Yazarlar Alman Araştırma Vakfı (SFB / TRR57, Q3 ve Q2) mali destek kabul etmek istiyorum. Yazarlar fotoğraf hazırlarken onların yardım için Mareike Schulz, Pascal Paschenda ve Klaudia Warzecha teşekkür ederiz.

NOT: Tüm deneyler resmi devlet hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (LANUV, Recklinghausen, Almanya) tarafından onaylanmıştır. fareler Laboratuar Hayvan Bilimi Dernekleri Federasyonu&#39;nun için (FELASA) kurallarına göre özel-patojen içermeyen koşullar altında muhafaza edilmektedir. Tüm deneyler (Sağlık yayın 8. Edition Ulusal Enstitüleri, 2011) &#39;Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanımı Kılavuzu&#39; hayvanların korunması ile ilgili olarak Alman federal yasalar uyarınca yapılmıştır. 1. Cerrahi öncesi Hazırlık NOT: temiz ama steril olmayan koşullarda tüm işlemleri yürütmek. Ameliyat gerçekleştirmek için kullanılan bu tür cerrahi forseps, makas, ve Colibri retraktor gibi tüm araçlar ve diğer yeniden ekipman hayvanlarda cerrahisine yönelik kurumsal kurallarına tamamen uygun olan protokollere göre kullanımdan önce sterilize edilmelidir., Gerekli reaktifler, malzeme ve ekipman ayrıntılı bir listesi için, Belirli Malzemeleri / Ekipman listesine bakınız. <ol><li> Tam deney sırasında, sıvı geçirmeyen, kendinden yapışkanlı perdeler genel kapağı operasyon alanı sürekli anestezi sistemine bağlı 37 ° C arasındaki bir sıcaklıkta, bir sıcak tutma levhasının üzerinde hayvan tutmak ve. Düzgün tüm instrumentations ve ameliyat öncesi deney sırasında kullanılan çözümleri (Şekil 1) düzenlemek. </li><li> Anestezinin indüksiyonu için 4 L / dk&#39;lık bir akış hızında% 100 oksijen 4 hacimce% izofluran teneffüs ile fare anestezisi. Aşağıdaki hayati kriterler ulaşıldığında anesthetization derinliği yeterlidir: Düzenli spontan solunum, ayak parmakları arasında ağrı uyaranların ayarladıktan sonra hiçbir refleks ve ağrı yanıt. </li><li> Bir elektrikli tıraş makinesi kürk ile fare karın kürk Tıraş ve göz ve n kullanımı ile kurumasını gözleri korumakose merhem. </li><li> , 37 ° C ısıtılmış sıcak plaka üzerinde fare koyun Fluovac anestezi sistemi Fluovac maskesi fare burun yerleştirin ve ipek bant çizgili hayvanın bacakları düzeltmek. </li><li> 1 L / dakikalık bir akış hızında% 100 oksijen 1.5-3 hacimce% izofluran teneffüs ettirilerek fare anestezi bakımı ve buprenorfin çözeltisi (0.1 mg / kg BW% 0.9 NaCI solüsyonu içinde eritilmiş), intraperitonal enjeksiyon yoluyla ameliyat analjezi induct . </li><li> Derinin ameliyat öncesi tedavi için alkollü çözümü kullanmak için hazır antiseptik bir standart ile nemlendirilmiş bir gazlı bez bez ile traş karın cildi sterilize. Not: Bizim protokollerde bir poli-alkol cilt antisepticum kullanın. Bu hayvanların korunması ve Laboratuar Hayvan Bilimi Dernekleri Federasyonu&#39;nun için yönergelerine ilişkin Alman federal yasa ile tam uyumludur. Bu antiseptik% 70 ihtiva eder (h / h) 2-propanol, bütan-1,3.diol ve sarı kinolin izleri ve perfumör. </li></ol> 2. Cerrahi İşlemleri <ol><li> 11,5 cm cerrahi makas ile aynı anda kutis artı fasya keserek yaklaşık 2 cm uzunluğunda bir orta hat laparotomi ile karın açın. </li><li> Bir serpme olarak makas kullanılarak periton üstüne bağ dokusu incelemek. </li><li> Periton boşluğuna açmak için linea alba boyunca periton kesin. </li><li> , Sternum bir tutma sütür takmadan dikiş filamanın yükselterek ve Fluovac maske üstüne sabitlemek boşluğu büyütün. </li><li> Periton boşluğuna bir Colibri Retraktör (Şekil 2) takarak çalışma alanını yaymak. </li><li> Bunun ventral tarafı diyaframa sopalarla ve hilum açıkça görülebilecek şekilde bir nemli (% 0.9 NaCl çözeltisi) pamuklu çubukla karaciğer kaldırın. </li><li> Gut (Şekil 3) kaudal hareketi tarafından safra kanalı Açığa. </li><li> Dikkatlice safra kanalını ayırınBir mikro-çentikler forseps (Şekil 4A) kullanarak portal ven ve hepatik arter yan. </li><li> Safra etrafında 5-0 dikiş yerleştirin ve iki cerrahi knot ile sabitleyin. Takviyelemede knot safra kanalı (Şekil 4B) kesilmesinin olmadan etkili tıkanıklığı sağlamak için sürekli çekiş gücü artırır. </li><li> Aynı şekilde, ikinci kafa ligasyon ekleme ancak (Şekil 4C) ile safra kanalı incelemek yoktur. Aksi takdirde safra kaçağı, bir düğüm güvenli değilse, ve hayvanlar hiçbir kolestazisli deneyim ama ciddi peritonit geliştirmek önemli bir riski vardır. </li><li> , Dikişler (Şekil 4D) uçlarını kesin sternum düşürmek ve retraktörü çıkarın. </li><li> % 0.9 NaCl solüsyonu ile periton boşluğuna durulayın ve fizyolojik pozisyonlara karın organları değiştirin. </li><li> Yakın hem karın tabakaları 6-0 Mersilk ayrı çalışan sütür ile (periton ve kutis artı facia). </li><li> E Cutsütür nds ve antiseptik solüsyon ile ıslatılmış bir gazlı bez çubukla operasyon alanını sterilize. NOT: İlk defa ameliyat yaparken, 16X-20X büyütmede bir cerrahi mikroskop altında tüm prosedürleri uygulayın. Bu safra kanalının daha iyi tanınmasını izin verir ve açıkça portal ven ve hepatik arter (Şekil 5 ve 6) ayıran. Bazı laboratuvarlar, iki bitişik harfler arasında safra kanalının diseksiyonu önerilmektedir. Safra kanalı disseke zaman knot biri potansiyel sızıntı şiddetli akut peritonit, asit ve sistemik endotoksemide neden olur, çünkü sağlam safra kanalı bırakın. </li></ol> 3. Ameliyat sonrası Tedavi ve Takip <ol><li> Fare tamamen uyanık ve aktif olana kadar fare kızılötesi lamba ile ısıtılan kafesteki kurtarmak için izin verin. </li><li> Daha sonra, normal bir kafes için fareyi hareket ettirin ve su ve gıda ad libitum erişim sağlar. </li><li> Birfter cerrahisi, düzenli aralıklarla hayvanların izlemek ve iç hayvan bakımı yerel önerisi şu uygun analjezi (örneğin, buprenorfin çözeltisi) ile takip postoperatif tedavi yürütmek ve komiteler kullanın. NOT: 3 gün analjezik tedavi gerçekleştirin. Herhangi bir anormal davranış gibi peritonit, sepsis veya iç kanama gibi komplikasyonlar nadir gösterebilir ve deney sonlandırmak için insan son nokta olarak ele alınmalıdır. </li><li> Hayvanlar deney sonuna kadar besin ve su ad libitum serbestçe ulaşabildikleri durumda tutulur. Devam eden fibrogenez sarılık ile gösterilir çünkü kan çizim için gerek yoktur. </li><li> Hayvanlar kurban edildiğinde, kan klinik kimya parametreleri (AST, ALT, bilirubin vb) ve karaciğer histokimyasal ve biyokimyasal analiz için alınır ölçümü için toplanır. </li></ol>

<ol><li>Liedtke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+liver+fibrosis+research%3A+update+on+animal+models%2C+legal+issues+and+translational+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Experimental liver fibrosis research: update on animal models, legal issues and translational aspects.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 6 (1), 19(2013).</li>
<li>Aller, M. A., Arias, J. L., García-Domínguez, J., Arias, J. I., Durán, M., Arias, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+obstructive+cholestasis%3A+the+wound-like+inflammatory+liver+response%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Experimental obstructive cholestasis: the wound-like inflammatory liver response.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 1 (1), 6(2008).</li>
<li>Tacke, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+hepatic+stellate+cells%3A+pathogenic+role+in+liver+fibrosis+and+novel+isolation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Update on hepatic stellate cells: pathogenic role in liver fibrosis and novel isolation techniques.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 6 (1), 67-80 (2012).</li>
<li>Weiler-Normann, C., Herkel, J., Lohse, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Z.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of liver fibrosis.</a> Z. Gastroenterol. 45 (1), 43-50 (2007).</li>
<li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligation+of+the+common+bile+duct%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Ligation of the common bile duct.</a> J. Pathol. 35 (5), 769-798 (1932).</li>
<li>Cameron, G. R., Hasan, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbances+of+structure+and+function+in+the+liver+as+the+result+of+biliary+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Disturbances of structure and function in the liver as the result of biliary obstruction.</a> J. Pathol. 75 (2), 333-349 (1958).</li>
<li>Accatino, L., Contreras, A., Fernańdez, S., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+flow+and+bile+acid+excretion%3A+postcholestatic+choleresis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lab+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">The effect of complete biliary obstruction on bile flow and bile acid excretion: postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 93 (5), 706-717 (1979).</li>
<li>Accatino, L., Contreras, A., Berdichevsky, E., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+secretion.+Studies+on+the+mechanisms+of+postcholestatic+choleresis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lab+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">The effect of complete biliary obstruction on bile secretion. Studies on the mechanisms of postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 97 (4), 525-534 (1981).</li>
<li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+bile+duct+obstruction%3A+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li>
<li>Tuchweber, B., Desmoulière, A., Bochaton-Piallat, M. L., Rubbia-Brandt, L., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+and+phenotypic+modulation+of+portal+fibroblasts+in+the+early+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Proliferation and phenotypic modulation of portal fibroblasts in the early stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 74 (1), 265-278 (1996).</li>
<li>Desmoulière, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+deposition%2C+lysyl+oxidase+expression%2C+and+myofibroblastic+differentiation+during+the+initial+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix deposition, lysyl oxidase expression, and myofibroblastic differentiation during the initial stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 76 (6), 765-778 (1997).</li>
<li>Arias, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+expression+of+a+transforming+growth+factor-%CE%B21+antisense+mRNA+is+effective+in+preventing+liver+fibrosis+in+bile-duct+ligated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Adenoviral expression of a transforming growth factor-β1 antisense mRNA is effective in preventing liver fibrosis in bile-duct ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 3 (29), (2003).</li>
<li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dominant-negative+soluble+PDGF-%CE%B2+receptor+inhibits+hepatic+stellate+cell+activation+and+attenuates+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">Dominant-negative soluble PDGF-β receptor inhibits hepatic stellate cell activation and attenuates liver fibrosis.</a> Lab. Invest. 84 (6), 766-777 (2004).</li>
<li>Borkham-Kamphorst, E., Huss, S., Van de Leur, E., Haas, U., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+CCN3%2FNOV+gene+transfer+fails+to+mitigate+liver+fibrosis+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model+because+of+hepatocyte+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Adenoviral CCN3/NOV gene transfer fails to mitigate liver fibrosis in an experimental bile duct ligation model because of hepatocyte apoptosis.</a> Liver Int. 32 (9), 1342-1353 (2012).</li>
<li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-fibrotic+effects+of+CCN1%2FCYR61+in+primary+portal+myofibroblasts+are+mediated+through+induction+of+reactive+oxygen+species+resulting+in+cellular+senescence%2C+apoptosis+and+attenuated+TGF-%CE%B2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">The anti-fibrotic effects of CCN1/CYR61 in primary portal myofibroblasts are mediated through induction of reactive oxygen species resulting in cellular senescence, apoptosis and attenuated TGF-β signaling.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1843 (5), 902-914 (2014).</li>
<li>Huss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+an+open+source+Delphi-based+software+for+morphometric+quantification+of+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of an open source Delphi-based software for morphometric quantification of liver fibrosis.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 3 (1), 10(2010).</li>
<li>Borkham-Kamphorst, E., Drews, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+lipocalin-2+expression+in+acute+and+chronic+experimental+liver+injury+moderated+by+pro-inflammatory+cytokines+interleukin-1%CE%B2+through+nuclear+factor-%CE%BAB+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Induction of lipocalin-2 expression in acute and chronic experimental liver injury moderated by pro-inflammatory cytokines interleukin-1β through nuclear factor-κB activation.</a> Liver Int. 31 (5), 656-665 (2011).</li>
<li>Karlmark, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fractalkine+receptor+CX3CR1+protects+against+liver+fibrosis+by+controlling+differentiation+and+survival+of+infiltrating+hepatic+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The fractalkine receptor CX3CR1 protects against liver fibrosis by controlling differentiation and survival of infiltrating hepatic monocytes.</a> Hepatology. 52 (5), 1769-1782 (2010).</li>
<li>Tarcin, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+collagen+peak+in+bile+duct-ligated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Time course of collagen peak in bile duct-ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 11, 45(2011).</li>
<li>Takase, S., Leo, M. A., Nouchi, T., Lieber, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmin+distinguishes+cultured+fat-storing+cells+from+myofibroblasts%2C+smooth+muscle+cells+and+fibroblasts+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Desmin distinguishes cultured fat-storing cells from myofibroblasts, smooth muscle cells and fibroblasts in the rat.</a> J. Hepatol. 6 (3), 267-276 (1988).</li>
<li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+lipocalin-2+%28LCN2%29+in+acute+liver+injury+suggest+a+novel+function+in+liver+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">Protective effects of lipocalin-2 (LCN2) in acute liver injury suggest a novel function in liver homeostasis.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1832 (5), 660-673 (2013).</li>
<li>Labbus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+in+Lipocalin+2+deficient+mice+under+normal+and+inflammatory+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling in Lipocalin 2 deficient mice under normal and inflammatory conditions.</a> J Proteomics. 78, 188-196 (2013).</li>
<li>Kirkland, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+surgical+model+of+biliary+inflammation+and+obstructive+jaundice+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice.</a> J. Surg. Res. 164 (2), 221-227 (2010).</li>
<li>Heinrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+bile+duct+ligation+in+mice%3A+a+novel+model+of+acute+cholestasis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis.</a> Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).</li>
<li>Scholten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+labeling+does+not+detect+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+cholangiocytes+in+liver+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Genetic labeling does not detect epithelial-to-mesenchymal transition of cholangiocytes in liver fibrosis in mice.</a> Gastroenterology. 139 (3), 987-998 (2010).</li>
<li>Aller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+half+century+%281961-2011%29+of+applying+microsurgery+to+experimental+liver+research%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">A half century (1961-2011) of applying microsurgery to experimental liver research.</a> World J Hepatol. 4 (7), 199-208 (2012).</li>
<li>Russell, W. M. S., Burch, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRussell%2C+WMS+%22The+Principles+of+Humane+Experimental+Technique%22">The Principles of Humane Experimental Technique</a>. , London, Methuen. (1959).</li>
</ol>

The authors have nothing to disclose.

Kolestatik karaciğer hasarı, kronik karaciğer hastalığı olan hastalarda karaciğer fibroz ve siroz gelişmesi için temel nedensel faktörlerin biri. Bu hastalıklar ölçülemez sağlık masraflarını üretmek gerçeğine dayanarak, birçok araştırmacı devam eden hepatik fibroz patojenik mekanizmalarını anlamak için çalışıyoruz anlaşılabilir. Bu nedenle, deneysel modeller karaciğer iltihabı, fibrozis ve siroza yol açan karmaşık 1 mekanizmaların çeşitli yönlerini taklit oluşturulan edilmiştir. Cerrahi BDL farelerde ve sıçanlarda 4,23,24 obstrüktif kolestatik hasara yol için kullanılan en yaygın deney modellerinde biridir. Protokoller çoğunda, hayvanlar anestezi edilmekte ve Orta bölüm laparotomi gerçekleştirilir. Daha sonra, safra kanalı karın boşluğundan ortaya ve cerrahi sicim kullanılarak iki kez bağlandı. Sonuç olarak, fareler ve sıçanlar bu ameliyat d aldığınıevelop ilk periportal alanlarda 25 kaynaklanan güçlü bir fibrotik reaksiyon. Yıllarda çeşitli cerrahi teknikler ve modifikasyonlar tarif edilmiştir. Özel prosedürler bile BDL 23 sonra yeniden bağlanma ya da re-anastomoz sağlar. Diğer teknikler, önemli ölçüde daha az nekroz oluşumu ve bunun sonucu olarak, hepatosit proliferasyonu 24 elde edilen kısmi BDL dayanmaktadır. Kolesistit oluşumunu önler safra kesesi (kolesistektomi) sonradan giderilmesi ile birlikte Kısmi BDL akut kolestaz için mükemmel bir deneysel model temsil eder. İnsan durumun 24 yakın bir model olduğu ileri sürülmüştür. Ve gerçekten de, bu modelin kurulması sırasında, o zaten tekrarlanabilir sadece minimal histolojik doku hasarı ile kolestaz nedenleri ve kronik kolestaz 25 devam etmediğini ortaya konmuştur. Bu nedenle, bu model enlem çalışmak için ideal olduğu öne sürülmüştürters kolestaz 24 e etkileri. Hatta daha sofistike yöntemler mikrocerrahi dayalı ve hızlı ve tekrarlanabilir bir yol sadece karaciğer 26 seçilmiş bölgelerinde kolestatik karaciğer hasarı indirebilmek için izin vardır. Orijinal BDL protokolü bu sofistike modifikasyonlar özel araştırma soruları araştıran çok yararlı kanıtlanmış olmasına rağmen, birçok laboratuvarda dünya çapında temelde kolestatik karaciğer fibrozis için son derece güvenilir ve tekrarlanabilir model olarak BDL modeli istihdam hedefliyoruz. Ancak, birçok komplikasyonlar büyük ölçüde teknik yanlışlıklar kaçınılmalıdır değilse, bu modelle elde edilen sonuçların tekrarlanabilirliği ve güvenilirliği değiştirebilir ki oluşabilir. Sırasında ya da hızla ameliyat sonrası oluşabilecek - Örneğin, safra kanalı eşlik kan damarlarının yaralanması ile ilgili kanama komplikasyonları (4 Şekil 3). Sonraki kardiyodepresyona veya r anestezi doz aşımıespiratory yetmezliği de prosedürün önlenebilir komplikasyonlar vardır. Dikişler doğru periton boşluğuna yapılan ve safra kaçağı değilse peritonit gelen sepsis kadar Şiddetli enfeksiyonlar, deney tüm döneminde ortaya çıkabilir. Ameliyat sırasında bağırsak Kaza yaralanmaları da peritonit yol açabilir. Bu nedenle, bu sıkı kullanım kurallarına uygun olan standart protokolleri kuvvetle gerekli olduğu açıktır. Bu koşul yakın zamanda 2013 1 yeni hayvan refahı kuralları uygulamaya Avrupa Birliği, ülkeleri içinde talep edildi. Bu yönetmelik ile ilişkili ilgili şartlar yeni değildir ve zaten 1959 yılında önerilmiştir, Russell ve Burch etik önerdi ağırlıklı olarak yerine, arıtma ve azaltma (3R) prensibine 27 dayanmaktadır hayvanlarla bilimsel deneyler için çerçeve. Outlin izlerkened protokolü teknik yanlışlıklar doğabilecek sadece birkaç komplikasyonlar vardır. Üç özel sorunlar oldukça düşük frekansta oluşabilir. Tüm cerrahi işlemlerde olduğu gibi, anestezik aşırı dozda özellikle hipotermi ile birlikte hayvanlara tehlike potansiyel kaynağıdır. Ameliyat sırasında kardiyovasküler komplikasyonlar ortaya çıkarsa, anestezik arz derhal durdurulmalı ve operatör fare mümkün oksijen gibi çok sağlamak için çalışmalısınız. Bu hava ile dolu ve bozulmuş hayvanın ağzına pompalanır küçük bir plastik şırınga vasıtasıyla yapılabilir. Alternatif olarak, etkilenen hayvan havalandırma için küçük bir Peleusball kullanımı canlandırılması süreci için sık sık yararlı olduğunu. Yara iyileşmesinde Sorunlar BDL Ameliyattan sonra, fareler kendi boğaz dikişler veya diğer hayvanların bu ısırabilir. Bu durum ortaya çıkarsa, ilgili fareler ayrı olmalıKafesli. Açık yara olan hayvanlar yara etrafında bölge yavaşça bir standart antiseptik ile sterilize ve yara tekrar dikilmelidir, anestezi gerekir. Önümüzdeki 3 gün boyunca, bu hayvanların yara düzenli (2-3 kez bir gün) kontrol edilmelidir. Karın veya asit oluşumu Distensions bakteriyel enfeksiyonlar için göstergesidir. Bunlar nedeniyle ameliyat sırasında steril olmayan çalışma oluşabilir. Enfeksiyonların her türlü insani son nokta olarak istisnasız ele alınmalıdır ve etkilenen hayvanlar kurban edilmelidir. Biz kolay uygulamak basit ve yüksek tekrarlanabilirlik ile birlikte sadece düşük hayvansal mortalite çağrıştırıyor farelerde BDL performansını sağlayan protokolü takip sağladı. Cerrahi protokollerin tüm hızla yetenekli bilim adamları tarafından yakalanan olabilir. Tam deney sırasında, hayvanlar 37 ° C &#39;de bir sıcak tutma levhasının üzerinde tutuldu ve sürekli bağlıdırBir anestezi sistemine ağrı ve sıkıntı en aza indirir. Ameliyat için, karın orta hat laparotomi ve diseksiyon olmadan çift bağlandı safra kanalı açıldı. Burada ele alındı ​​temsilcisi sonuçları karaciğer morfolojisi (inflamasyon, fibrozis, siroz) açısından fenotipik değişiklikler son derece tekrarlanabilir ve fibrogenez farklı yönlerini incelemek için izin olduğunu göstermek (örn., inisiyasyon, inflamasyon, ilerlemesi, son dönem hastalığı) belirlenen zaman noktalarında. Biz bizim protokol özeti başarıyla diğer laboratuarlarda bu fibrozis modeli kurmak ve farklı yerlerde güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçları garanti için gerekli olan öğrenme eğrisi kısaltmak için yardımcı olacağını umuyoruz. Böylece biz sunulan protokol 1959 yılında Russell ve Burch tarafından gerekiyordu 3R prensibini destekler ve halen pek çok ülkede wi uygulanan yeni hayvan refahı kuralları temelini temsil ettiğini düşünüyorumİnce Avrupa Çerçeve.

Karaciğer fibrozu matrisi üreten gelmiş hepatik yıldız şeklinde hücreler karmaşık bir etkileşim ağının ve karaciğer yerleşik ve nüfuz eden hücreler, kan hücreleri 1,2 çeşitli kaynaklanan aşırı üretimi ve hücre dışı matris (ECM) birikmesi olarak tanımlanır. Hepatik fibroz farklı uyarılara bir çok neden olabilir, ancak fibrozun altında yatan moleküler mekanizmaların, genel olarak çok benzerdir. Karaciğer hasarı takiben, moleküler ve hücresel değişikliklerin bir çok orkestra programı başlatılır. Bu programda inflamatuar sinyaller, monosit / makrofajlar ve hepatik stellat hücreler arasında yakın bir etkileşim oluşur miyofibroblastlar, ECM birikimi ve karaciğer doku bütünlüğü 3 ardışık anatomik ve fonksiyonel değişikliklere stellat hücre aktivasyonu ve transdiferansiyonun uç sonuçlarına. Hepatik stellat hücrelerin aktivasyonu, özellikle karaciğer ile inflamatuar sinyalleri ve etkileşimleri ile tahrik edilir(Kupffer hücreleri örneğin) yerleşim makrofajlar. Patojen ilişkili moleküler desenleri gibi Toll benzeri reseptörler gibi özel örüntü tanıma reseptörleri tarafından tanınan bu inflamatuar süreci 3 sürücü inflamatuar sitokinler ve kemokinlerin çok sayıda ifadesini ve salgılanmasını tetikleyen farklı yollar karmaşık bir ağ üzerinden sinyal aktif olduğunda. Hastalık üreten faktör çıkarıldığında inflamatuvar yanıt ve oluşan hepatik hakaret geçicidir. Yaralanma devam ederse aksine, kronik inflamasyon karaciğer ve skar dokusu oluşumu ile normal karaciğer parankimi progresif yerine sonuçlanan ön planda ifade ve ECM kalabalıklar birikimi içinde gelişir. İnsanlarda karaciğer fibrogenez dünya çapında bir klinik sorun olduğundan, akut ve kronik karaciğer yetmezliği birkaç deneysel kemirgen modelleri, son on yılda kurulmuştur. Mu iseDenizel sistemi, örneğin, ortak modeller kritik etkileyen farklı hepatotoksiktir- çeşitli yönetim, ortak safra kanalı ligasyonu, bağışıklık aracılı karaciğer hasarı indüksiyon ve gen defektleri hedeflenen tanıtım veya transjenlerin tersi aşırı ifadesi vardır Karaciğer fibroz 4 patogenezinde sinyal yolları. Kemirgenlerde koledok ligasyonu yıllardır 5-8 araştırma deneysel prosedür olarak yapılmıştır. Kemirgenlerde uzun süreli safra kanalı ligasyonu (BDL) için ilk yüksek tekrarlanabilir protokol zaten fazla üç yıl önce 9 şimdi sunuldu. Bu protokolde, kanülasyon / obstrüksiyon ve ligasyonu insan biliyer siroz 9 gözlenenler ile karşılaştırılabilir olmuştur morfolojik değişikliklerle sıçanlarda sirozu yüksek verim neden olmuştur. ilgili protokol cerrahi prosedür, nispeten hızlı bir şekilde uygulanabilir, basitVe hayvanların hayatta kalma oranları 95 üzerinden% ile yüksektir. Klasik sıçan kanülasyon / tıkanıklık protokolde, 2 cm kısa bir kesi sadece kılıç şeklinde süreci altında yapılır. Bundan sonra, bir kanül safra kanalının yakın kısmının içine konulduğu ve ipek dikiş ile konumunda sabitlenir. Bir sonraki adımda, kanülün distal kısmı sağ alt kadranda 9 deri orta hat kesi alt ucundan koymak ve gömülü, 3 knot ile tıkalı. Sonunda, karın kapatılır ve hayvanlar iyileşmek üzere izin verilir. Ligasyon protokolü, fareler ya da ligatures 9 arasında safra kanalı diseksiyonu olmadan ya koledok ligasyonu çift tabi tutulmaktadır. Bu deneysel model, iyi kabul ve karaciğer kolestaz ve fibrozis ikna etmek laboratuvarlarda yüzlerce dünya çapında kullanılmaktadır. Bu intrahepatik safra epitel hücre çoğalması, miyofibroblastik differentiatio uyarmaktadırPortal fibroblastların n etrafında ECM 10,11 son derece tekrarlanabilir, masif ifade ve birikimi ile sonuçlanan, safra epitel hücreleri çoğalan. Bu nedenle, sıçan ve farelerde bu modelin uygulanması hepatik inflamasyon ve fibrozis patogenezi anlamak amaçlayan bilim adamları arasında popüler ediliyor. Laboratuvarımızda, biz kapsamlı karaciğer fibrogenez özel moleküler ve hücresel yönlerini araştırmak ve yeni antifibrotik kavram ve uyuşturucu 12-15 sınamak amacıyla çeşitli deneysel çalışmalarda sıçanlarda geçmişte bu protokolü kullanılır. Son zamanlarda, biz kemirgen sisteme bu metodoloji adapte ve safra kanalı ligasyonu cerrahisi de farelerde 16-18 düşük varyasyon ve mortalite ile zamana bağlı fibrozis kurmak için cazip bir ortalama olduğunu bulundu. Hayvanların küçük boyutu, ancak, anestezi ile ilgili bazı önemli değişiklikler, cerrahi interv nedeniyleşayan ve tedavi sonrası gözlem, bu modelde, güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için gereklidir. tam uyum aşağıdaki protokol ve beraberindeki bir video belgelerinde özetlenmiştir.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Forene Abbott</td><td>B 506</td><td></td></tr><tr><td>Shaver Favorita II</td><td>Aeskulap</td><td>GT104</td><td></td></tr><tr><td>Cutter head</td><td>Aeskulap</td><td>GT730</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen eye and nose ointment</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>6029009.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Warming plate and controller</td><td>Labotect</td><td>HP 062</td><td></td></tr><tr><td>Fluovac anesthesia system</td><td>Harvard Apparatus</td><td>34-1030</td><td></td></tr><tr><td>ISOFLO (Isoflurane Vapor) vaporiser</td><td>Eickemeyer</td><td>4802885</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Tape</td><td>commercially available</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tissue paper</td><td>commercially available</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Durapore silk tape</td><td>3M</td><td>1538-1</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Gauze swabs</td><td>Fuhrmann GmbH</td><td>32014</td><td></td></tr><tr><td>Poly-Alcohol Haut&amp;hellip;farblos Antisepticum</td><td>Antiseptica GmbH</td><td>72PAH200</td><td></td></tr><tr><td>Raucodrape OR adhesive drapes</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher GmbH</td><td>33013</td><td></td></tr><tr><td>Scissor</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Graefe forceps straight</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Mersilk suture</td><td>Ethicon</td><td>K889H</td><td>Silk, non-absorbable/Abdominal closure</td></tr><tr><td>Needle holder Mathieu</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>Colibri retractor</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>Cotton swabs</td><td>Noba Verbandmittel</td><td>974202</td><td></td></tr><tr><td>Cotton swabs</td><td>Heinz Herenz Medizinalbedarf GmbH</td><td>1032238</td><td></td></tr><tr><td>25mL beaker</td><td>Schott Duran</td><td>50-1150</td><td></td></tr><tr><td>Isotonic (0.9%) NaCl solution</td><td>DeltaSelect GmbH</td><td>PZN 00765145</td><td></td></tr><tr><td>Micro-serrations forceps Moria MC31</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11370-31</td><td>Bile duct separation</td></tr><tr><td>5-0 Mersilene suture</td><td>Ethicon</td><td>EH6731H</td><td>Polyester, non-absorbable/Bile duct ligation</td></tr><tr><td>5mL syringe</td><td>BD Discardit II</td><td>300296</td><td></td></tr><tr><td>1mL syringe</td><td>BD Plastipak</td><td>300013</td><td></td></tr><tr><td>Sterican needle 26 G x 1</td><td>B. Braun</td><td>4657683</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Essex Pharma</td><td>997.00.00</td><td>Analgeticum, 0.1 mg/kg</td></tr><tr><td>Infrared lamp</td><td>Petra Electric</td><td>IR 11</td><td></td></tr></tbody></table>

bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis

En omurgalılar, karaciğer absorbe yağ emülsifiye ve bilirubin ve diğer metabolik ürünlerin vücuttan yanı sıra ince bağırsakta lipidlerin sindirimi sağlamak için gerekli olan safra üretir. Karaciğerde, ekstrahepatik safra yollarının tıkanması deneysel kolestaz ve inflamasyon periportal alanlardan kaynaklanan güçlü bir fibrotik reaksiyonu sonucu yol açar patolojik olaylar zincirini başlatır karmaşık. Bu nedenle, safra kanalının cerrahi ligasyon kemirgenlerde obstrüktif kolestatik hasara yol ve uygunsuz safra akışı tarafından uyarılan bu patofizyolojik mekanizmaları altında yatan moleküler ve hücresel olayları incelemek için en sık kullanılan model haline gelmiştir. Son yıllarda, farklı cerrahi teknikler özel araştırma soruları için yeniden bağlanma ya da re-anastomoz safra kanalı ligasyonu (BDL) sonra, örneğin, kısmi BDL veya diğer mikrocerrahi yöntemleri izin ya bu tarif edilmiştir. Ancak, en sık kullanılan model 21-28 gün sonra güçlü bir fibrotik yanıtı uyaran koledok tam tıkanması olduğunu. ölüm oranı nedeniyle enfeksiyöz komplikasyon veya teknik yanlışlıklar yüksek olabilir. Burada 1959 yılında Russel ve Burch tarafından öne hayvan refahı için 3R kural uyarınca bir derece tekrarlanabilir fibrotik tepkisine neden farelerde BDL modeli için detaylı bir cerrahi prosedür sağlamak.

Tipik bir deney Histopatolojik yaklaşık 18-20 gram ağırlığındaki 40 erkek C57BL / 6 vahşi tip farelerde gerçekleştirilmiştir. Bu deney ilerlemesi (10, 14, ve 20 gün) boyunca başlangıç ​​fazı (3 ve 7 gün) karaciğer fibrogenezise, ​​araştırmak için yapılır, ve uzun vadeli (30 ve 60 gün) 16 sırasında oldu. Sürekli deney sonuna kadar artan periportal fibrozit tam 20 gün sonra geliştirilmiştir, ancak bu modelde, persinusoidal fibroz önce, ameliyat sonrası 10. günde geliştirmiştir. Söz konusu deneyde, basit bir sahte operasyon alınan tüm hayvanlar hayatta ve sadece BDL alınan 40 fareden (% 5), iki genel durum kötü gelişmiş ve dolayısıyla erken bir deney planlanan uç noktadan önce kurban edilmişlerdir. BDL tabi hayvanların çoğu ilk üç gün boyunca düşük aktivite gösterirken sahte operasyona hayvanların aktivitesi, istisnasız laparotomi sonra zaten normal bir bir gün oldu. Jaundiced cilt BDL 16 ayarladıktan sonra tüm BDL hayvanlar bir ya da iki gün zaten belirgin olmuştu. karaciğer hasarının köklü serum belirteçlerini ifade ederler, her iki alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat transaminaz (AST) değerler hızlı bir şekilde artan ve BDL (Tablo 1) gün sonra 7 ve 20 gün boyunca yükseldi. Bundan sonra, ALT ve AST güne kadar 30 sürekli bir düşüş ve 60 gün ameliyat sonrasına kadar sabit kalmıştır. Kolestatik yaralanma doğrultusunda, toplam bilirubin serum konsantrasyonları sürekli yüksek ve 7 gün 16 sonra bir platoya ulaşmış. ALT ve AST serum faaliyetlerinin Benzer zaman süreci de BDL uygulanan sıçanlarda bildirildi. Son çalışmada BDL ameliyattan sonraki ilk hafta normal 5 veya 10 kat kadar artmış ve iki hafta sonra 19 azalma serum AST ve ALT düzeylerini gösteren oldu. Tipik olarak, sahte operasyona hayvanların karaciğerleri hala Smoot bakmakDeneyin sonunda h BDL alan hayvanların karaciğer esas karaciğerler ve büyük miktarlarda doldurulur safra kesesi hidropsu karşılık gelen yüzeyi üzerinde ödem ve fibrotik nodüller oluşumu ile karakterize edilen bir mimari değişiklikler gösterirken safra (Şekil 7). BDL cerrahi ile indüklenmektedir karaciğer tipik morfolojik değişiklikler, aynı zamanda standart histolojik analiz (Şekil 8) &#39;de kanıtlanabilir. Deney aynı sette, karaciğer fibroz gelişimi maksimum vererek, yarı-nicel değerlendirildi periportal fibrozis 0-2 0-4 ve perisinüzoidal fibrozis sahnelendi hangi bir puanlama sistemi kullanılarak bir kör patolog tarafından değerlendirilir karaciğer histolojisi dayalı oldu Beklendiği gibi 6. siroz eşdeğer oldu değer, sahte operasyona hayvanların grubunda ortalama fibrozis skoru 0.00 ± 0.00 idi. T hayvanların grubu içinde aksine,şapka BDL, skor 4.83 ± 0.17 değerine güne kadar 60 sürekli artış aldı. periportal fibrozis için 3 maksimum incelenen tüm hayvanlarda günde 20 ulaşılmıştır, perisinüzoidal fibrozis denemenin ilk 10 gün icerisinde yoktu ve iki hafta sonra öncelikle fark oldu. Bundan sonra, 1.8 ± 0.17 (Tablo 1) değerlerine deneyin sonuna kadar sürekli olarak artmıştır. Ayrıca yapıldı birkaç bağımsız hayvan deneylerinde, bu fibroz oluşumu devam fibrogenez (Şekil 9) bir sonucu olarak, intrahepatik kollajen ifade ve çökelme yüksek oranda çoğaltılabilir gösteren zamana bağlı artış olduğu gözlemlenmiştir. Benzer şekilde, devam eden fibrogenez bir işlem α-düz kas aktini fibroblastik hücrelerin bir markeri eder (α-SMA) yüksek ekspresyonu belirgindir örneğin, yıldız şeklinde hücreler ve portal miyofibroblastlar hepatik aktifve hepatik hidroksiprolin, bol kollajen olarak bulunan bir amino asit 18 (Şekil 9) matrisler. Buna ek olarak, miyofibroblastlar veya fibroblast artan miktarlarda gösterir vimentin ifadesi BDL cerrahisi 20 kurduktan sonra artmıştır. yaralı karaciğer enflamasyonun birlikteliği daha güçlü bir şekilde akut ve kronik karaciğer yaralanması sırasmda ortaya çıkan ve akut karaciğer zedelenmesinde 21,22 sırasında hepato-koruyucu etkiler geliştikçe olan lipokalin 2 (LCN2) artan ifadesi ile yansıtılmaktadır. BDL alan hayvanların karaciğerler infiltre İnflamatuar hücreler CD45 (Şekil 10) için özel olan bir antikor ile belirli bir boyama ile saptanabilir. Ayrıca PTPRC (protein tirozin fosfataz, reseptör tipi) olarak bilinen bu hücre yüzeyi işaretleyicisi özellikle eritrosit ve plazma hücreleri hariç, tüm farklı hematopoietik hücrelerde ifade edilir. <table fo:keep-together.within sayfa = &quot;always&quot; border = &quot;0&quot; cellpadding = &quot;0&quot; cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td rowspan="2"> Safra kanalı ligasyonu sonrası Süre (gün) </td><td> Toplam bilirubin </td><td rowspan="2"> AST (U / L) </td><td rowspan="2"> ALT (U / L) </td><td rowspan="2"> Portal fibrozis </td><td rowspan="2"> Perisinüzoidal fibrozis </td><td rowspan="2"> Toplam skor </td></tr><tr><td> (Mg / dL) </td></tr><tr><td> 0 (n = 3) </td><td> 0.17 ± 0.06 </td><td> 192,67 ± 30.50 </td><td> 50,33 ± 6.03 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 3 (n = 5) </td><td> 6.85 ± 2.21 </td><td> 1159,25 ± 319,27 </td><td> 566,50 ± 335,25 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 7 (n = 5) </td> &lt;td&gt; 14.38 ± 2.14 ± </td><td> 976,60 ± 477,16 </td><td> 448,20 ± 259,47 </td><td> 0.60 ± 0.25 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.60 ± 0.25 </td></tr><tr><td> 10 (n = 5) </td><td> 15.92 ± 2.60 </td><td> 1916,60 ± 868,25 </td><td> 560,40 ± 80,88 </td><td> 1.40 ± 0.25 </td><td> 0.25 ± 0.25 </td><td> 1.67 ± 0.25 </td></tr><tr><td> 14 (n = 5) </td><td> 17.90 ± 3.84 </td><td> 1088,60 ± 276,32 </td><td> 505.00 ± 96,15 ± </td><td> 2.4 ± 0.25 </td><td> 1.0 ± 0.0 </td><td> 3.40 ± 0.24 </td></tr><tr><td> 20 (n = 4) </td><td> 18.00 ± 2.12 </td><td> 1072,67 ± 364,27 </td><td> 404,00 ± 195,48 </td><td> 3.0 ± 0.0 </td><td> 1.0 ± 0.0 </td><td> 4.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 30 (n = 5) </td><td> 16.04 ± 4.79 </td><td> 446,40 ± 169,75 </td><td> 260,20 ± 126,97 </td><td> 2.8 ±; 0.2 </td><td> 1.4 ± 0.25 </td><td> 4.20 ± 0.20 </td></tr><tr><td> 60 (n = 6) </td><td> 16.02 ± 1.19 </td><td> 484,67 ± 117,79 </td><td> 257,17 ± 50,97 </td><td> 3.0 ± 0.0 </td><td> 1.8 ± 0.17 </td><td> 4.83 ± 0.17 </td></tr></tbody></table> Kullanılan kısaltmalar şunlardır: ALT, alanin aminotransferaz; AST, aspartat aminotransferaz. Tablo 1: fibrozis bir temsili skorlama bu tablosunun veri karaciğer fibrozu, C57BL / 6 fareleri 16 safra kanalı ligasyonu ile uyarılmış olan bir çalışma yeniden.. Bu çalışmada, BDL ameliyat sonrası ölüm oranı% 5 idi (2 40 hayvanlar erken zavallı hayvan koşulları geliştirilen çünkü kurban edildi). <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig1highres.jpg" /> Şekil 1: Bir safra gerçekleştirmek için deneysel kurulumkanal bağlama. Hayvan 37 C arasında bir sıcaklıkta bir ısıtma plakası üzerinde tutulur ve faaliyet alanı sıvı geçirmeyen, kendi kendine yapışan bir örtü ile genel olarak kaplanır. Tam Ameliyat sırasında, hayvan kalıcı olarak anestezi sistemine bağlanır. Tüm Instrumentations ve çözümleri (analjezikler, anestezikler, antiseptik solüsyon,% 0.9 NaCl) açıkça düzenlenmiştir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig2highres.jpg" /> Şekil 2:. Cerrahi alanının hazırlanması periton boşluğunun önce açılması, karın cilt elektrikli tıraş makinesi ile tıraş kürk ve antiseptik gazlı bez ile dezenfekte edilmelidir. Cerrahi bölge daha sonra sıvı geçirmeyen, kendi kendine yapışan bir örtü ile kaplıdır. Karın orta hat laparotomi (~ uzunluğunda 2 cm) ile açılır. kavite sternum bir holding sütür ve yayılan operasyon alanını ekleyerek büyütülürAmeliyat sırasında engelsiz deney sağlayan bir Colibri retraktör sokulması. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig3highres.jpg" /> Şekil 3: safra kanalı Poz. Bu diyaframa sopa ve hepatik hilus açıkça görünür hale böylece safra kanalı ligasyonu iletken için (A), karaciğer ventral tarafı kaldırdı. (B) daha iyi safra kanalı göstermek için, bağırsak kaudal ile taşınır Bir nemlendirilmiş pamuklu çubukla. safra kanalı bir okla işaretlenmiştir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig4highres.jpg" /> Şekil 4: safra kanalı bağlanması. (A), bir birinci adımda, safra kanalı, bir mikro-Çentikli forseps kullanılarak portal damar ve hepatik arter yan dikkatlice ayrılır. (B) daha sonra, bir ameliyat dikiş ipliği etrafına yerleştirilirsafra kanalı ve bir cerrahi düğüm ile tespit edilmiş. (c) Bundan sonra, ikinci bir ameliyat dikiş ipliği, ilk dikiş yakın yerleştirilmiş ve safra kanalı çevresinde düğümlenir. (D), ameliyat dikiş ipliği kısaltılmaktadır, boşluk% 0.9 NaCl çözeltisi ile durulandı ve bütün organları kendi fizyolojik konumuna yerini aldı. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig5highres.jpg" /> Şekil 5:.. Ile safra kanalı Düğümleme hassas temsil sütür yerleştirme ve safra akışını önlemek iki knot ayarını belgelemek için, Şekil 4&#39;te belirtilen aynı prosedür binoküler altında belgelenmiştir (A) Confinement İlk dikiş. İlk dikiş (B) Düğüm. İkinci sütür ile safra kanalının (C) Confinement. (D) ikinci dikiş Düğüm. (E) safra d Çift ligelerine aşırı sütür kısaltılması sonra. (E &#39;) Bu panel (E) bir kroki göstermektedir. sağa sola (rl), (II) ve orta (mi) lob karaciğer gibi safra kanalı, mide ve oniki parmak bağırsağı pozisyonlarını harflerle edilir. Kroki safra kanalı çift iki sütür ile bağlanır. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig6highres.jpg" width="400" /> Şekil 6:. Safra kanalı, portal ven ve farelerde hepatik arter anatomisi koledok daha iyi anatomik konumu için, portal ven ve hepatik arter bir şema olarak tasvir edilir. İşaretli da sağ (rl) pozisyonlarıdır, sol (II) medyan (mi) ve karaciğer kaudat (Cl) loblar. <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig7highres.jpg" /> Şekil 7: Temsilci appeara2 hafta Sham ve BDL sonrası karaciğer ım. C57BL / 6 fareleri işlem veya BDL cerrahi Sham tabi tutuldu. İki hafta sonra, organ boşluğu açıldı. Sahte operasyona hayvanların karaciğerleri fibrozis belirtisi gösterirken, safra kanalı ligasyonu alan hayvanların karaciğerleri gelen karaciğer yüzeyinde ödem oluşumu ve fibrotik nodüller ile düzensiz bir yüzey yapısı vardı. <img alt="Şekil 8," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig8highres.jpg" /> Şekil 8:. Hematoksilin ve eozin boyama, karaciğer kesitleri (A) &#39;numaradan ameliyat edilmişlerdir ya da üç hafta sonra (B) için BDL alınan, C57BL / 6 vahşi tip hayvanlardan meydana getirilmiştir. bölümler hematoksilin ve eozin aşağıdaki standart prosedürler ile boyandı. Inflamasyon belirtileri (infiltre hücreler), parankimal (Hepato dahil BDL karaciğer içinde tipik değişiklikleri unutmayıncyte) nekroz ve safra kanallarının çoğalması. Her şekil panelinde ölçek çubuğu 50 mikron temsil eder. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52438/52438fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 9," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig9highres.jpg" /> Şekil 9: hepatik fibrogenez için histolojik ve biyokimyasal okumalar. (A), karaciğer kesitleri 2 hafta boyunca plasebo işlemi veya BDL almış olan hayvanlarda, hazırlandı ve Sirius Kırmızı (üst panel, kırmızı kollajen lifleri) ile boyandı ya da α-düz kas aktini sentezlenmesi (α-SMA) (alt panel için analiz edildi immünohistokimyasal olarak kahverengi, α-SMA pozitif hücreler). Her bir şekil panelinde ölçek çubuğu 100 um temsil eder. (B), karaciğerinden alınan protein ekstreleri, Western blot tabi tutulur ve Expre bakımından analiz edilmiştirkollajen tip I, α-SMA ve iyi hepatik fibrogenez belirteçleri kurulan Vimentinin salgılanması. lipokalin-2 (LCN2) olarak ifade eden fibrogenez ile ilişkili inflamatuar yanıtı göstermektedir. Bu analizde, eşit protein yükleme β-aktin için özel bir antikor ile lekelerini araştırarak gösterilmiştir. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52438/52438fig9large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 10," src="/files/ftp_upload/52438/52438fig10highres.jpg" /> Şekil 10:. Infiltre olan inflamatuar hücrelerin immünolojik boyama Seri karaciğer dokularında 3 hafta içinde safra kanalı ligasyonu alınan bir hayvan karaciğer hazırlandı. bölümleri hematoksilin ve eozin (A) ya da CD45 (B) için özel olan bir antikor ile boyandı. Lütfen aklınızda bulundurun,safra kanalları çevreleyen CD45 pozitif hücrelerin sayısının yüksek. Iltihaba sebep Bu büyük sızıntılar yapay olarak ameliyat edilmiş hayvanlardan elde edilen karaciğer parçalarında görünmez (gösterilmemiştir). Her şekil panelinde ölçek çubuğu 500 mikron temsil eder. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52438/52438fig10large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis at JoVE.com

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

bile-duct-ligation-mice-induction-inflammatory-liver-injury-fibrosis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

52.1K Görüntüleme.  RWTH Aachen University. Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Video: Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and affect the nutritional status and surgical outcomes. Study of the pathophysiological changes occurring in the liver and other organs is of importance. Various studies have been done in cholestatic rat models.
We used a reversible cholestatic rat model in our recent study looking at the role of methylprednisolone in the ischemia reperfusion injury. Various techniques for creation of a reversible cholestatic model have been described. Creation of a reversible cholestatic rat model can be challenging in view of the smaller size and unique hepatopancreatobiliary anatomy in rats. This video article demonstrates the creation of a reversible cholestatic model.
This model can be used in various studies, such as looking at the changes in nutritional, physiological, pathological, histological and immunological changes in the gastrointestinal tract. This model can also be used to see the effects of cholestasis and various therapeutic interventions on major hepatic surgeries.

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Creation of a reversible cholestatic rat model can be challenging in view of the smaller size and unique hepatopancreatobiliary anatomy in rats. This video article demonstrates the creation of a reversible cholestatic model.

Tersinir kolestatik Rat Modeli Yaratılış

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and ...

Tıp

Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques are used, including serum chemistry, histological analysis, and immunostaining for specific markers. Although these techniques can provide important information about the biliary system, they often do not present a full picture of bile duct (BD) developmental defects across the whole liver. This is in part due to the robust ability of the mouse liver to drain the bile even in animals with significant impairment in biliary development. Here we present a simple method to calculate the average number of BDs associated with each portal vein (PV) in sections covering all lobes of mutant/transgenic mice. In this method, livers are mounted and sectioned in a stereotypic manner to facilitate comparison among various genotypes and experimental conditions. BDs are identified via light microscopy of cytokeratin-stained cholangiocytes, and then counted and divided by the total number of PVs present in liver section. As an example, we show how this method can clearly distinguish between wild-type mice and a mouse model of Alagille syndrome. The method presented here cannot substitute for techniques that visualize the three-dimensional structure of the biliary tree. However, it offers an easy and direct way to quantitatively assess BD development and the degree of ductular reaction formation in mice.

We present a rather simple and sensitive method for accurate quantification of bile duct density in the mouse liver. This method can aid in determining the effects of genetic and environmental modifiers and the effectiveness of potential therapies in mouse models of biliary diseases.

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

Gelişim Biyolojisi

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the uremic milieu, oxidative stress, endotoxemia and the decreased clearance of circulating proinflammatory cytokines by producing a large number of acute-phase reactants. Experimental tools to study inflammation and the underlying role of hepatocytes are crucial to understand the regulation and contribution of hepatic cytokines to a systemic acute phase response and a prolonged pro-inflammatory scenario, especially in an intricate setting such as chronic kidney disease. Since studying complex mechanisms of inflammation in vivo remains challenging, resource-intensive and usually requires the usage of transgenic animals, primary isolated hepatocytes provide a robust tool to gain mechanistic insights into the hepatic acute-phase response. Since this in vitro technique features moderate costs, high reproducibility and common technical knowledge, primary isolated hepatocytes can also be easily used as a screening approach. Here, we describe an enzymatic-based method to isolate primary murine hepatocytes, and we describe the assessment of an inflammatory response in these cells using ELISA and quantitative real-time PCR.

Here, we show an enzymatic approach to isolate primary hepatocytes from adult mice, and we describe the quantification of an inflammatory response using ELISA and real-time PCR.

Fare Primer Hepatosit Kültürler bir inflamatuar yanıtın indüksiyon

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

The Influence of Liver Resection on Intrahepatic Tumor Growth

The high incidence of tumor recurrence after resection of metastatic liver lesions remains an unsolved problem. Small tumor cell deposits, which are not detectable by routine clinical imaging, may be stimulated by hepatic regeneration factors after liver resection. It is not entirely clear, however, which factors are crucial for tumor recurrence.
The presented mouse model may be useful to explore the mechanisms that play a role in the development of recurrent malignant lesions after liver resection. The model combines the easy-to-perform and reproducible techniques of defined amounts of liver tissue removal and tumor induction (by injection) in mice. The animals were treated with either a single laparotomy, a 30% liver resection, or a 70% liver resection. All animals subsequently received a tumor cell injection into the remaining liver tissue. After two weeks of observation, the livers and tumors were evaluated for size and weight and examined by immunohistochemistry.
After a 70% liver resection, the tumor volume and weight were significantly increased compared to a laparotomy alone (p &#60;0.05). In addition, immunohistochemistry (Ki67) showed an increased tumor proliferation rate in the resection group (p &#60;0.05).
These findings demonstrate the influence of hepatic regeneration mechanisms on intrahepatic tumor growth. Combined with methods like histological workup or RNA analysis, the described mouse model could serve as foundation for a close examination of different factors involved in tumor growth and metastatic disease recurrence within the liver. A considerable number of variables like the length of postoperative observation, the cell line used for injection or the timing of injection and liver resection offer multiple angles when exploring a specific question in the context of post-hepatectomy metastases. The limitations of this procedure are the authorization to perform the procedure on animals, access to an appropriate animal testing facility and acquisition of certain equipment.

A high incidence of tumor recurrence after resection of liver metastases remains an unsolved problem. The illustrated mouse model may be useful to investigate the reasons for such recurrences. It combines a liver resection model with intrahepatic tumor cell injection for the first time.

İntrahepatik Tümör Büyümesi Üzerine Karaciğer Rezeksiyon Etkisi

The high incidence of tumor recurrence after resection of metastatic liver lesions remains an unsolved problem. Small tumor cell deposits, which are not ...

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer that often results in severe short bowel syndrome-like adverse effects including bile acid diarrhea, dehydration, electrolyte disturbances, and nutrient malabsorption. Here we introduce a murine ileal resection model, termed ileectomy, to evaluate tissue communication and the maintenance of systemic homeostasis. After ileal resection, circulating blood is permanently devoid of the ileum-specific endocrine hormone fibroblast growth factor 15 (FGF15), which releases its endocrinal inhibition of bile acid synthesis in the liver. In combination with the increased production and abolished reabsorption of bile acids after removing the ileum, mice that underwent surgery suffer from bile salt overaccumulation in the intestine and associated diarrhea, morbidity, and mortality. Novel usage of the surgery model introduced in this study may provide mechanistic and functional insights into ileal control of systemic metabolic regulation in physiology and disease.

Small intestine-dependent bile acid reabsorption and feedback inhibition of hepatic bile acid synthesis is important for systemic homeostasis and health. In this study, we describe a mouse model for ileal resection to evaluate ileectomy-induced bile malabsorption, overaccumulation, and toxicity in mouse intestine.

Fare bağırsak Ileectomy kaynaklı safra Overaccumulation

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients with autoimmune hepatitis. The overwhelming majority of patients with DIH are women. The underlying mechanisms of these sex differences in prevalence are unclear because of the paucity of animal models that mimic human disease. Even so, underlying mechanisms are widely believed to be associated with human leukocyte antigen haplotypes and sex hormones. In contrast, using a DIH mouse model, we have uncovered that IL-4 initiated&#160;CD4+ T cells directed against an epitope of cytochrome P450 2E1 induces influx of neutrophils, macrophages and mast cells into the livers of female BALB/c mice. Using this model, we have also shown that IL-33-induced FoxP3+regulatory T cells confer protection against DIH in female and male mice. This DIH model is induced by immunizing mice with an epitope of CYP2E1 that has been covalently altered with a drug metabolite that has been associated with DIH. This epitope is recognized by patients with DIH. Our method induces robust and reproducible hepatitis and autoantibodies that can be utilized to study the pathogenesis of DIH. While in vivo studies can cause undue pain and distress in mice when done improperly, the advantage of an in vivo model is the ability to evaluate the pathogenesis of disease in a large number of mice. Additionally, biological effects of the altered liver proteins can be studied using invasive procedures. The addition of in vitro studies to the experimental design allows rapid repetition and mechanistic analysis at a cellular level. Thus, we will demonstrate our model protocol and how it can be utilized to study in vivo and in vitro mechanisms of DIH.

We describe an in vivo immunization, translational hepatitis model in BALB/c mice that can be utilized to study the pathogenesis of drug-induced autoimmune hepatitis including sex differences seen in this disease. We will describe how this model demonstrates reproducible analyses using in vivo and in vitro experimental techniques.

Patojenik Mekanizmalarının İncelenmesi için BALB/c Farelerde İlaca Bağlı, Otoimmün Hepatitin İndüklenmesi

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

A Mouse Model of Chronic Liver Fibrosis for the Study of Biliary Atresia

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to the complex etiology and unknown pathogenesis, there are still no effective drug treatments. At present, the classic BA mouse model induced by rhesus rotavirus (RRV) is the most commonly used model for studying the pathogenesis of BA. This model is characterized by growth retardation, jaundice of the skin and mucosa, clay stools, and dark yellow urine. The histopathology shows severe liver inflammation and obstruction of the intrahepatic and extrahepatic bile ducts, which are similar to the symptoms of human BA. However, the livers of end-stage mice in this model lack fibrosis and cannot fully simulate the characteristics of liver fibrosis in clinical BA. The presented study developed a novel BA mouse model of chronic liver fibrosis by injecting 5-10 &#181;g of anti-Ly6G antibody four times, with gaps of 2 days after each injection. The results showed that some of the mice successfully formed chronic BA with typical fibrosis after the time lapse, meaning these mice represent a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of BA and a platform for developing future BA treatments.

We established a mouse model of chronic liver fibrosis, which provides a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of biliary atresia (BA) and a platform for future BA treatments.

Biliyer atrezi çalışması için kronik karaciğer fibrozisinin bir fare modeli

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

Karaciğer Biyolojisi Ex Vivo Modeli olarak Murine Precision-Cut Karaciğer Dilimleri

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the human clinical condition and reproduction of inflammatory events corresponding to the onset of clinical biliary pancreatitis. The severity of pancreatic damage can be assessed by measuring the concentration, speed, and volume of the infused bile acid. This study provides an updated checklist of the materials and methods used in the protocol reproduction and shows the main results from this acute pancreatitis (AP) model. Most of the previous publications have limited themselves to reproducing this model in rats. We have applied this method in mice, which provides additional advantages (i.e., the availability of an arsenal of reagents and antibodies for these animals along with the possibility of working with genetically modified strains of mice) that may be relevant to the study. For acute pancreatitis induction in mice, we present a systematic protocol, with a defined dose of 2.5% sodium taurocholate at an infusion speed 10 &#181;L/min for 3 min in C57BL/6 mice that reaches its maximal level of severity within 12 h of induction and highlight results with outcomes that validate the method. With practice and technique, the total estimated time, from the induction of anesthesia to the completion of the infusion, is 25 min per animal.

Animal models for severe acute pancreatitis enable the study of pathophysiological changes at the initial stage, facilitating observation of the evolution of inflammatory events. Here we provide a protocol for the induction of severe acute biliary pancreatitis by retrograde infusion of sodium taurocholate into the pancreatic duct of anesthetized C57BL/6 mice.

C57BL/6 Farelerde Sodyum Taurokolat İndüklenen Şiddetli Akut Pankreatit

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.