.9 dk, 25.8 ± 0.7 dk ve 7.2 ± 0.5 dk, sırasıyla (Şekil 3). son yayında, biz encounteri, seyir yaklaşan olarak 11 alt davranışları tarifng, dokunma, boğmaca, bağlama ejaculating, ayırma, sessizliğini ve 9 dolaşım, yerini. bir erkek aynı anda iki ya da daha fazla kadın bir araya geldiğinde, erkek herhangi bir seçim yapmadan, bunlardan biri ile rastgele çiftleşme gibiydi. Bununla birlikte, açık bir birleşme seçimi kadın B. xylophilus gözlenmiştir. Bir kadın bir erkek temas olduğunda, kadın başını hafifçe erkeğin baş, gövde, kuyruk ve genital bölgeyi dokunmak eğilimi ve onun potansiyel bir ortak değerlendirerek ortaya çıktı. kadın erkek kabul olmadıysa, kadın çabucak onu terk ve bir sonraki değerlendirme için başka bir erkek yüzdü. Erkeklerin biri daha sonra çiftleşme için dişi tarafından seçildi. İlk temas (P) sonra başarı oranlarını çiftleşme 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ ve 1♀ + 3♂ kombinasyonları sırasıyla 46.7 ± 9.3%, 80.0 ± 7.4 ve% 23.4 ± 7.4% idi, ve aralarındaki farklar were anlamlı (F = 8.21, df = 2, p = 0.0124) (Şekil 4). Intrasexual rekabet erkeklerde hem kadınlarda hem de gözlenmiştir. bir bakire kadın 3 bakire erkek ile karıştırıldığında, erkekler yaklaşım ve onunla çiftleşme şansı elde etmek mümkün olduğunca kadın kurmaya çalıştı. vulva bir erkek tarafından işgal edildiğinde, diğer erkeklerin şiddet vücut hali ile ya da onları ayırmak için sürükleyerek çiftleşme erkek rahatsız etmeye çalıştı. Kadın intrasexual rekabet erkek intrasexual rekabete daha fazla veya daha az benzer olduğu görüldü. Çiftleşme başarısı ağırlıklı olarak kadın bağlıydı. Bir kadın bir erkek kabul ettiğinde, erkek daha yavaş hareket ve kıvrık ya da hatta bir çember oluşturdu ve dişi daha kolay erkek onu vulva bulmak ve diğer erkeklerden girişimi engellemek için yapmak aktif ilerledi. Bir kadın bir erkek kabul etmedi ise,kadın erkek monte olsa bile, onu sıyrılmaya çalıştı ve onun vulva kendini konumlandırılmış. Çünkü intrasexual rekabet, çiftleşme 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ frekansları ve 1♀ + 3♂ kombinasyonları sırasıyla 1.43 ± 0.091, 1.17 ± 0.074 ve 1.83 ± 0.074 idi ve aralarındaki farklılıklar vardı önemli (F = 14.50, df = 2, p = 0.0001) (Şekil 5). Bizim araştırmamızda, çiftleşme süresi 20 sn minimum 42 dakika, maksimum ölçüde değişmiştir. 10 dakika daha uzun bir süre devam eden en az 5 dakika süren kısa süreli çiftleştirerek, ve uzun süreli çiftleştirerek: eden verilere göre, birleşme süresi tabii ki iki gruba ayrılır edilebilir. Bariz farklılıklar, kısa süreli çiftleşme (F = 3.81 ortalama süresi farklı gruplar arasında df = 2, p gözlendi </em&gt; = 0,0296) ve uzun süreli birleşme (F = 179,52, df = 2, p = 0.0001), ve çiftleştirerek (F = 2.93, df = 2, p = 0,0367) (Şekil 6). <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig1.jpg" /> Şekil 1: Erkek ve Kadın B. xylophilus&#39;un ve genital. (A) erkek (mavi ok) spicule. (B) dişi (kırmızı ok) vulva. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54842/54842fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54842/54842fig2.jpg" /> Şekil 2: Virgin Yetişkin Couples Çiftleşme Başarı Oranı ve B. xylophilus&#39;un arasında rastgele seçilen Yetişkin Çiftler. hesaplanan ortalama değerler 30 çoğaltır vardır. dikey çubuk gösterisistandart hata s. Tukey testi ile karşılaştırıldığında farklı küçük harf P &lt;0.05 anlamlı farklılıklar göstermektedir. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54842/54842fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54842/54842fig3.jpg" /> Şekil 3: B. xylophilus&#39;un ve Çiftleşme Sürecinde 4 Aşama süresi. hesaplanan ortalama değerler 30 çoğaltır vardır. dikey çubuk standart hata gösterir. Tukey testi ile karşılaştırıldığında farklı küçük harf P &lt;0.05 anlamlı farklılıklar göstermektedir. çiftleşme fazının ortalama süresi tüm çiftleşme sürecinin 31.17% ve 25.80 ± 0.71 dk vardır. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54842/54842fig3large.jpg" target="_blank">Bu incir büyük halini görmek için buraya tıklayınız</a>ure. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54842/54842fig4.jpg" /> Şekil 4: B. xylophilus&#39;un İlk İletişime Çiftleşme Başarı. hesaplanan ortalama değerler ± SE 30 çoğaltır vardır. Tukey Dürüst Anlamlı Fark testi ile karşılaştırıldığında, her sütunda aynı küçük harfle anlamına P &lt;0.05 anlamlı farklı değildir. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54842/54842fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54842/54842fig5.jpg" /> Şekil 5: B. xylophilus&#39;un Farklı Gruplarda Çiftleşme Frekansı. hesaplanan ortalama değerler ± SE 30 çoğaltır vardır. P &lt;0.05 abone değil önemli ölçüde farklıdır aynı küçük harfle anlamıTukey Dürüst Anlamlı Fark testi ile ared. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54842/54842fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/54842/54842fig6.jpg" /> Şekil 6: B. xylophilus&#39;un ve Çiftleşme süresi. Tukey Dürüst Anlamlı Fark testi ile karşılaştırıldığında her sütun kümesi içinde aynı küçük harfle anlamına P &lt;0.05 anlamlı farklı değildir. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54842/54842fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus at JoVE.com

