We would like to thank Dr. Lei Chen (Icahn School of Medicine at Mount Sinai, NY) who first established this model in our laboratory. Supported in part by HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569, and NSC 2015/17/B/NZ7/02985. Dr. Luc Bertrand is supported in part by a postdoctoral fellowship from the American Heart Association (16POST31170002).

Tüm işlemler Sağlık (NIH) kurallar National Institutes uyarınca Miami Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Steril ekipman ve aseptik teknikler kullanılması gerekmektedir. 1. Oklüzyon Sütür Hazırlanması <ol><li> 25 g ile 25 arasında fareler için 0.23 mm - - vücut ağırlığı 35 g, 20 ila fareler için 0.21 mm çapında bir dikiş kullanın. MCAO prosedürü için dikiş tipi seçimi, hayvan ağırlığına bağlıdır. </li><li> Bir gümüş kalem kullanarak, silikon kaplı ucundan başlayarak 9 mm dikiş işaretleyin. Bu ekleme uzunluğu için bir rehber olarak hizmet edecektir. </li></ol> Cerrahi 2. Hazırlık <ol><li> Bir laboratuvar anestezi sistemi kullanılarak, oksijen ile karışık izofluran ile fare anestezisi. Ticari makinede 2&#39;de 5 ve oksijen akışını ayarlama izofluran kullanın (Malzeme Tablosu bakınız). surger hayvan aktarıny yüzeyi ve bir burun konisi kullanılarak anestezi sürdürmek (1.5 ayarı kullanım izofluran - 2 2.5 ve oksijen akışını). <ol><li> saniyede 2 solunum nefes nefese kalmadan - fare solunum hızı yaklaşık 1 olduğundan emin olun. Buna ek olarak, hayvan bıyıkları stimülasyon reaksiyonu ve pedal refleks (ayak tutam) gösteren değil emin olun. Ameliyat sırasında en az her 5 dk solunum hızı ve çaba izleyin. </li></ol></li><li> İşlem sırasında kurumasını önlemek için steril bir bez kullanarak her göze göz kayganlaştırıcı bir damla koyun. Seçenek olarak ise, steril bir farmasötik borusundan göze oftalmik merhem uygulanır. </li><li> Sırtında hayvan çevirmek ve kesi alanı tıraş. Daha sonra, iyice% 70 Klorheksidin ardından etanol, ve% 70 etanol ile son bez kullanarak cerrahi alan dezenfekte. Bir stereomikroskop altında sıcak cerrahi bir yüzeye hayvan yerleştirin. </li></ol> 3. Ortak Karotis Arter diseksiyonu ve İç / External dallanma <ol><li> (- 4 cm yaklaşık 3) cerrahi makas ve forseps kullanarak, çene altına kadar göğüs kemiği yukarıdan, boyun sığ bir ensizyon gerçekleştirin. Cerrahi örtü steril olmayan yüzeylerle temas etmesini önlemek için araçlar cerrahi alanı çevresinde yerleştirilmelidir. cerrahi drape filme yardımcı olmak için geçerli video ihmal edilmiştir. </li><li> forseps dikkatle ayrı yağlı ve bağ dokusu kullanılarak trakea ortaya çıkarmak. Doku kolayca ve doğal olarak her iki taraf için ayrı olmalıdır. </li><li> ayrıca ameliyat için bölgeyi açığa boyun uzatmak için farelerin ensesine bir yastık (yuvarlak nesneyi, çapı yaklaşık 0.5 cm) yerleştirin. </li><li> Bir doku retraktörü veya kanca kullanarak kesi açın. </li><li> trakea hayvanın sol tarafında dikkatle sol karotis arter (CCA) açığa çıkarmak için bağ dokusu ayrı tweeze. CCA ile birlikte sinirler ve büyük damarları zarar vermemek için dikkatli olun. </li><li> Altta yatan dokudan ayırmak için dikkatli olmak, CCA açığa devam edin ve iç serebral arter (ICA) ve dış serebral arter (ECA) dallanma top &quot;Y&quot; maruz kalmaktadır. CCA ayrılmakta yardımcı olmak için, bağ dokusu delmek için CCA altında kavisli bir forseps yerleştirin ve sonra yavaş yavaş onları açmak için izin verir. </li></ol> MCAO Dikiş Ekleme için CCA 4. hazırlanması <ol><li> CCA altında uzunluğu yaklaşık 4 cm, naylon sütür 3 segmenti yerleştirin. Bu büyük ölçüde sütür ekleme karmaşık hale getireceği olarak CCA bükülmüş olmadığından emin olun. </li><li> en alçak noktası mümkünse, kalıcı bir düğüm kullanarak alt dikiş kapatın. </li><li> sadece ICA altında üst dikiş kravat / ECA çıkarılabilir kayma düğüm kullanarak dallanma. </li><li> Çıkarılabilir kayma düğüm kullanarak orta dikiş kravat, ama geniş açık tutmak. dikiş ekleme engel değil gibi bol bırakmak için önemlidir. </li><li> mikrodiseksiyon bahar sci kullanarakssors, alt ve orta dikiş arasında CCA bir kesi yapmak. alt sütür yakın 0.2 mm kesi gerçekleştirin. </li></ol> 5. Orta Serebral Arter Tıkanıklığı <ol><li> forseps kullanarak, üstüne o kadar yol gösterici, CCA kesi içine MCAO dikiş yerleştirin. CCA açılış pıhtılaşmayı ve kapanış önlemek için adım 4.5 sonra hızlı bir şekilde bu adımı gerçekleştirin. dikiş ekleme bloke edilmesi halinde, kesi yeniden açmak için forseps ipuçlarını kullanın. </li><li> Yavaşça etrafında kan akışını kısıtlamak için bir kayma düğüm kullanarak MCAO sütür silikon parçası üzerinde orta dikiş kravat aşağı, ama serbestçe hareket etmesine izin verecek kadar gevşek. </li><li> Dikkatle MCAO dikiş dışarı kayma yok emin olun, üst dikiş geri. </li><li> milimetrelik bir çift tarafından ICA MCAO sütür yerleştirin ve adım 5.2&#39;de tarif edildiği gibi aynı şekilde, üst dikiş tekrar kapama. </li><li> tıkanma alana MCAO dikiş Kılavuzu. Başarılı ekleme göstergesidirGümüş 9 mm işareti CCA kesi kan geri akışının düşük miktarda ve belirgin CCA insizyon ve ICA / ECA çatallanma arasında yer almaktadır. Başarılı bir oklüzyon başka bir onay da, böyle bir lazer Doppler kan akışı izleme sistemi 15, 16 ve izleme yöntemleri kullanılarak elde edilebilir. NOT: tıkalı alan tarafında orta beyin bölgesinde kan akışının% 90 bir damla başarılı tıkanıklığı gösterir. </li><li> Başarılı oklüzyon sonra sıkıca orta ve üst dikiş aşağı kravat. sahte ekleme yapmadan Eğer dikişler tekrar kapama yerine hemen 7.3 adıma geçin yok. </li></ol> 6. Kesi Kapanış ve Post-operatif Bakım <ol><li> kesi alanı içine dikişler sokmak. </li><li> toplayıcı veya doku kanca ve yastık çıkarın. </li><li> steril tuzlu su ve bir pamuklu çubuk kullanarak temizleyin dikiş alanı. </li><li> naylon sütür / iğne ve forseps kullanarak kesi kapatın. </li> &lt;li&gt; yönetme anti-inflamatuar (örneğin, karprofen, 10 mg / kg, sc) ve analjezik (örneğin, Buprenorfin, 0.1 mg / kg sc, günde iki kez) ilaçlar, ameliyat sonrası rahatsızlığı azaltmak için. hipotermi önlemek ve su ve yumuşatılmış gıda reklam labium erişim sağlamak için ısıtılmış bir pad üzerinde yerleştirilen bir kafes fareler yerleştirin. </li><li> (- 10 dk 5) ve inme belirtileri hayvanların kurtarma izleyin. Onlar hafif yanal felç değişir ve karşı kanadını ve haddeleme şiddetli kasılması çizerek yapabilirsiniz. Çeşitli değerlendirme noktaları tartışma listelenir. solunum sıkıntısı veya şiddetli nöbetler belirtisi sergileyen hayvanlar ötenazi edilmelidir. </li><li> iskemi reperfüzyon protokolüne bağlı olarak, 120 dakika veya daha fazla, 30 dakika arasında yer MCAO dikiş bırakın. tıkanma süresini azaltmak mortalite önler. </li><li> Kalıcı tıkanıklığı, ancak önemli mortalite oranı beklenebilir, 24 saat yerinde MCAO sütür bırakın. Bu süre geçtikten sonra, STE geçins 7. <ol><li> Kalıcı oklüzyon modeli kullanıyorsanız, son noktasına kadar kafeste fareler tutmak. O zaman, (7.8 7.1 adımlar) dikiş çıkarın. Bu prosedür, aynı zamanda kurban edildikten sonra gerçekleştirilebilir. </li></ol></li></ol> 7. reperfüzyon <ol><li> (2.1 yönergeleri izleyin) tekrar hayvan anestezisi ve yara kapama sütür kaldırın. </li><li> forseps ve doku ayırıcılar, kesi yeniden açın ve CCA maruz kullanma. </li><li> Dikkatli bir şekilde üst dikiş kaldırmak ve silikon kaplı bölümü orta düğüm bulunmaktadır kadar yavaşça MCAO sütür çekin. </li><li> (Bir kayma düğüm olmak zorunda değildir) sütür geçiş akan kan önlemek için sütür üst düğüm yineler. </li><li> Dikkatle orta düğüm geri almak ve üst düğüm geçmiş dikiş çekin, ama CCA içinde tutun. </li><li> Sıkıca arter kan akımını engellemek için üst düğüm kapatın. </li><li> tamamen MCAO dikiş çekin ve sıkıca orta düğüm kapatın. </li><li> MCAO dikiş olabilirdefalarca yeniden kullanılabilir. Her kullanımdan sonra, steril bir gazlı bez ile kirletici madde (örneğin, kan veya doku) çıkarmak için% 70 etanol içinde dikkatli bir şekilde dikiş temizleyin. Daha sonra, bir sterilizasyon kese içinde sütür koyun ve sterilize. </li><li> 6.4 ve hayvan ayilmanizi - Tekrar 6.1 adımları. </li></ol> 8. Doku Analizi <ol><li> Atım volümü izlemek beynini incelemek için. <ol><li> iki adımlı bir işlem kullanılarak fare Euthanize. İlk olarak, durur nefes kadar izofluran aşırı dozda hayvan maruz bırakmaktadır. TTC boyama, hemen fare başını kesmek ve beyin çıkarımı geçin. Kesit beyin (immün analizleri, örneğin, için), baş kesme öncesinde kalp ponksiyonu ile perfüzyon gerçekleştirin. </li><li> Kafatasının dibinde kafa kesti ve gözler arasında kadar kafatasının üst boyun açıklığından saç derisini kesti. kafatası maruz ile, kafa tabanı açıklığından başlayarak her iki yanı boyunca kemik kesmegöz çukurlarının kadar. Kafatasının geniş kısmı boyunca bu kesim olun. beyin zarar görmesini önlemek için makas ile çok derin ulaşmak için dikkatli olun. </li><li> Daha sonra, iki göz çukurları arasındaki kemiği kesti. </li></ol></li><li> forseps kullanarak, beyin ortaya çıkarmak için kafatasının üst yukarı kaldırın. Sadece küçük bir direnç olmalıdır. kolayca kaldırmak etmezse, kafatası kesiler eksik olabilir. nazikçe künt kavisli bir forseps kullanarak beyin dışarı kaldırın. Beyin hala birkaç sinirler tarafından takılı olabilir. Yol boyunca ekleri kaldırarak, yavaş yavaş devam edin. </li><li> , 1 mm beyin matris içinde taze beyin yerleştirin PBS birkaç damla ekleyin ve jilet veya kriyostat bıçak kullanarak matrisin boyunca dilim. </li><li> 100 mm çanak beyin transferi ve çanağın alt kapak boyama çözeltisi (% 2 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür [TTC] PBS içinde çözülmüş) ilave edilir. İki forseps kullanarak, ayrı tüm beyin dilimleri (ön aşağı bakan) ve çanak alt sırayla koyun. NOT: Boyama cansız doku beyaz kalan kırmızı canlı doku, dönecek. 37 ° C&#39;ye kadar bir çözüm Isıtma boyama hızlandıracaktır. inme alanı (beyaz) belirtileri 90 dakika sonrası inme olduğunca çabuk görülür ve fazla 7 gün boyunca görünür kalmasını olabilir. Görüntüleme atım hacmi hesaplama izin veren bir cetvel ile birlikte yapılmalıdır. </li><li> Kesit için işlem kesilir beyinleri, immüno-boyama, protein izolasyon veya diğer işlemleri 17, çeşitli 18, 19. </li></ol>

<ol>
	<li>Cuomo, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithrombin+reduces+ischemic+volume,+ameliorates+neurologic+deficits,+and+prolongs+animal+survival+in+both+transient+and+permanent+focal+ischemia.">Antithrombin reduces ischemic volume, ameliorates neurologic deficits, and prolongs animal survival in both transient and permanent focal ischemia.</a> Stroke. 38 (12), 3272-3279 (2007).</li><li>Wauquier, A., Melis, W., Janssen, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+neurological+assessment+of+the+post-resuscitative+effects+of+flunarizine,+verapamil+and+nimodipine+in+a+new+model+of+global+complete+ischaemia.">Long-term neurological assessment of the post-resuscitative effects of flunarizine, verapamil and nimodipine in a new model of global complete ischaemia.</a> Neuropharmacology. 28 (8), 837-846 (1989).</li><li>Liu, F., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Middle+cerebral+artery+occlusion+model+in+rodents:+methods+and+potential+pitfalls.">Middle cerebral artery occlusion model in rodents: methods and potential pitfalls.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 464701 (2011).</li><li>Chiu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+tissue+plasminogen+activator+for+acute+ischemic+stroke:+feasibility,+safety,+and+efficacy+in+the+first+year+of+clinical+practice.">Intravenous tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke: feasibility, safety, and efficacy in the first year of clinical practice.</a> Stroke. 29 (1), 18-22 (1998).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Liu, F., Schafer, D. P., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TTC,+fluoro-Jade+B+and+NeuN+staining+confirm+evolving+phases+of+infarction+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion.">TTC, fluoro-Jade B and NeuN staining confirm evolving phases of infarction induced by middle cerebral artery occlusion.</a> J Neurosci Methods. 179 (1), 1-8 (2009).</li><li>Liu, F., Yuan, R., Benashski, S. E., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+experimental+stroke+outcome+across+the+life+span.">Changes in experimental stroke outcome across the life span.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 29 (4), 792-802 (2009).</li><li>Wang, R. Y., Wang, P. S., Yang, Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+age+in+rats+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Effect of age in rats following middle cerebral artery occlusion.</a> Gerontology. 49 (1), 27-32 (2003).</li><li>Baskerville, T. A., Macrae, I. M., Holmes, W. M., McCabe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+gender+on+'tissue+at+risk'+in+acute+stroke:+A+diffusion-weighted+magnetic+resonance+imaging+study+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischaemia.">The influence of gender on 'tissue at risk' in acute stroke: A diffusion-weighted magnetic resonance imaging study in a rat model of focal cerebral ischaemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 36 (2), 381-386 (2016).</li><li>Cai, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+hippocampal+neural+stem+cells+and+astrocytes+and+microvascular+endothelial+cells+improve+the+memory+in+ischemic+stroke+rat.">Co-transplantation of hippocampal neural stem cells and astrocytes and microvascular endothelial cells improve the memory in ischemic stroke rat.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (8), 13109-13117 (2015).</li><li>Cheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenously+delivered+neural+stem+cells+migrate+into+ischemic+brain,+differentiate+and+improve+functional+recovery+after+transient+ischemic+stroke+in+adult+rats.">Intravenously delivered neural stem cells migrate into ischemic brain, differentiate and improve functional recovery after transient ischemic stroke in adult rats.</a> Int J Clin Exp Pathol. 8 (3), 2928-2936 (2015).</li><li>Nagai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+Administration+of+Cilostazol+Nanoparticles+Ameliorates+Acute+Ischemic+Stroke+in+a+Cerebral+Ischemia/Reperfusion-Induced+Injury+Model.">Intravenous Administration of Cilostazol Nanoparticles Ameliorates Acute Ischemic Stroke in a Cerebral Ischemia/Reperfusion-Induced Injury Model.</a> Int J Mol Sci. 16 (12), 29329-29344 (2015).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+PEP-1-GDNF+is+protective+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Intravenous PEP-1-GDNF is protective after focal cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 617, 150-155 (2016).</li><li>Hedna, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validity+of+Laser+Doppler+Flowmetry+in+Predicting+Outcome+in+Murine+Intraluminal+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion+Stroke.">Validity of Laser Doppler Flowmetry in Predicting Outcome in Murine Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion Stroke.</a> J Vasc Interv Neurol. 8 (3), 74-82 (2015).</li><li>Tajima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+measuring+cerebral+blood+flow+by+laser-Doppler+flowmetry+in+mice.">Reproducibility of measuring cerebral blood flow by laser-Doppler flowmetry in mice.</a> Front Biosci (Elite Ed). 6, 62-68 (2014).</li><li>Fang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scutellarin+regulates+microglia-mediated+TNC1+astrocytic+reaction+and+astrogliosis+in+cerebral+ischemia+in+the+adult+rats.">Scutellarin regulates microglia-mediated TNC1 astrocytic reaction and astrogliosis in cerebral ischemia in the adult rats.</a> BMC Neurosci. 16, 84 (2015).</li><li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primer+for+immunohistochemistry+on+cryosectioned+rat+brain+tissue:+example+staining+for+microglia+and+neurons.">Primer for immunohistochemistry on cryosectioned rat brain tissue: example staining for microglia and neurons.</a> J Vis Exp. (99), e52293 (2015).</li><li>Kramer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TTC+staining+of+damaged+brain+areas+after+MCA+occlusion+in+the+rat+does+not+constrict+quantitative+gene+and+protein+analyses.">TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses.</a> J Neurosci Methods. 187 (1), 84-89 (2010).</li><li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keep+warm+and+get+success:+the+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Keep warm and get success: the role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Res Bull. 101, 12-17 (2014).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+Stroke+Model+Guidelines+for+Preclinical+Stroke+Trials+(1st+Edition).">Rodent Stroke Model Guidelines for Preclinical Stroke Trials (1st Edition).</a> J Exp Stroke Transl Med. 2 (2), 2-27 (2009).</li><li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970 (1-2), 131-139 (2003).</li><li>Wolff, G., Davidson, S. J., Wrobel, J. K., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+maintains+blood-brain+barrier+integrity+during+early+stages+of+brain+metastasis+formation.">Exercise maintains blood-brain barrier integrity during early stages of brain metastasis formation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 463 (4), 811-817 (2015).</li><li>Wrobel, J. K., Wolff, G., Xiao, R., Power, R. F., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+Selenium+Supplementation+Modulates+Growth+of+Brain+Metastatic+Tumors+and+Changes+the+Expression+of+Adhesion+Molecules+in+Brain+Microvessels.">Dietary Selenium Supplementation Modulates Growth of Brain Metastatic Tumors and Changes the Expression of Adhesion Molecules in Brain Microvessels.</a> Biol Trace Elem Res. , (2015).</li><li>Chen, L., Swartz, K. R., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vessel+microport+technique+for+applications+in+cerebrovascular+research.">Vessel microport technique for applications in cerebrovascular research.</a> J Neurosci Res. 87 (7), 1718-1727 (2009).</li></ol>

Authors have no competing or conflicts of interest.

açıklanan MCAO yöntemin başarılı kullanımı serebral kan akımı anatomisinin bir anlayış büyük ölçüde bağlıdır. sütür doğru yerleştirilmesi nedeniyle doğrudan görsel ipuçları eksikliği ayırt etmek zor olduğundan, tekrarlanan uygulama araştırmacı çalışmalar için kullanmadan önce prosedür ustalaşmak önemlidir. Atım hacmi tutarlı sonuçlar sağlanması için analiz edilmelidir. bir lazer Doppler sisteminin eklenmesi kan akışının başarılı bir oklüzyon belirlemek için yardımcı olabilir ve prosedür doğru yapılır sağlamak için periyodik olarak kullanılmalıdır. tıkanma alana MCAO dikiş Yönlendirme arter manipüle ederek kolaylaştırılabilir. ECA / ICA / aşağı sola dikiş rehberlik ve önlemek için hafifçe forseps ile dallanma (2-3 mm) yukarıda ICA karşı basın dallanma geçti sadece bir kez, MCA için dikiş rehberlik yardımcı olmak için pterygopalatine artere gidiyor. Buna ek olarak, yastık hareketli adım 3.3 veya pu yerleştirilirdolum aşağıdan yukarıya düğüm ve ekleme kolaylığı arter yönlendirmede yardımcı olabilir sağa. protokol kalan adımları stereomicroscope altında mikrocerrahi içeren ve oldukça basit. % 90 - grubumuz tarafından elde edilen ve diğerleri tarafından bildirildiği gibi, açıklanan yöntemin başarı oranı yaklaşık 80 biridir. Bununla birlikte, çeşitli faktörler vücut ısısı kontrol ve sütür seçimi 20, 21, 22 de dahil olmak üzere, hayatta kalma etkileyebilir. Ameliyat sırasında, hayvan vücut sıcaklığının bakımı hayvan yaşam geliştirilmesi önemlidir. kullanıcının deneyimine bağlı olarak, bu yöntem, hayvanların büyük bir kohort çalışma için yüksek verimli bir şekilde kullanılabilir. Hayvan çalışmalarında istatistiksel anlamlılık hayvan konular arasında içsel değişim rağmen tedavi grupları arasında ayırt etmek konularında yeterli sayıda kullanılmasına bağlıdır.yakından hastalık sürecinin parçalarını yeniden ederken sunulan protokol bu tür çalışmalar sağlar. MCAO tekniğin avantajı bazı cerrahi prosedürleri içerir iken, kraniyotomi modelinde olduğu gibi oldukça invaziv prosedürler gerektirmez olmasıdır. Buna ek olarak, bu yüksek tekrarlanabilir ve reperfüzyon endotelin-1 ya da embolik inme modelleri kullanılarak mümkün olmayan, yüksek şekilde kontrol edilebilir. teknik yakın insan iskemik inme işlemi taklit ve Fototromboz modeli için geçerli değildir, insanlarda görülen karakteristik doku yaralanması, üretir. Diğer geçme teknikleri ile karşılaştırıldığında, MCAO prosedürü ECA&#39;nın koterizasyon gerektirmez. Inme indüksiyonu 23, 24, 25, aşağıdaki etkilenen yarımkürede terapötik ajanları vermek için ICA enfüzyon modeli ile kombine edilebilir, çünkü bu bir avantajdır. doku analizi yanı sıra, hayvan davranışı uzunlamasına inme şiddeti ve kurtarma değerlendirmek için izlenebilir. Bu, farklı tedavi grupları arasında kurtarma karşılaştırmak yardımcı olabilir. Çeşitli yaklaşımlar davranışını değerlendirmek amacıyla geliştirilmiştir. Hiçbir davranış açığı, 1: Basit 5 noktalı ölçek nörolojik defisit sonrası inme (0 değerlendirmek için kullanılabilecek hiçbir kontralateral forepaw uzantısı; 2: infarkt karşı tarafta Turlu; 3: infarkt karşı tarafta Falling; 4: düşük bilinç düzeyi ve spontan hareket) 5. Buna ek olarak, hayvan durumuna ve davranış derinlemesine analiz Tablo 1 1, 2&#39;de tarif edildiği gibi bir iyileşme değerlendirmek için yapılabilir. sunulan cerrahi prosedür inme yatkınlık çalışmalarının bu tekniğin kullanımını sınırlar inme indüksiyon için mekanik bir yöntem kullanır ve / veyaetkenler. Ancak, bu protokol analiz inme şiddeti önleyici veya hafifletici stratejileri, ağırlaştırıcı faktörler ve olası terapötik dikkat çekici yararlı olabilir sonrası felç yaklaşır. Tedavi grupları arasında karşılaştırılması inme zararı en aza indirmek veya iyileşmeyi hızlandırır potansiyel tedavi belirlenmesinde yardımcı olabilir. Nitekim, geri kazanımının arttırılması inme hastaları yardım büyük önem olurdu.

Kardiyovasküler hastalık çalışması, felç gibi, in vivo modellerin kullanılması ile ilgilidir. iskemi, toksisite ve / veya tedavinin olası ima anlamak için, tedavi grupları arasındaki karşılaştırmalı incelemeler sağlayan hastalık, bir uygun standart, güvenilir ve yeniden üretilebilir bir modelini kullanmak için bir ihtiyaç vardır. Bu yazıda, transgenik fareler ve standardize değerlendirme modellerinin çok sayıda varlığı göz önüne alındığında, fareler kullanıyor. Deneysel iskemik inme ve aşağıdaki kurtarma aşağıdaki motor ve davranış açıkları değerlendirmek için puanlar yan yatan, 2 1 geliştirilmiştir. Birkaç iskemik inme modelleri, tam global serebral iskemi, eksik global iskemi, multifokal serebral iskemi ve fokal serebral iskemi gibi, mevcuttur. ikinci grup da hastalarda en sık inme kategorisidir. arifesinde çoğunluğunts veya orta serebral arter (MCA) yakınındaki embolik veya trombotik tıkanma oluşumunda tarafından başlatılmaktadır. Bu parametreler göz önüne alındığında, yakından sunulan model insan inme hastalığı etyolojisi taklit ve son derece alakalı 3 elde edilen sonuçları yapar. Bununla birlikte, insanlarda hastalık tedavisine hayvan modellerinde elde edilen bulgular için zor olduğu kanıtlanmıştır. Şimdiye kadar, trombolitik doku plazminojen aktivatörü, sadece kullanımı akut iskemik felç 4 tedavisi için onaylanmıştır. Fare fokal serebral iskemi, posterior serebral dolaşım inme modeli ve serebral venöz tromboz modeli modelleri arasında uygulanabilirliğini azalan ve yapılabilir analizlerin aralığını kısıtlayan, son derece invaziv. Bununla birlikte, bu embolik modeli Fototromboz modeli, endotelin-1 kaynaklı inme modelinde ve lümen içi ameliyat dikiş ipliği, orta serebral arter oklüzyonu (M gibi diğer teknikler,CAO) modeli, bu sınırlamalar olarak kullanılmak için kullanılabilir. MCAO modeli bu protokolü açıklanan bir tekniktir. Bu hali hazırda uygulandı ve yüksek verimli bir şekilde gerçekleştirilebilir, fokal serebral iskemi uyarılması için güvenilir bir yöntem sunar. Bu modelde, yani Zea-Longa ve Koizumi yöntemlerine iki yaklaşım vardır. Onlar tıkanıklığı sütür damarsal takılı şekilde biraz farklıdır. Zea-Longa teknikte, dikiş eksternal karotid arter 5 üzerinden sokulur. Burada sunulan teknik, tıkayıcı ameliyat dikiş ipliği karotis arter 6 üzerinden sokulduğu Koizumi yöntemi değiştirilir. MCAO modeli başarıyla iskemik inme sırasında meydana gelen farklı etkinlikler değerlendirmek için uygulanmıştır. reperfüzyonu takiben beyin ödemi, kan-beyin bariyerinin bozulması ile birlikte görülmektedir. Tepe nöronal ölüm genellikle 24 saatte görülmektedir; Bununla birlikte, bu yeniden7 gün 7 sonra bazal düzeylere döner. İnsanlarda, cinsiyet ve yaş inme sonucu belirlenirken, bu da fareler ve sıçanlar 8, 9, 10 görülmektedir önemli değişkenlerdir. Birkaç yayın, tedavi etkinliği, 11, 12, 13, 14 göstermek için MCAO-modelindeki kullandık.

<table><tbody><tr><td>MCAO suture 0.23 mm</td><td>Doccol</td><td>702345PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>MCAO suture 0.21 mm</td><td>Doccol</td><td>702145PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Silver pen</td><td>staples</td><td>503205</td><td></td></tr><tr><td>Anesthesia machine</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Surgical scissors</td><td>Fine science tool</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>Surgical forceps straight tip</td><td>Fine science tool</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>Surgical forceps angled tip</td><td>Fine science tool</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>Spring scissors</td><td>Fine science tool</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Nylon suture</td><td>Braintree scintific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>Closing suture</td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td><td>FisherSci</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr><tr><td>Brain block</td><td>Braintree scintific</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat blade</td><td>VWR</td><td>89202-606</td><td></td></tr><tr><td>Optional:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Periflux Laser doppler system</td><td>Perimed</td><td>Periflux 5000</td><td></td></tr><tr><td>Monitoring unit</td><td>Perimed</td><td>PF 5010 - LDPM</td><td></td></tr></tbody></table>

induction of ischemic stroke and ischemia-reperfusion in mice using the middle artery occlusion technique and visualization of infarct area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of stroke on tissue injury and to evaluate the effectiveness of therapeutic interventions, several experimental models in a variety of species were developed. They include complete global cerebral ischemia, incomplete global ischemia, focal cerebral ischemia, and multifocal cerebral ischemia. The model described in this protocol is based on the middle cerebral artery occlusion (MCAO) and is related to the focal ischemia category. This technique produces consistent focal ischemia in a strictly defined region of the hemisphere and is less invasive than other methods. The procedure described is performed on mice, given the availability of several genetic variants and the high number of tests standardized for mice to aid in the behavioral and neurodeficit evaluation.

Oklüzyon dikiş için yerleştirme yolu Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. MCAO sütür ICA çatallanan, tıkanma alanına yönlendirilmesi gerekmektedir. MCA Başarılı tıkanma TTC boyama ile görünür doku yaralanması, yol açacaktır. Şekil 2, (90 dakika veya 24 saat sonra-oklüzyonu, Şekil 2B de boyama) plasebo tedavi gören bir hayvandan (Şekil 2A) ve 60 dakika MCAO iskemi reperfüzyon hayvandan gelen lekelenme görüntüler sunar. strok hacmini belirlemek için, öncelikle karşı taraf toplam alanından ipsilateral tarafta olmayan infarkt alanını çıkarılarak, cetvel görüntüleme prosedürüne dahil kullanarak, her bölüm için inme alanı hesaplamak. Bu hesaplama ticari yazılım veya açık kaynak yazılımı kullanılarak yapılabilir. Daha sonra, slaytlar 1 mm kalınlığında olduğu her dilim dikkate alınarak için strok hacmini hesaplamak ve fo inme hacimleri toplamıtüm dilimleri r. Bu prosedür daha sonra farklı hayvan grupları ve tedaviler arasında karşılaştırılabilir Her bir hayvan için toplam strok hacmi sağlar. Ortalama olarak, 60 dakika oklüzyon 15 haftalık vahşi tür işlenmemiş C57BL / 6J fareler, yaklaşık 21 ± 3 mm3 bir hareket hacminde reperfüzyon sonuçları 23 saat eklenmiştir. Vuruş hacmi araştıran ilave olarak, immünofloresan astrogliyozun nöronal hasar (Şekil 3A) ya da glial fibriler asidik protein (GFAP) için bu tür mikrotübüle bağlı protein-2 (MAP2) halinde hedef, çok sayıda (Şekil 3B) için gerçekleştirilebilir. Bu tür analizler ayrıca inme ilerlemesi ve kurtarma analizinin yanı sıra inme doku hasarı ve onarımı dahil diğer işlemler etkinleştirin. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54805/54805fig1.jpg" /> Şekil 1: </st<html> Rong&gt; Beyin Arter Fizyoloji şematik gösterimi. tıkanma alanına karotid arter (CCA) adlı MCAO ekleme gelirlerinin Rota mavi belirtti. (:;: Orta sütür; BS: Alt sütür MS Üst sütür TS) cerrahi alanı şekil (Oval şekil) ve sütür yerleştirme dibinde yer almaktadır siyah çizgiler ile gösterilir. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54805/54805fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54805/54805fig2.jpg" /> Şekil 2: Beyin Bölümlerinin TTC Boyama. Üst panel sahte ekleme aşağıdaki tipik boyama temsil etmektedir. Orta ve alt paneller 90 dakika ya da 24 saatlik bir reperfüzyon takip 60 dakikalık MCAO sonra elde edildi. Ölçek çubuğu 1 mm&#39;dir. 3 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54805 / 54805fig3.jpg &quot;/&gt; Şekil 3: Stroke sonrasında Fare Beyin İmmünofloresan Boyama. 60 dakikalık bir oklüzyonundan sonra, beyinleri, 23 saat boyunca reperfüzyon toplanmış ve cryosectioning işlenmiştir. MAP2&#39;nin (üst) ve GFAP (alt) antikorlar kullanılarak, doku nöronal hasar ve astroglyosis plasebo (sol panel) ya da 90 dakika iskemi-reperfüzyon beyinleri (sağ panel) için analiz edildi. sunulan resimler 10X objektif kullanılarak konfokal mikroskobu ile çekilen çoklu görüntülerden birleştirilir. Ölçek çubuğu 1 mm&#39;dir. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54805/54805fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Değerlendirme Kriterleri </td><td></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td> Genel durum </td><td> Saç koşulu </td><td colspan="3"> Kendi kendini temizleme davranışı (0: Yok; 2: Normal) </td></tr><tr><td> (0: Kötü; 2: Normal) </td><td> Kulaklar </td><td colspan="3"> Kulaklar pozisyon (Droopy veya kabartma) </td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> İşitme (Reaktif ya da değil) </td></tr><tr><td></td><td> Göz koşulu </td><td colspan="3"> Göz kapağı pozisyon </td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> yanıt </td></tr><tr><td></td><td> Duruş </td><td colspan="3"> , Emekleme eğilerek normal </td></tr><tr><td></td><td> spontan aktivite </td><td colspan="3"> Bilinçsiz / hiçbir hareket, düşük aktivite, normal bir aktivite </td></tr><tr><td> nörolojik bozukluk </td><td> Vücut simetrisi </td><td colspan="3"> Fare (Hiçbir hareket, emekleme, çizerek, kısmi yaslanmış, normal) hala olduğunda </td></tr><tr><td> (0: Kötü; 4: Normal) </td><td> yürüyüş </td><td colspan="3"> Hiçbir hareket, döndürme, bir tarafa yürüyerek, çember, normal </td></tr><tr><td></td><td> Tırmanma </td><td colspan="3"> açılı yolda davranışı Walking (Gait aynı kriterleri) </td></tr><tr><td></td><td> çevreleme davranış </td><td colspan="3"> kuyruk hayvan Kaldırma (yanları ancak tercih, her ikisi de hiçbir hareket, dönen bir tarafa sözleşme, normal) </td></tr><tr><td></td><td> Ön bacak simetri </td><td colspan="3"> ön pençeleri davranışını kapma bak (Hayır, sadece bir tarafı kapmak, tüm kapma kapmak ama bir pençe sert, hem de yakala ama hem tek sürekli gevşek ilk normal) </td></tr><tr><td></td><td> Zorunlu çevreleme </td><td colspan="3"> düz bir yüzeye fare koymak ve yan omuz itin (dönen bir tarafa düşen, itmek dirençle eğilerek, Yanıt yok / hareket, normal) </td></tr><tr><td></td><td> bıyık tepkisi </td><td colspan="3"> anda bıyık bir tarafına dokunun (gövde çevirmek, cevap yok, bıyık hareket sadece başınızı açın, normal)</td></tr><tr><td></td><td> epileptik davranış </td><td colspan="3"> Ani gürültü veya ışık değişim (Bilinçdışı, tutarlı genel tonik spazm, geçici genel tonik spazm, geçici fokal tonik spazm, normal) sonra davranış </td></tr></tbody></table> İskemi İnme sonrasında Fare Durumu ve nörolojik bozukluk Değerlendirilmesi Tablo 1. Ölçek. 2, 1 uyarlanmıştır.

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area at JoVE.com

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

induction-ischemic-stroke-ischemia-reperfusion-mice-using-middle

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

16.2K Görüntüleme.  University of Miami. We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

Video: Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Nörobilim

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Tıp

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Stroke is the third cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic stroke accounts for approximately 80% of all strokes. However, the thrombolytic tissue plasminogen activator (tPA) is the only treatment of acute ischemic stroke that exists. This led researchers to develop several ischemic stroke models in a variety of species. Two major types of rodent models have been developed: models of global cerebral ischemia or focal cerebral ischemia. To mimic ischemic stroke in patients, in whom approximately 80% thrombotic or embolic strokes occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), the intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is quite relevant for stroke studies. This model was first developed in rats by Koizumi et al. in 1986 1. Because of the ease of genetic manipulation in mice, these models have also been developed in this species 2-3.
	Herein, we present the transient MCA occlusion procedure in C57/Bl6 mice. Previous studies have reported that physical properties of the occluder such as tip diameter, length, shape, and flexibility are critical for the reproducibility of the infarct volume 4. Herein, a commercial silicon coated monofilaments (Doccol Corporation) have been used. Another great advantage is that this monofilament reduces the risk to induce subarachnoid hemorrhages. Using the Zeiss stereo-microscope Stemi 2000, the silicon coated monofilament was introduced into the internal carotid artery (ICA) via a cut in the external carotid artery (ECA) until the monofilament occludes the base of the MCA. Blood flow was restored 1 hour later by removal of the monofilament to mimic the restoration of blood flow after lysis of a thromboembolic clot in humans. The extent of cerebral infarct may be evaluated first by a neurologic score and by the measurement of the infarct volume. Ischemic mice were thus analyzed for their neurologic score at different post-reperfusion times. To evaluate the infarct volume, staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) was usually performed. Herein, we used cresyl violet staining since it offers the opportunity to test many critical markers by immunohistochemistry. In this video, we report the MCAO procedure; neurological scores and the evaluation of the infarct volume by cresyl violet staining.

The intraluminal middle cerebral occlusion model in mice is herein presented. The extent of cerebral infarct is evaluated by a neurologic score and cresyl violet staining, an alternative staining to TTC, offering the great advantage to test in parallel many interest markers.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue plasminogen activator (tPA) as an approved drug treatment to target ischemic strokes. Current research in the field of ischemic stroke focuses on better understanding the pathophysiology of stroke, to develop and investigate novel pharmaceutical targets. Reliable experimental stroke models are crucial for the progression of potential treatments. The middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is clinically relevant and the most frequently used surgical model of ischemic stroke in rodents. However, the outcomes of this model, such as lesion volume, are associated with high levels of variability, particularly in mice. The alternative MCAO model described here allows the reperfusion of the common carotid artery (CCA) and the increased perfusion of the middle cerebral artery (MCA) territory, using a tissue pad with fibrinogen-based sealant to repair the vessel, and the improved welfare of the mice by avoiding external carotid artery (ECA) ligation. This reduces the reliance on the Circle of Willis, which is known to be highly anatomically variable in mice. Representative data show that using this alternative surgical approach decreases the variability in lesion volumes between the traditional MCAO approach and the alternative approach described here.

Intraluminal filament occlusion of the middle cerebral artery is the most frequently used in vivo model of experimental stroke in rodents. An alternative surgical approach to allow common carotid artery repair is performed here, which allows the reperfusion of the common carotid artery and a full reperfusion to the middle cerebral artery territory.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Orta serebral arter tıkanıklığı ile geçici serebral iskemi modeli

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Stroke

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies during the acute phase of ischemic stroke. To gain insights into stroke physiopathology and develop innovative therapeutic approaches, in vivo rodent models of stroke play a fundamental role. The availability of genetically modified animals has particularly propelled the use of mice as experimental stroke models.
In stroke patients, occlusion of the middle cerebral artery (MCA) is a common occurrence. Consequently, the most prevalent experimental model involves intraluminal occlusion of the MCA, a minimally invasive technique that doesn't require craniectomy. This procedure involves inserting a monofilament through the external carotid artery (ECA) and advancing it through the internal carotid artery (ICA) until it reaches the branching point of the MCA. After a 45 min arterial occlusion, the monofilament is removed to allow reperfusion. Throughout the process, cerebral blood flow is monitored to confirm the reduction during occlusion and subsequent recovery upon reperfusion. Neurological and tissue outcomes are evaluated using behavioral tests and magnetic resonance imaging (MRI) studies.

Yazar Spotlight: Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli ile İskemik İnme Hasarının Değerlendirilmesi 

This protocol describes the model of transient focal cerebral ischemia in mice through intraluminal occlusion of the middle cerebral artery. Additionally, examples of outcome assessment are shown using magnetic resonance imaging and behavioral tests.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies ...

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli