Name: nasal wipes for influenza a virus detection and isolation from swine
Uploaded: 2015-12-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine at JoVE.com

This work has been funded in part with federal funds from the Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS), National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, under Contract No. HHSN272201400006C.

Aşağıdaki veri toplanmasında kullanılan tüm domuz Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu koruma altına alınmıştır (hayvan kullanım protokol numarası 2009A0134-R1). 1. Viral Transport Orta Hazırlanması ve Numune Toplama Flakon <ol><li> Saf su 900 ml beyin kalp infüzyon 37 g eklenir ve ısıtma 70 ° C, tamamen tozu çözmek için ise, bir karıştırma çubuğu ve manyetik bir karıştırıcı ile iyice karıştırın. </li><li> 15 dakika boyunca 121 ° C&#39;de suyu otoklava. Suyu kadar tezgah üstünde Serin oda sıcaklığını ulaşır. 4 ° C &#39;de bir gece buzdolabında gerekirse. </li><li> Bir manyetik karıştırma çubuğu, Penisilin G Sodyum tuzu 6,02 g, oda sıcaklığında saflaştırılmış su içinde 50 ml streptomisin sülfat, 10 g ile karıştırılarak, eritin. 100 ml toplam hacmi getirmek için ilave saf su ekleyin. Steril şişe içine 0,22 um polietersülfon zarından solüsyonu filtre. </li><li> Aseptik soğutmalı Beyin Kalp İnfüzyon Broth içine süzülmüş penisilin ve streptomisin çözüm ekleyin ve viral taşıma ortamı yapmak için iyice (karıştırma çubuğu ya da elle girdap şişesi) karıştırınız. </li><li> Aseptik viral taşıma ortamı pH testi; Gerekirse, HCI veya NaOH kullanılarak 7.4 ± 0.2 pH ayarlamak. </li><li> Zhang ve Harmon tarafından anlatıldığı gibi, RRT-PCR ile influenza A virüs matriks protein test ederek viral taşıma ortamında kalite güvence testleri gerçekleştirin. 22 </li><li> 8 ml kapasiteli steril, yüksek yoğunluklu polietilen şişeler içine viral taşıma ortamının 5 ml koyun. Alanında kullanım için şişeleri etiketleyin. </li><li> Numune toplama kadar -20 ° C&#39;de standart bir kriyo-kutularda hazır kullanım şişeleri saklayın. </li></ol> Domuz adlı Burun Mendil 2. Koleksiyonu <ol><li> Toplama örnek hemen önce şişeleri uygun sayıda çözülme; tek şişe örneklenmiş domuz başına ihtiyaç duyulacaktır. Odasında çözündüktensıcaklığı yaklaşık 30-45 dakika sürer. Çözülmüş şişeleri kullanılana kadar buz paketleri üzerinde serin tutun. </li><li> Don uygun kişisel koruyucu ekipman durumdan tarafından dikte (örn tulumlar, çizme kapakları, solunum, kulak tıkacı,) olarak. </li><li> Hayvan alanını girin. Gerekirse, küçük bir alana domuz sınırlandırmak ama dizginlemek hayır yoktur. Hayvanları dinlenme canlandırmak etmeyin. </li><li> Tek kullanımlık sınav bir çift eldiven giyin. Dokunmadan domuz, insanlar, ya da cansız nesneler tarafından eldiven kontamine etmemeye dikkat edin. </li><li> (2 ile. Büyük × 2.) 5.08 cm x 5.08 cm steril kaldırmak için bir eldivenli elinizi kullanın pamuklu gazlı bez ambalajından. Steril gazlı bez, mümkün kullanılmalıdır. Bireysel sarılı gazlı bez paket başına iki gazlı bez ile sarılmış olanlar daha kullanmak daha uygundur. </li><li> Bir elin parmak uçları örnekleme için mümkün olduğunca ped kadar açığa pamuk gazlı bez tutun. </li><li> Alarak, domuz burnu genelinde gazlı bez silinMümkünse ekstra bakım harici burun deliğine girmek için. Aynı gazlı bezle görünür burun salgıları (yaklaşık 1 ml) toplayın. </li><li> Aynı eli kullanarak, viral transport medium içeren flakon yerleştirilmesini kolaylaştırmak için kendi üzerine gazlı bez katlayın. </li><li> Diğer elinizi kullanarak, şişenin kapağını kaldırın ve şişenin içine katlanmış gazlı bez yerleştirin. Şişeyi tekrarlamak ve gazlı bezle ve viral taşıma ortamı karışmasını sağlamak için şişeyi sallayın. </li><li> Uygun bir kabın içinde eldiven ve yer çıkarın. Her domuz arasındaki eldiven değiştirin. </li><li> Şişe tanımlayıcı doğrulayın. Kayıt domuz kimlik numarası, yaş, cinsiyet, klinik bulgular ve araştırmacı tarafından gerekli görülen diğer notlar. </li><li> Toplandıktan hemen sonra numuneleri Chill. Birden donma-çözülme döngüleri önlemek için dondurmadan önce örnek hacimde yapma düşünün. En kısa sürede toplandıktan sonra mümkün olduğunca, laboratuara taşınması için kuru buz üzerinde örnekleri yerleştirin. Şişeleri de saklayın -80Test başlayana kadar ° C. </li></ol> 3. Tespit Gribi A Virüsü Nükleik Asit <ol><li> 5 dakika boyunca 37 ° C kuru boncuk banyosunda örnekleri çözülme ve daha sonra 20-30 dakika için oda sıcaklığında, bir tezgah üstünde örnekleri çözülme tamamlanır. Boncuklara birkaç flakon eş-zamanlı ilavesinin banyosu ısıya neden olur; dikkatli şişeleri ısınmasına değil gibi olunmalıdır. </li><li> RNA ekstraksiyonu için viral taşıma ortamının 100 ul çıkarın. <ol><li> Örneklerin çok sayıda RNA çıkarmak için yüksek verim (96 oyuklu plaka formatı) manyetik boncuk platformu kullanın. 31 </li></ol></li><li> Hızlı algılama influenza A virüs için gerçek zamanlı ters transkriptaz PCR deneyleri kullanın. 31 </li></ol> Grip 4. İzolasyon Burun Mendil A Virüsü <ol><li> Bölüm 3.1&#39;de tarif edildiği gibi numuneler çözülme </li><li> (1000 gentamisin sülfat ile çözülmüş örnekleri tedavi| ig / ml), amfoterisin B (22.5 ug / ml) ve kanamisin sülfat (325 ug / ml). </li><li> Madin-Darby Köpek Böbrek içine inoküle (MDCK), daha önce tarif edildiği gibi epitel hücreleri. 32 </li></ol>

<ol>
	<li>Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pig+as+a+mixing+vessel+for+influenza+viruses:+Human+and+veterinary+implications.">The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications.</a> J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).</li><li>Nelson, M. I., Vincent, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+zoonosis+of+influenza+to+swine:+new+perspectives+on+the+human-animal+interface.">Reverse zoonosis of influenza to swine: new perspectives on the human-animal interface.</a> Trends Microbiol. 23, (2015).</li><li>Zhou, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+reassortment+of+avian,+swine,+and+human+influenza+A+viruses+in+American+pigs.">Genetic reassortment of avian, swine, and human influenza A viruses in American pigs.</a> J. Virol. 73 (10), 8851-8856 (1999).</li><li>Webby, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+swine+H3N2+influenza+viruses+in+the+United+States.">Evolution of swine H3N2 influenza viruses in the United States.</a> J. Virol. 74 (18), 8243-8251 (2000).</li><li>Vincent, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+influenza+A+virus+in+swine+worldwide:+a+call+for+increased+surveillance+and+research.">Review of influenza A virus in swine worldwide: a call for increased surveillance and research.</a> Zoonoses Public Health. 61 (1), 4-17 (2014).</li><li>Karasin, A. I., Olsen, C. W., Anderson, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+characterization+of+an+H1N2+influenza+virus+isolated+from+a+pig+in+Indiana.">Genetic characterization of an H1N2 influenza virus isolated from a pig in Indiana.</a> J. Clin. Microbiol. 38 (6), 2453-2456 (2000).</li><li>Zhou, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+H3N2+reassortant+influenza+A+viruses+in+North+American+pigs.">Emergence of H3N2 reassortant influenza A viruses in North American pigs.</a> Vet. Microbiol. 74 (1-2), 47-58 (2000).</li><li>Corzo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+Surveillance+for+Influenza+A+Virus+among+Swine,+Midwestern+United+States,+2009-2011.">Active Surveillance for Influenza A Virus among Swine, Midwestern United States, 2009-2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 19 (6), 954-960 (2013).</li><li>Lorusso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+antigenic+characterization+of+H1+influenza+viruses+from+United+States+swine+from+2008.">Genetic and antigenic characterization of H1 influenza viruses from United States swine from 2008.</a> J. Gen. Virol. 92 (Pt 4), 919-930 (2011).</li><li>Loving, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+in+pigs+of+inactivated+and+live+attenuated+influenza+virus+vaccines+against+infection+and+transmission+of+an+emerging+H3N2+similar+to+the+2011-2012+H3N2v.">Efficacy in pigs of inactivated and live attenuated influenza virus vaccines against infection and transmission of an emerging H3N2 similar to the 2011-2012 H3N2v.</a> J. Virol. 87 (17), 9895-9903 (2013).</li><li>Vincent, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+inactivated+swine+influenza+virus+vaccines+against+the+2009+A/H1N1+influenza+virus+in+pigs.">Efficacy of inactivated swine influenza virus vaccines against the 2009 A/H1N1 influenza virus in pigs.</a> Vaccine. 28 (15), 2782-2787 (2010).</li><li>Smith, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+evolutionary+genomics+of+the+2009+swine-origin+H1N1+influenza+A+epidemic.">Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic.</a> Nature. 459 (7250), 1122-1125 (2009).</li><li>Vijaykrishna, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassortment+of+Pandemic+H1N1/2009+Influenza+A+Virus+in+Swine.">Reassortment of Pandemic H1N1/2009 Influenza A Virus in Swine.</a> Science. 328 (5985), 1529 (2010).</li><li>Ducatez, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+Reassortment+between+Pandemic+(H1N1)+2009+and+Endemic+Influenza+Viruses+in+Pigs,+United+States.">Multiple Reassortment between Pandemic (H1N1) 2009 and Endemic Influenza Viruses in Pigs, United States.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (9), 1624-1629 (2011).</li><li>Jhung, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outbreak+of+variant+influenza+A(H3N2)+virus+in+the+United+States.">Outbreak of variant influenza A(H3N2) virus in the United States.</a> Clin. Infect. Dis. 57 (12), 1703-1712 (2013).</li><li>Vincent, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+influenza+A+virus+isolated+from+pigs+during+an+outbreak+of+respiratory+disease+in+swine+and+people+during+a+county+fair+in+the+United+States.">Characterization of an influenza A virus isolated from pigs during an outbreak of respiratory disease in swine and people during a county fair in the United States.</a> Vet. Microbiol. 137 (1-2), 51-59 (2009).</li><li>Killian, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Infection+of+Pigs+and+People+with+Triple-Reassortant+Swine+Influenza+Virus+H1N1+at+a+U.S.+County+Fair.">Simultaneous Infection of Pigs and People with Triple-Reassortant Swine Influenza Virus H1N1 at a U.S. County Fair.</a> Zoonoses Public Health. 60 (3), 196-201 (2013).</li><li>Wong, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outbreak+of+influenza+A+(H3N2)+variant+virus+infection+among+attendees+of+an+agricultural+fair,+Pennsylvania,+USA,+2011.">Outbreak of influenza A (H3N2) variant virus infection among attendees of an agricultural fair, Pennsylvania, USA, 2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1937-1944 (2011).</li><li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+evidence+for+interspecies+transmission+of+H3N2pM/H3N2v+influenza+A+viruses+at+an+Ohio+agricultural+fair,+July+2012.">Molecular evidence for interspecies transmission of H3N2pM/H3N2v influenza A viruses at an Ohio agricultural fair, July 2012.</a> Emerg. Microbes. Infect. 1 (10), e33 (2012).</li><li>Wells, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swine+influenza+virus+infections.+Transmission+from+ill+pigs+to+humans+at+a+Wisconsin+agricultural+fair+and+subsequent+probable+person-to-person+transmission.">Swine influenza virus infections. Transmission from ill pigs to humans at a Wisconsin agricultural fair and subsequent probable person-to-person transmission.</a> JAMA. 265 (4), 478-481 (1991).</li><li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swine-to-human+transmission+of+influenza+A(H3N2)+virus+at+agricultural+fairs,+Ohio,+USA,+2012.">Swine-to-human transmission of influenza A(H3N2) virus at agricultural fairs, Ohio, USA, 2012.</a> Emerg. Infect. Dis. 20 (9), 1472-1480 (2012).</li><li>Bowman, A. S., Nolting, J. M., Nelson, S. W., Slemons, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclinical+influenza+virus+A+infections+in+pigs+exhibited+at+agricultural+fairs,+Ohio,+USA,+2009-2011.">Subclinical influenza virus A infections in pigs exhibited at agricultural fairs, Ohio, USA, 2009-2011.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1945-1950 (2012).</li><li>Gray, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A(H1N1)pdm09+Virus+among+Healthy+Show+Pigs,+United+States.">Influenza A(H1N1)pdm09 Virus among Healthy Show Pigs, United States.</a> Emerg. Infect. Dis. 18 (9), 1519-1521 (2012).</li><li>Van Reeth, K., Brown, I. H., Olsen, C. W., Zimmerman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+40,+Influenza+virus.">Ch. 40, Influenza virus.</a> Diseases of Swine. , 557-571 (2012).</li><li>Culhane, M. R., Detmer, S. E., Spackman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+21,+Sample+types,+collection,+and+transport+for+influenza+A+viruses+of+swine.">Ch. 21, Sample types, collection, and transport for influenza A viruses of swine.</a> Methods in Molecular Biology. Animal Influenza Virus, 259-263 (2014).</li><li>Sheldon, C. C., Sonsthagen, T., Topel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Animal Restraint for Veterinary Professionals. , (2006).</li><li>Detmer, S. E., Patnayak, D. P., Jiang, Y., Gramer, M. R., Goyal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Influenza+A+virus+in+porcine+oral+fluid+samples.">Detection of Influenza A virus in porcine oral fluid samples.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 23 (2), 241-247 (2011).</li><li>Goodell, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probability+of+detecting+influenza+A+virus+subtypes+H1N1+and+H3N2+in+individual+pig+nasal+swabs+and+pen-based+oral+fluid+specimens+over+time.">Probability of detecting influenza A virus subtypes H1N1 and H3N2 in individual pig nasal swabs and pen-based oral fluid specimens over time.</a> Vet. Microbiol. 166 (3-4), 3-4 (2013).</li><li>Romagosa, A., Gramer, M., Joo, H. S., Torremorell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+of+oral+fluids+for+detecting+influenza+A+virus+in+populations+of+vaccinated+and+non-vaccinated+pigs.">Sensitivity of oral fluids for detecting influenza A virus in populations of vaccinated and non-vaccinated pigs.</a> Influenza Other Respir. Viruses. 6 (2), 110-118 (2012).</li><li>Edwards, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+snout+wipe+samples+for+influenza+A+virus+surveillance+in+exhibition+swine+populations.">Utility of snout wipe samples for influenza A virus surveillance in exhibition swine populations.</a> Influenza Other Respir. Viruses. 8 (5), 574-579 (2014).</li><li>Zhang, J., Harmon, K. M., Spackman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+23,+RNA+extraction+from+swine+samples+and+detection+of+influenza+A+virus+in+swine+by+real-time+RT-PCR.">Ch. 23, RNA extraction from swine samples and detection of influenza A virus in swine by real-time RT-PCR.</a> Animal Influenza Virus. , 277-293 (2014).</li><li>Zhang, J., Gauger, P. C., Spackman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+22,+Isolation+of+swine+influenza+virus+in+cell+cultures+and+embryonated+chicken+eggs.">Ch. 22, Isolation of swine influenza virus in cell cultures and embryonated chicken eggs.</a> Animal Influenza Virus. , 265-276 (2014).</li><li>Bowman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inability+to+Screen+Exhibition+Swine+for+Influenza+A+Virus+Using+Body+Temperature.">The Inability to Screen Exhibition Swine for Influenza A Virus Using Body Temperature.</a> Zoonoses Public Health. , (2015).</li><li>Prickett, J. R., Kim, W., Simer, R., Yoon, K. J., Zimmerman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral-fluid+samples+for+surveillance+of+commercial+growing+pigs+for+porcine+reproductive+and+respiratory+syndrome+virus+and+porcine+circovirus+type+2+infections.">Oral-fluid samples for surveillance of commercial growing pigs for porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine circovirus type 2 infections.</a> J. Swine Health Prod. 16 (2), 86-91 (2008).</li><li>Prickett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Porcine+reproductive+and+respiratory+syndrome+virus+infection+in+porcine+oral+fluid+samples:+a+longitudinal+study+under+experimental+conditions.">Detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in porcine oral fluid samples: a longitudinal study under experimental conditions.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 20 (2), 156-163 (2008).</li><li>Pepin, B., Liu, F. F., Main, R., Ramirez, A., Zimmerman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collection+of+oral+fluid+from+individually+housed+sows.">Collection of oral fluid from individually housed sows.</a> J. Swine Health Prod. 23 (1), 35-37 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Polyester uçlu nasal swapları ile domuz örnekleri toplanması IAV gözetim yürütülmesi yararlı olduğu kanıtlanmıştır; Ancak, nazal sürüntü prosedürünün kullanılması kısıtlama için tuzak gerekli kullanımı nedeniyle gözetim çabalarını engellemektedir. Burun mendil numune toplama sırasında insanlar ve domuzlar üzerinde stresi en aza indirmek için mevcut domuz örnekleme teknikleri bir arıtma temsil etmektedir. Yöntem için geliştirilen ve sergi domuz ayarlarında valide edilmiş olsa da domuzlarda IAV ve ölüm öncesi algılama gerekli olduğu, kolayca diğer durumlara uygulanabilir (yani ticari domuz, canlı hayvan pazarları, biyomedikal araştırma, vs.) Yukarıda belirtildiği gibi, bu numune alma tekniğinin ana sürücü fuar domuz popülasyonu olmuştur. Tarım fuarları sırasında, domuz sahipleri domuz genel bileşimine dayalı finansal ödül ve ün kazanmak için yarışacak. Resmi olmayan verilere göre o, bir domuz iyi görünmüyor, eğer olduğunu gösterirwners kısıtlama ve örnek toplama sırasında domuz stres seviyeye özellik olabilir. Burun mendil düşük hayvansal stresi gerektiren ortamlarda örnekleme bireysel hayvanları içeren gözetim çabalar için yararlıdır. Nazal yaparken snaring ve gözle görülür üzücü domuz önlemek yeteneği tekniği silin sergi domuzlarda IAV gözetim çalışmalarının halk tarafından kabul geliştirdi. Nazal 33 düşük stres doğa yöntemi de ticari domuz çiftlikleri için çok uygundur silin. Ayrıca, burun yöntemi daha az personel gerektirir ve özel eğitim zorunlu kılmaz, çünkü maliyetleri azaltmaya yardımcı olabilir silin. Bezlerden burun ek olarak, ticari bir domuzlarda patojenin tespit edilmesi bir başka yaygın olarak kullanılan bir form, birlikte yerleştirilmiştir domuz kalemlerini yerleştirilmiş olan bir pamuk ip çiğnemek izin verilmesini içerir. Onlar ip alınabilir sözlü sıvıları mevduat. 27,34,35 Oral sıvı toplama süredenbir hayvan grubundan toplanan numuneler göre ve patojen sıklığı veya iletim çalışmaları için sınırlamalar vardır CES sonuçlanır. Ayrıca, ağız sıvılardan IAV izolasyonu zayıf olmuştur. Ipleri doyurmak için domuz personel kaynaklar için verimsiz olabilir 29 Oral sıvılar bireysel domuz süredir kullanılmaktadır ama zaman ipleri asmak için gerekli ve. Burun mendil kullanarak 36 sağlar Bireysel hayvanların hızlı değerlendirilmesi. Her iki burun mendil IAV algılamak ve izole etme yeteneği ağız sıvıları üzerinde ayrı bir avantaj sağlamaktadır. Diğer örnekleme yöntemleri gibi, burun mendil zirve viral dökülme esnasında en etkili olabilir. Nazal ile ilgili bazı sınırlamalar prosedürü uygulamadan önce düşünülmelidir yöntemi yoktur mendil vardır. Domuzlar kendi snouts ile kök meraklı hayvanlardır. Genellikle karşılaştırıldığında burun bezlerden için, bir burun silme toplanan fazla enkaz nedeniyle nemli, kirli çevre, oradadomuz burnu dış kişileri silin. Nazal arasındaki temas yüzey silinmelidir ve pik nazal ilgili burun bezlerinde çok solunum yolu, çoğu zaman çevresel artıkları (örneğin, yatak, yem, gübre, vs) istenmeden birikimi ile sonuçlanan bir durum, bir daha fazla dış yüzeyi ile sınırlıdır siliyor. Bu çevresel kirleticiler PCR inhibe veya viral izolasyon girişimleri sırasında hücresel toksisiteye neden olabilir. Örnekleme yeri ve çevre enkaz seviyelerinin temizlik burun protokolleri silin devam etmeden önce değerlendirilmelidir gerekebilir. Burun mendil çevresel kirlilik oluşumu da IAV bu yöntemin test hayvan tarafından dökülen olmayabilir ile tespit değil, çevrede mevcut olduğunu gösterir. Bir IAV nitelik yeteneği gözetim faaliyetleri veya sürü tabanlı teşhis için bir endişe olmayabilir, belirli bir hayvana izole ederken, bu laboratuar bazlı tr için göz önünde bulundurulacak bir sınırlama olabiliransmission çalışmaları. Bu yöntemi seçme nazal sayıda örnekleri gerektirir silin o artan depolama ve nakliye alanıdır önce ihtiyacı olan bir diğer konu da ele alınacak. Mendil kullanılan şişeler nazal sürüntü depolama için kullanılan standart 2 ml kriyojenik depolama şişeleri çok daha büyüktür ve uzun süreli depolama ve laboratuara geri taşınması için soğutucu alan için yaklaşık üç-dört kat daha fazla dondurucu yer alacak. Soğutma altında, oda sıcaklığında, uzun zaman süreleri için numune saklama ya da donma-çözülme örnekleri olacak virüsü canlılığının bir azalma tüm sonuç. Ekstra bakım Bu örnekleri çözülme sırasında alınması gerekir. Gazlı bez, viral taşıma ortamı çok emer çünkü, numuneler kuru boncuk banyosunda hızla ısınmasına olacaktır. Yanlışlıkla aynı zamanda virüs canlılığı bir azalmaya neden olabilir çözdürme işlemi sırasında numune aşırı ısınma. Ayrıca, bağlı mendil comp in vitro olarak IAV kurtarma azalmaçubuklar için ared, burun canlı virüs kurtarma için yüksek hassasiyet gerektiren durumlarda kullanılmaması mendil tavsiye edilir. 30 Nazal domuzlarda IAV gözetim başarılı kullanımı yöntemi hayvanlar üzerinde örnekleme daha kolay, gözetim çalışmalarının artan kabulü ve daha az stres neden olabilir silin. Gelecekte, adil bir ya da ticari domuz sürüleri bireysel domuz düşük stres testi için girişte domuz örnekleme için yararlı olabilir. Bu yöntem domuz diğer solunum patojenleri tespit kullanmak için soruşturma olabilir. Domuz roman IAV soylarının ortaya çıkmasında önemli bir rol oynadığı için, domuz IAV için aktif sürveyans önemlidir devam etti. Bu nedenle, bu yöntem yeni iAVS arasında ortaya çıkan suşlarının tespit ve epidemiyolojik araştırmanın yardımcı olabilir.

<html> Grip A virüsleri (IAV) evcil kuşlar, domuz ve insan da dahil olmak üzere pek çok türde, solunum hastalıklarına neden olur. Nedeniyle oluşabilir parçalı IAV genom hızlı viral evrim reassortment ve yeni IAV suşları sık sık ortaya çıkar. Domuz yaygın Kuzey Amerika domuz (H1N1, H1N2, H3N2) arasında dolaşan IAV üç ana alt tipi bulunmamaktadır. 1 birden çok ana türden iAVS yeniden yapılanması için bir karıştırma kabı olarak hizmet edebilen bir türün, ancak insan çoklu IAV tanıtımlar sahip Bu alt tipleri içinde yaygın IAV çeşitliliğe yol açtı. domuz bulaşmasını iAVS 2 Hızlı evrimi, insan, kuş ve domuz virüslerinin gen segmentleri içeren üçlü reassortant IAV 3 ABD&#39;de domuzlar arasında yaygınlaşan 1998 yılından beri belirgin olmuştur. 4 dahili gen Bu üçlü reassortant IAV gelen segmentleri şu anda domuz bulaşmasını iAVS arasında oldukça yaygın kalır. 5 &quot;&gt; Dünya, IAV tipik klinik bulgular ateş, iştahsızlık, uyuşukluk, öksürük dahil olduğu domuz solunum hastalığı önemli bir nedenidir, burun akıntısı ve kilo alımının yetersiz hapşırma, nefes darlığı. IAV nerede üreme çiftlikleri ekmek özellikle pahalıya mal olabilir nedeniyle IAV kaynaklı ateş ve zayıf doğumlu domuz yavrusu başarısızlık belgelenmiştir. 6,7 Amerika Birleşik Devletleri içinde IAV yaygın ticari domuz sürüleri ve IAV bulaşmasını domuz arasında yaygın antijenik ve genomik çeşitlilik ve sürekli evrim tespit edildiğinde, bu kontrol engel olan Virüs. 8-11 Üçlü reassortant Kuzey Amerika domuz soy ve Avrasya kuş-benzeri domuz soyundan gelen gen segmentleri içeren bir domuz-soy IAV dünya çapında bir salgın nedeniyle zaman 2009 yılında gerçekleşmiştir domuzlarda reassortment kaynaklanan bir salgın IAV soyunun ortaya çıkışı hakkında halk sağlığı kaygıları İnsanlarda. 12 pandemik virüs (A (H1N1) pdm09) beri varendemik domuz ile reassorted IAV 13,14 suşları ve bu yeni reassorted suşların bazı insanlara geri ahiren paylaşılmıştır. 15 reassorment olaylar ve pandemi potansiyeli olan yeni IAV suşlarının ortaya çıkması domuz zorunlu olarak IAV virüs dolaşımdaki aktif sürveyans yapar sıklığı, özellikle domuz-insan arayüzünde. Domuz-insan arayüzü IAV çift yönlü türler arası iletimi için önemlidir. Insan-to-domuz ticari domuz üretiminde ortaya çıkan iletim domuz popülasyonda anda mevcut IAV çeşitlilik büyük miktarda sorumludur. Tarım fuarları ABD&#39;de insanların domuz comingling için büyük ayarları ve bir varyant H3N2 IAV salgını sırasında, IAV zoonotik iletimi için siteler. 2012 yılında 15-21 bilinmektedir, vakaların% 93 katılımın bildirdi günlerde bir tarım fuarı hastalığın başlangıcında önce. 15 Genomik analizzoonotik iletim doğruladı insan izolatlar ile karşılaştırıldığında sergi domuzların viral izolatların. IAV ile enfekte 21 Sergi domuz genellikle doğrudan tanısal testler için ihtiyaç gösteren hastalık, 21-23 klinik belirtilerini göstermez. Gözle görülür hasta domuz Örnekleme yalnız başarıyla domuzlarda IAV yaygınlığını tespit olmaz ve domuz arasında çıkan IAV yeni suşları belirlemek için dayanıyordu olamaz. Aktif sürveyans IAV ortaya çıkan suşlar domuzlarda ve domuz ve halk sağlığı hem de kendi tehdidi değerlendirmek tespiti için kesinlikle gereklidir. Çoğu IAV gözetim faaliyetleri gönüllü ve bu nedenle minimal yıkıcı yöntemlere ihtiyaç vardır vardır. IAV domuz bulaştırdıkları için üç önemli ölüm öncesi numune toplama prosedürleri vardır: Burun bezlerden, sözlü sıvılar ve burun mendil. IAV listesine sentetik elyaf sokulmasını algılamak için bireysel domuz örnekleme için akım tavsiyeler tercih edilen yöntem olarak burun deliklerine bezlerden uçluburun salgıları ve epitel hücreleri toplamak için. 24,25 domuz ya elle ya da bir tuzak hayvanın büyüklüğüne bağlı olan domuz dizginlemek gerekir bu prosedürü, eğitimli personel bir ekip önlemek için deneyebilirsiniz çünkü. 26 emniyet süreci için zahmetli personel ve domuzlar için stresli. Bir yarışma hayvan eklenen stres algısı gözetim çabalarına sahipleri dirençli yapabilirsiniz Ayrıca, sergi domuz genellikle fuarda birden yarışmalarda katılıyor. 80-100 den% IAV enfekte sürüler arasında değişen IAV algılama olasılıkları ile sözlü sıvılar domuzların popülasyonlarında IAV moleküler tespiti için bezlerden burun popüler bir alternatif haline gelmiştir. 27,28 Ayrıca, ağız sıvıları daha geniş bir pencere sağlayabilir İlk enfeksiyonu takiben nazal bezlerden daha IAV algılama. Ancak, ağız sıvılardan IAV izolasyon virus izolasyonu girişimleri sadece% 50&#39;si IA ile sonuçlanan sorunlu olmuşturV kurtarma. 29 Domuzlarda IAV gözetim sırasında burun bezlerden yerine burun mendil kullanarak yukarıda açıklanan sınırlamalarının üstesinden gelir. Nazal mendiller bir yasaklama tuzak kullanımını gerektirmeyen ve prosedürün hayvan veya tanıkları zorlamadan yapılabilir. Minimal teknik eğitim gözetim örnekleri toplamak için, domuz sahipleri de dahil olmak üzere sivil veteriner profesyonelleri, izin verir burun mendil, toplamak için gereklidir. Burun silme bezleri, daha önce A virüsü 30 ve örnekleme bu invazif olmayan bir yöntem için ayrıntılı bir protokol, aşağıda tarif edilmiştir algılama ve grip izolasyonu için burun bezlerinde karşılaştırılmıştır.

<table><tbody><tr><td>BBL Brain Heart Infusion</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>211059</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin G Sodium Salt</td><td>MP Biomedicals, LLC</td><td>021194537</td><td>1500 u/mg</td></tr><tr><td>Streptomycin Sulfate</td><td>AMRESCO LLC</td><td>0382</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin Solution</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>30-005-CR</td><td>50 mg/ml</td></tr><tr><td>Amphotericin B Solution</td><td>Fisher</td><td>S 24 25</td><td>250 ug/ml</td></tr><tr><td>Kanamycin Sulfate</td><td>Teknova</td><td>K2105</td><td>5000 ug/ml</td></tr><tr><td>TPP Rapid Filtermax System</td><td>TPP Techno Plastic Products AG&amp;nbsp;</td><td>99150</td><td></td></tr><tr><td>Nalgen Diagnostic Bottles</td><td>Thermo Scientific</td><td>342002-9025</td><td>HDPE with white PP closure</td></tr><tr><td>Dermacea Gauze Sponge, 8 ply</td><td>Covidien</td><td>441211</td><td>5.08 cm &amp;times; 5.08 cm (2 in. &amp;times; 2 in)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Nitrile Exam Gloves</td><td>Saftey Choice</td><td>19-170-010 (A-D)</td><td></td></tr></tbody></table>

nasal wipes for influenza a virus detection and isolation from swine

Influenza A virüs hızla domuz toplumlarda gelişir ve yeni suşlar ortaya çıkmaya devam ediyor, çünkü domuz influenza A virüsleri için Gözetleme insan ve hayvan sağlığına için çok önemlidir. Domuz onlara çıkması ve yeni influenza A virüsünün bakımı suşları için önemli ana yapım influenza A virüsünün farklı soy tarafından enfekte edilmesi mümkün bulunmaktadır. Böyle ticari domuz çiftlikleri, tarım fuarları ve canlı hayvan pazarlarında gibi çeşitli ortamlarda domuz Örnekleme halen IAV suşları dolaşan kapsamlı bir görünüm sağlamak için önemlidir. Bu domuzların fiziksel kısıtlama gerektirdiğinden güncel altın standart ante-mortem örnekleme tekniği (burun bezlerden yani toplama) emek yoğundur. Burun mendiller hayvanın hiçbir kısıtlama minimal ile domuz burnu genelinde kumaş parçasını ovuşturarak barındırır. Burun prosedürü gerçekleştirmek için basit ve profesyonel veteriner veya hayvan taşıma eğitimi ile personel gerektirmez silin. Wnazal bezlerden biraz daha az duyarlı hile, virüs algılama ve izolasyon oranları nazal düşük stres örnekleme yöntemleri gerektiğinde bireysel domuz örnekleme için bir alternatif mendil yapmak için yeterli. Işlem protokolü uygulanabilir bir nazal toplamak için gerekli adımlar tek bir domuz silin özetliyor.

Bu yöntemin başarılı kullanımı RRT-PCR herhangi bir çevresel enkaz numune alma sırasında aldı RNA ekstraksiyonu ve RRT-PCR sırasında iç kontrolün kullanımı ile birlikte, gösteri örnekleri PCR inhibitörleri içermiyordu, bu sonuçlar verir. Örnek aşılamadan sonra, virüs izolasyon kuyuları örnekten görülebilir çevre enkaz arındırılmış olmalıdır. PCR viral nükleik asit, ille canlı virüs tespit, çünkü PCR genellikle virüs izolasyonu daha yüksek IAV pozitif oranı getirir anlayışı ile RRT-PCR sonuçları ve virüs izolasyonu sonuçları arasında makul bir anlaşma vardır. Sonuçlar burun mendil IAV için geçerli altın standart örnekleme tekniği olan bezlerden, burun kullanışlı bir alternatif olduğunu göstermektedir. Edwards ve diğ. Bu çalışmada 2013 döneminde ABD&#39;de tarım fuarlarda domuzlar toplanmıştır burnu mendil ve burun sürüntü karşılaştırmasını gerçekleştirilen, domuzlar hem nazal ile örneklenmiştirbezlerden ve burun mendil ve örnekler RRT-PCR ve virüs izolasyonu ile paralel test edildi. Edwards ve diğ. tespiti ve IAV izolasyonu RRT-PCR ile ve kültürlü hücrelerde virüs izolasyonu hem uyum 553 eşleştirilmiş burun sürüntü karşılaştırılması ile ortaya konmuştur ve burun örnekleri silin bildirdi. Bu test örnekleri Of 30,% 93.5 (517/553) RRT-PCR testi sonuçlarının anlaşması (Tablo 1) ve% 92,4 (511/553) idi MDCK hücrelerinde virüs izolasyonu ile anlaşmaya burun bezlerden karşılaştırıldığında burun mendil tahmini RRT-PCR hassasiyeti (Tablo 2). 21 idi % 92.9 ve burun bezlerden karşılaştırıldığında burun mendil tahmini IAV izolasyon duyarlılığı% 82.9 idi. Edwards ve diğ., Daha önce RRT-PCR ve virüs izolasyonu hem pozitif nazal mendil virüs izolasyonu (= 31.96 Ct) için RRT-PCR ile pozitif ama negatif bulunmuştur nazal mendil daha düşük Ct değeri (24.32) ortalama belirtti. 21 Tablo 1:.. Influenza RRT-PCR tespiti 29 ilçe fuarları (en domuz toplanan nazal sürüntü ve burun mendil A virüsü ve arkadaşları (burnu 2014) Utility sergi domuz popülasyonlarında influenza A virüs gözetim örnekleri silin Edwards Gribi ve gelen Diğer Solunum Virüsleri 8 (5), 574-579. <img alt="Tablo 2" src="/files/ftp_upload/53313/53313table2.png" /> Tablo 2:.. Influenza izolasyonu 29 ilçe fuarları (en domuz toplanan nazal sürüntü ve burun mendil A virüsü Edwards ve arkadaşları (burnu 2014) Yardımcı grip için sergi domuz toplumlarda A virüsü gözetim örnekleri silin Gribi ve Diğer Solunum Virüsler 8 (5), 574-579).

Watch this Scientific Journal Video about Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine at JoVE.com

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.

Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

nasal-wipes-for-influenza-a-virus-detection-and-isolation-from-swine

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.3K Görüntüleme.  The Ohio State University. The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses. 

Video: Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, precise diagnosis of the infecting strain and rapid high-throughput screening of vast numbers of clinical samples is paramount to control the spread of pandemic infections. Current clinical diagnoses of influenza infections are based on serologic testing, polymerase chain reaction, direct specimen immunofluorescence and cell culture 1,2.
Here, we report the development of a novel diagnostic technique used to detect live influenza viruses. We used the mouse-adapted human A/PR/8/34 (PR8, H1N1) virus 3 to test the efficacy of this technique using MDCK cells 4. MDCK cells (104 or 5 x 103 per well) were cultured in 96- or 384-well plates, infected with PR8 and viral proteins were detected using anti-M2 followed by an IR dye-conjugated secondary antibody. M2 5 and hemagglutinin 1 are two major marker proteins used in many different diagnostic assays. Employing IR-dye-conjugated secondary antibodies minimized the autofluorescence associated with other fluorescent dyes. The use of anti-M2 antibody allowed us to use the antigen-specific fluorescence intensity as a direct metric of viral quantity. To enumerate the fluorescence intensity, we used the LI-COR Odyssey-based IR scanner. This system uses two channel laser-based IR detections to identify fluorophores and differentiate them from background noise. The first channel excites at 680 nm and emits at 700 nm to help quantify the background. The second channel detects fluorophores that excite at 780 nm and emit at 800 nm. Scanning of PR8-infected MDCK cells in the IR scanner indicated a viral titer-dependent bright fluorescence. A positive correlation of fluorescence intensity to virus titer starting from 102-105 PFU could be consistently observed. Minimal but detectable positivity consistently seen with 102-103 PFU PR8 viral titers demonstrated the high sensitivity of the near-IR dyes. The signal-to-noise ratio was determined by comparing the mock-infected or isotype antibody-treated MDCK cells.
Using the fluorescence intensities from 96- or 384-well plate formats, we constructed standard titration curves. In these calculations, the first variable is the viral titer while the second variable is the fluorescence intensity. Therefore, we used the exponential distribution to generate a curve-fit to determine the polynomial relationship between the viral titers and fluorescence intensities. Collectively, we conclude that IR dye-based protein detection system can help diagnose infecting viral strains and precisely enumerate the titer of the infecting pathogens.

This method describes the use of Infrared dye based imaging system for detection of H1N1 in bronchioalveolar lavage (BAL) fluid of infected mice at a high sensitivity. This methodology can be performed in a 96- or 384-well plate, requires &lt;10 &mu;l volume of test material and has the potential for concurrent screening of multiple pathogens.

Gribi için yüksek verimlilik Tespit Yöntemi

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid impingement-based air sampling devices for efficacious concentration of negatively-charged viruses from bioaerosols. Thus, the resin serves as an additional concentration step in the bioaerosol sampling workflow. Nucleic acid extraction of the viral particles is then performed directly from the anion exchange resin, with the resulting sample suitable for molecular analyses. Further, this protocol describes a custom-built bioaerosol chamber capable of generating virus-laden bioaerosols under a variety of environmental conditions and allowing for continuous monitoring of environmental variables such as temperature, humidity, wind speed, and aerosol mass concentration. The main advantage of using this protocol is increased sensitivity of viral detection, as assessed via direct comparison to an unmodified conventional liquid impinger. Other advantages include the potential to concentrate diverse negatively-charged viruses, the low cost of anion exchange resin (~$0.14 per sample), and ease of use. Disadvantages include the inability of this protocol to assess infectivity of resin-adsorbed viral particles, and potentially the need for the optimization of the liquid sampling buffer used within the impinger.

An anion exchange resin-based method, adapted to liquid impingement-based bioaerosol sampling of viruses is demonstrated. When coupled with downstream molecular detection, the method allows for facile and sensitive detection of viruses from bioaerosols.

Anyon Exchange reçine kullanma Bioaerosols--dan virüs tespiti

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid ...

Çevre

Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality every year. The Influenza A and B assay was the first CLIA-waived molecular rapid flu test available. The Influenza A and B test works by employing isothermal amplification with influenza-specific primers followed by target detection with molecular beacon probes. Here, the performance of the Influenza A and B assay on frozen, archived nasopharyngeal swab (NPS) specimens stored in viral transport medium (VTM) were compared to a respiratory panel assay.
The performance of the Influenza A and B assay was evaluated by comparing the results to the respiratory panel reference method. The sensitivity for total influenza virus A was 67.5% (95% CI (CI), 56.6-78.5) and the specificity was 86.9% (CI, 71.0-100). For influenza virus B testing, the sensitivity and specificity were 90.2% (CI, 68.5-100) and 98.8% (CI, 68.5-100), respectively.
This system has the advantage of a significantly shorter test time than any other currently available molecular assay and the simple, pipette-free procedure runs on a fully integrated, closed, small-footprint system. Overall, the Influenza A and B assay evaluated in this study has the potential to serve as a point-of-care rapid influenza diagnostic test.

We describe a rapid, molecular-based Influenza A and B assay. The Influenza assay detects each target within 15 min by employing isothermal amplification with influenza-specific primers followed by target detection with molecular beacon probes. The Influenza A and B assay is user-friendly and required minimal hands-on time to perform.

Hızlı moleküler algılama ve Nezle Virüsleri A ve B farklılaşması

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of combining reactions together. We designed and evaluated a panel based on this principle to rapidly identify the presence of common disease agents in dogs and horses with acute respiratory illness. This manuscript describes a nanoscale diagnostic PCR workflow for sample preparation, amplification, and analysis of target pathogen sequences, focusing on procedures that are different from microliter scale reactions. In the respiratory panel presented, 18 assays were each set up in triplicate, accommodating up to 48 samples per plate. A universal extraction and pre-amplification workflow was optimized for high-throughput sample preparation to accommodate multiple matrices and DNA and RNA based pathogens. Representative data are presented for one RNA target (influenza A matrix) and one DNA target (equine herpesvirus 1). The ability to quickly and accurately test for a comprehensive, syndrome-based group of pathogens is a valuable tool for improving efficiency and ergonomics of diagnostic testing and for acute respiratory disease diagnosis and management.

High-throughput testing of DNA and RNA based pathogens by nanoscale PCR is described using a syndromic canine and equine respiratory PCR panel.

Nano PCR ile Hayvan Örnekler Solunum Patojenler yüksek verimlilik Algılama

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against currently circulating strains. In addition to their use in treating seasonal influenza, the NA inhibitors have been stockpiled by a number of countries for use in the event of a pandemic. It is therefore important to monitor the susceptibility of circulating influenza viruses to this class of antivirals. There are different types of assays that can be used to assess the susceptibility of influenza viruses to the NA inhibitors, but the enzyme inhibition assays using either a fluorescent substrate or a chemiluminescent substrate are the most widely used and recommended. This protocol describes the use of a fluorescence-based assay to assess influenza virus susceptibility to NA inhibitors. The assay is based on the NA enzyme cleaving the 2&#8242;-(4-Methylumbelliferyl)-&#945;-D-N-acetylneuraminic acid (MUNANA) substrate to release the fluorescent product 4-methylumbelliferone (4-MU). Therefore, the inhibitory effect of an NA inhibitor on the influenza virus NA is determined based on the concentration of the NA inhibitor that is required to reduce 50% of the NA activity, given as an IC50 value.

We describe the use of a phenotypic fluorescence-based neuraminidase inhibition assay to assess the susceptibility of influenza A and B viruses to the neuraminidase inhibitor class of antivirals.

Floresans tabanlı Nöraminidaz İnhibisyonu Tahlili antivirallerin nöraminidaz inhibitörü Class Nezle Virüslerinden eğilimi değerlendirilebilir

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone considering direct medical and hospitalization expenses and work absenteeism2. Animal models are crucial in Influenza A virus (IAV) studies to evaluate viral pathogenesis, host-pathogen interactions, immune responses, and the efficacy of current and/or novel vaccine approaches as well as antivirals. Mice are an advantageous small animal model because their immune system is evolutionarily similar to that found in humans, they are available from commercial vendors as genetically identical subjects, there are multiple strains that can be exploited to evaluate the genetic basis of infections, and they are relatively inexpensive and easy to manipulate. To recapitulate IAV infection in humans via the airways, mice are first anesthetized prior to intranasal inoculation with infectious IAVs under proper biosafety containment. After infection, the pathogenesis of IAVs is determined by monitoring daily the morbidity (body weight loss) and mortality (survival) rate. In addition, viral pathogenesis can also be evaluated by assessing virus replication in the upper (nasal mucosa) or lower (lungs) respiratory tract of infected mice. Humoral responses upon IAV infection can be rapidly evaluated by non-invasive bleeding and secondary antibody detection assays aimed at detecting the presence of total or neutralizing antibodies. Here, we describe the common methods used to infect mice intranasally (i.n) with IAV and evaluate pathogenesis, humoral immune responses and protection efficacy.

Influenza A viruses (IAVs) are important human respiratory pathogens. To understand the pathogenicity of IAVs and to perform preclinical testing of novel vaccine approaches, animal models mimicking human physiology are required. Here, we describe techniques to evaluate IAV pathogenesis, humoral responses and vaccine efficacy using a mouse model of infection.

Grip A virüs enfeksiyonu bir fare modeli çalışmalarda

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface glycoproteins of the virus. The generation of escape variants is a powerful method in elucidating how viruses escape immune detection and in identifying critical residues required for antibody binding. Here, we describe a protocol on how to generate influenza A virus escape variants by utilizing human or murine monoclonal antibodies (mAbs) directed against the viral hemagglutinin (HA). With the use of our technique, we previously characterized critical residues required for the binding of antibodies targeting either the head or stalk of the novel avian H7N9 HA. The protocol can be easily adapted for other virus systems. Analyses of escape variants are important for modeling antigenic drift, determining single nucleotide polymorphisms (SNPs) conferring resistance and virus fitness, and in the designing of vaccines and/or therapeutics.

We describe a method by which we identify critical residues required for the binding of human or murine monoclonal antibodies that target the viral hemagglutinin of influenza A viruses. The protocol can be adapted to other virus surface glycoproteins and their corresponding neutralizing antibodies.

Grip virüsü monoklonal antikorları nötralize kaçış türevleri üretimi

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. Two-photon intravital microscopy (2P-IVM) allows the observation of cell interactions in deep tissue in living animals, while minimizing the photobleaching generated during image acquisition. To date, different models for 2P-IVM of lymphoid and non-lymphoid organs have been described. However, imaging of respiratory organs remains a challenge due to the movement associated with the breathing cycle of the animal.
Here, we describe a protocol to visualize in vivo immune cell interactions in the trachea of mice infected with influenza virus using 2P-IVM. To this purpose, we developed a custom imaging platform, which included the surgical exposure and intubation of the trachea, followed by the acquisition of dynamic images of neutrophils and dendritic cells (DC) in the mucosal epithelium. Additionally, we detailed the steps needed to perform influenza intranasal infection and flow cytometric analysis of immune cells in the trachea. Finally, we analyzed neutrophil and DC motility as well as their interactions during the course of a movie. This protocol allows for the generation of stable and bright 4D images necessary for the assessment of cell-cell interactions in the trachea.

In this study, we present a protocol to perform two-photon intravital imaging and cell interaction analysis in the murine tracheal mucosa after infection with influenza virus. This protocol will be relevant for researchers studying immune cell dynamics during respiratory infections.

İki fotonlu Intravital mikroskobu kullanılarak grip virüsü enfeksiyonu sırasında trakeal mukozasında görüntüleme hücre etkileşimi

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

Nasal Brushing Sampling and Processing Using Digital High Speed Ciliary Videomicroscopy &ndash; Adaptation for the COVID-19 Pandemic

Primary Ciliary Dyskinesia (PCD) is a genetic motile ciliopathy, leading to significant otosinopulmonary disease. PCD diagnosis is often missed or delayed due to challenges with different diagnostic modalities. Ciliary videomicroscopy, using Digital High-Speed Videomicroscopy (DHSV), one of the diagnostic tools for PCD, is considered the optimal method to perform ciliary functional analysis (CFA), comprising of ciliary beat frequency (CBF) and beat pattern (CBP) analysis. However, DHSV lacks standardized, published operating procedure for processing and analyzing samples. It also uses living respiratory epithelium, a significant infection control issue during the COVID-19 pandemic. To continue providing a diagnostic service during this health crisis, the ciliary videomicroscopy protocol has been adapted to include adequate infection control measures.
Here, we describe a revised protocol for sampling and laboratory processing of ciliated respiratory samples, highlighting adaptations made to comply with COVID-19 infection control measures. Representative results of CFA from nasal brushing samples obtained from 16 healthy subjects, processed and analyzed according to this protocol, are described. We also illustrate the importance of obtaining and processing optimal quality epithelial ciliated strips, as samples not meeting quality selection criteria do now allow for CFA, potentially decreasing the diagnostic reliability and the efficiency of this technique.

Nasal Brushing Sampling and Processing Using Digital High Speed Ciliary Videomicroscopy &#8211; Adaptation for the COVID-19 Pandemic

To guarantee a successful and high-quality ciliary functional analysis for PCD diagnosis, a precise and careful method for respiratory epithelium sampling and processing is essential. To continue providing PCD diagnostic service during the COVID-19 pandemic, the ciliary videomicroscopy protocol has been updated to include appropriate infection control measures.

Dijital Yüksek Hızlı Siliyer Videomikroskopi Kullanarak Burun Fırçalama Örneklemesi ve İşleme – COVID-19 Pandemisine Adaptasyon

Primary Ciliary Dyskinesia (PCD) is a genetic motile ciliopathy, leading to significant otosinopulmonary disease. PCD diagnosis is often missed or delayed ...

COVID-19 / Coronavirus Outbreak: Performing a Nasal Swab Test on Patients inside a Rapidly Deployable Facility Optimized for Epidemics

While different types of diagnostic tests may be used to detect coronavirus disease, a nasopharyngeal swab test is the most common. The test must be performed by a trained healthcare provider. If cell culture is collected in a wrong manner, the diagnosis obtained may be incorrect.
The World Health Organization (WHO) recommends that providers use a sterile dacron or rayon swab with a flexible, plastic shaft for deep nasal sampling. Cotton, calcium alginate swabs, or swabs with wooden sticks may contain such compounds that can inactivate some viruses and inhibit the diagnostic polymerase chain reaction (PCR). The following protocol describes the proper procedure for collecting a nasopharyngeal swab sample.

COVID-19 / Coronavirus Outbreak: Performing a Nasal Swab Test on Patients Inside a Rapidly Deployable Facility Optimized for Epidemics

While different types of diagnostic tests may be used to detect coronavirus disease, a nasopharyngeal swab test is the most common. The test must be ...