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

Pinewood Nematodu gözlem ve Çiftleşme Davranış miktarının belirlenmesi,<em&gt; Orijinli olanlar</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

observation-quantification-mating-behavior-pinewood-nematode

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

9.3K Görüntüleme.  Zhejiang Agricultural & Forestry University. A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

Video: Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American lobsters. Recent work in exploited crustacean populations (crabs and lobsters) suggests that there are circumstances where mature females are unable to achieve their full reproductive potential due to sperm limitation. To examine this possibility in different regions of the American lobster fishery, a reliable and noninvasive method was developed for sampling large numbers of female lobsters at sea. This method involves inserting a blunt-tipped needle into the female&#39;s seminal receptacle to determine the presence or absence of a sperm plug and to withdraw a sample that can be examined for the presence of sperm. A series of control studies were conducted at the dock and in the laboratory to test the reliability of this technique. These efforts entailed sampling 294 female lobsters to confirm that the presence of a sperm plug was a reliable indicator of sperm within the receptacle and thus, mating. This paper details the methodology and the results obtained from a subset of the total females sampled. Of the 230 female lobsters sampled from George&#39;s Bank and Cape Ann, MA (size range = 71-145 mm in carapace length), 90.3% were positive for sperm. Potential explanations for the absence of sperm in some females include: immaturity (lack of physiological maturity), breakdown of the sperm plug after being used to fertilize a clutch of eggs, and lack of mating activity. The surveys indicate that this technique for examining the mating success of female lobsters is a reliable proxy that can be used in the field to document reproductive activity in natural populations.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

Fishery-induced changes to exploited crustacean fisheries, such as the American lobster fishery, could potentially influence their reproductive dynamics, leading to a reduction in mating success. This study&#39;s goal was to develop a noninvasive method for ascertaining the mating success of female lobsters that may be physiologically or functionally mature.

A Noninvaziv Yöntemi<em&gt; In situ</em&gt; Kadın American Istakoz&#39;ların çiftleşme Başarı (Belirlenmesi<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

Çevre

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify the pollination effectiveness of each pollinator for visited flowers. Pollinator observations have been one of the most common methods to identify pollinators, and bagging and cage experiments have been conducted to show the effectiveness of specific pollinators. In a previous study of Lycoris sanguinea var. sanguinea, its effective pollinators, the visitation frequencies of each floral visitor, and its reproductive strategies were not identified. This study reports the observation that small bees visited flowers that were partially opened (breaking buds). To the best of our knowledge, this phenomenon has not been reported previously. Further, this study investigates the hypothesis that small bees can pollinate at that flowering stage. This study demonstrates the basic methods of field experiments in pollination ecology using L. sanguinea var. sanguinea. Pollinator observations and digital video showed the visitation frequencies of each floral visitor. Bagging and cage experiments revealed that these flowers could be pollinated fully and that breaking-bud pollination could be important for the pollination of this plant species. The advantages and disadvantages of each method are discussed, and recent developments, including laboratory experiments, are described.

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

To reveal the pollinator effectiveness of a given plant species, multiple methods of field experiments have been developed. This study demonstrates the basic methods of field experiments for pollination ecology using the case study of Lycoris sanguinea var. sanguinea and the novel pollination mechanism, breaking-bud pollination.

Tozlaşma Ekoloji Saha Deneyleri: Örneği<em&gt; Lycoris sanguinea</em&gt; Var.<em&gt; sanguinea</em

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify ...

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model organism. However, little is known about the sex-determination mechanisms found in other non-model hymenopteran taxa, such as ants. Because of the complex nature of the life cycles that have evolved in hymenopteran species, it is difficult to maintain and conduct experimental crosses between these organisms in the laboratory. Here, we describe the methods for conducting inbreeding crosses and for evaluating the success of those crosses in ant Vollenhovia emeryi. Inducing inbreeding in the laboratory using V. emeryi, is relatively simple because of the unique biology of the species. Specifically, this species produces androgenetic males, and female reproductives exhibit wing polymorphism, which simplifies identification of the phenotypes in genetic crosses. In addition, evaluating the success of inbreeding is straightforward as males can be produced continuously by inbreeding crosses, while normal males only appear during a well-defined reproductive season in the field. Our protocol allow for using V. emeryi as a model to investigate the genetic and molecular basis of the sex determination system in ant species.

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

In this protocol, methods for conducting inbreeding crosses, and for evaluating the success of those crosses, are described for the ant Vollenhovia emeryi. These protocols are important for experiments aimed at understanding the genetic basis of sex determination systems in Hymenoptera.

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

Genetik

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Davranış

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

Bireysel Tigriopus kopepodların ve kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının kültür

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Nörobilim

Yumurtalık Üreme Analizi ile Göçmen Böceklerin Tanımlanması için Diseksiyon

Dissection and Grading of Ovarian Development in Wild-Type Female Insects

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using searchlight traps. One of the most important techniques for migratory pest forecasting is to identify the migratory species. However, in most cases, it is difficult to get the information just by appearance. Therefore, using knowledge acquired by systematic analysis of the female reproductive system can help to understand the combined anatomic morphology of the ovarian mating sac and ovary developmental grading of wild-type migratory insects captured with searchlight traps. To demonstrate the applicability of this method, ovarian development status and egg grain development stages were directly assessed in Helicoverpa armigera, Mythimna separata, Spodoptera litura, and Spodoptera exigua for the ovarian anatomy, and the ovarian mating sacs were studied in Agrotis ipsilon, Spaelotis valida, Helicoverpa armigera, Athetis lepigone, Mythimna separata, Spodoptera litura, Mamestra brassicae, and Spodoptera exigua, to explore their relationships. This work shows the specific dissection method to predict wild-type migratory insects, comparing the unique reproductive system of different migratory insects. Then, both tissues, namely, the ovary and mating sacs, were further investigated. This method helps to predict the dynamics and the structural development of reproductive systems in wild-type female migratory insects.

Yazar Spotlight: Deneysel Zorlukların Üstesinden Gelmek İçin Göçmen Böceklerde Yumurtalık Anatomisinin Analizi 

The protocol demonstrates a simple and easy dissection method, suitable for wild-type migratory female insects captured with searchlight traps. This technique can significantly clarify the same species by comparing both reproductive tissues, namely the mating sac and ovarian development of wild-type female insects.

Yabani tip dişi böceklerde yumurtalık gelişiminin diseksiyonu ve derecelendirilmesi

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı<em&gt; Drosophila</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

Pinewood Nematodu gözlem ve Çiftleşme Davranış miktarının belirlenmesi,

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

A Noninvaziv Yöntemi

Tozlaşma Ekoloji Saha Deneyleri: Örneği

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bireysel Tigriopus kopepodların ve kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının kültür

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Yabani tip dişi böceklerde yumurtalık gelişiminin diseksiyonu ve derecelendirilmesi

Yabani tip dişi böceklerde yumurtalık gelişiminin diseksiyonu ve derecelendirilmesi

Yabani tip dişi böceklerde yumurtalık gelişiminin diseksiyonu ve derecelendirilmesi

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı