Authors are thankful to K. P. Madhu, Nita Beliappa and staff of the Media Centre of Indian Institute of Science Education and Research, Pune for their help in the video production. The work was supported by funding under the Centre of Excellence program of Department of Biotechnology, Government of India to SG and postdoctoral fellowship by Department of Science and Technology, Government of India to RK.

Besleme Tepki 1. Hydra Kültür ve Ölçüm <ol><li> Bir yer alan (1 mM Tris-HCI tamponu, pH 7.6, 1 mM NaCI, 1 mM CaCI2, 0.1 mM KCI ve 0.1 mM MgSO 4) Artemia ile bunların günlük olarak beslemek ve bir ortam içinde tutarak kültürde hidra polipler korumak 12 saat ışık-12 saat karanlık döngüsü altında 18 ° C&#39;de cam kase daha önce 12 açıklandığı gibi. </li><li> Beslenme yanıtının ölçülmesi için bir 24 oyuklu plaka tek bir kuyusuna 5-6 dokunaçlarını sahip hidra polip olgun aktarın. Eğerek kuyudan kalan ortamı çıkarın, sonra hemen taze orta 500 ul ekleyin. </li><li> Hidra ortamda 9 iM glutatyon çözeltisi hazırlayın. Glutatyon çözüm oksidasyona eğilimli olduğundan, her zaman, her deney için taze hazırlanmış glutatyon çözümü kullanın. </li><li> Görüntü kaydı için hükme sahip bir mikroskop görüntüleme platformu için plaka aktarın. Davranış o böyle karanlık bir arka plan kullanınf hydra polip açıkça zıt arka plan karşı görüntülü olabilir. </li><li> Oda gözlem ve dalgalanan şiddetleri, hava akımları ve gürültü ışıklar hydra serbest davranışını görüntülenmesinde kullanılan. Hatta glutatyon yokluğunda - Bu tür bozukluklar arasında ayrıca hidra polip dokunaçlarıyla daralma gösterir neden olabilir. </li><li> Polip 5 dakika dinlenmek için izin verin. </li><li> Polip davranışı açıkça görüntülü olabilir ki iyi böyle bir merkez bölgesi boyunca yer olduğundan emin olun. Polip kuyunun kenarında ise, bir pipet kullanarak orta kızarma tarafından merkeze getirmek ve tekrar dinlenmek için izin verir. </li><li> Rahat bir durumda hidra&#39;nin bir görüntü yakalayın. Bu sıfır zaman noktasında gözlem olacaktır. </li><li> Hızlı bir şekilde de 3 uM&#39;lik bir son konsantrasyon elde etmek üzere 9 uM glutation çözeltisi ekleyin. Hidra&#39;yla gösterilen deney ve yanıtın amacına bağlı olarak, glütatyon ve Choo farklı konsantrasyonları bir dizi testiGerekli uygun konsantrasyona se. </li><li> Hemen 4-5 dakika boyunca her 15-30 saniye sonra glutatyon çözüm ve yakalama görüntüleri ekledikten sonra Sayacı başlatmak. Time-lapse görüntüleme sırasında büyütme ayarlarını değiştirmeyin. </li><li> Yumuşak ve kuyudaki hayvanın konumu minimal mikroskop görüş alanında rahatsız ki, bu tür homojen akımı ile glutation solüsyonu ekleyin. Polip glutatyon çözüm ekledikten sonra yoğun hareket Ancak, görüntü yakalama için görüş alanındaki polip getirmek için çok yavaşça plakasını taşıyın. </li><li> Kontrol deneyinde, benzer diğer tüm parametreleri tutarken orta glutatyon eksik kullanımı. </li><li> 13:00 önce beslenme yanıtının ölçüde sirkadiyen ritmin olası etkisini önlemek için - günün ilk yarısında yukarıdaki deney tüm adımları gerçekleştirmek için emin olun. </li><li> GNU Image Manipulation Program (GIMP) kullanılarak çekilen görüntülerin her açın. </li&gt; <li> Tentacles ve hypostome her apikal ucu arasındaki mesafeyi belirlemek için ölçün&gt; Menü&gt; Araçlar edinilebilir &quot;Tedbir&quot; aracını kullanın. Ağız açıklığı herhangi bir görüntü gözlenmesi durumunda, açılan ağız merkezi ve tentacle apikal ucu arasındaki mesafeyi belirler. Tentacle yayılması gibi bu mesafeye bakın. </li><li> Öncesi ve glutatyon maruz kaldıktan sonra her polip için ortalama tentacle yayılmasını hesaplayın. Sonraki zaman noktalarında her birinde edilene sıfır zaman noktasında ortalama dokunaçlı yayılma oranı hesaplanır. Bu oran göreceli dokunaçlı yayılması çağrılır. </li><li> En az 20 polip ölçümleri tekrarlayın. </li></ol><img alt="Denklem 1" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/52178/52178eq1.jpg" width="400" /> <img alt="Denklem 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52178/52178eq2.jpg" width="450" /> 2. Yöntem Doğrulama kullanarakAçlık Modeli <ol><li> Açlık için ayrı bir cam kase için birkaç hydra polip aktarmak ve 5 gün boyunca onları beslemek yok. Benzer bir büyüklükte bir kapta artemia ile günde birkaç polip kontrol doyur. Hem deneysel ortamda mantar üremesini önlemek için günlük kase gelen orta değiştirin. </li><li> Deney gününde, 1 saat süre ile Artemia ile Hydra kontrol grubu besleme ve ortam tüm meyvelerin ve ölü Artemia çıkarılmasından sonra, daha sonraki deneyler için, bu Hidra kullanır. </li><li> Nedeniyle gözlem süresi için bir eğilim önlemek için önceki adım 1 &#39;de tarif edilen yöntemle kontrol grubundan hidra ile karşılaştırıldığında aç Hydra besleme yanıtını ölçen aç her ölçümleri alternatif ve Hydra polipler kontrol eder. </li></ol>

<ol>
	<li>Loomis, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+control+of+the+specific+feeding+reactions+of+hydra.">Glutathione control of the specific feeding reactions of hydra.</a> Ann. Ny. Acad. Sci. 62, 209-228 (1955).</li><li>Beckmann, A., Ozbek, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nematocyst:+a+molecular+map+of+the+Cnidarian+stinging+organelle.">The Nematocyst: a molecular map of the Cnidarian stinging organelle.</a> Int. J. Dev. Biol. 56, 577-582 (2012).</li><li>Venturini, G., Carolei, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+receptors+in+Hydra.+Pharmacological+and+biochemical+observations.">Dopaminergic receptors in Hydra. Pharmacological and biochemical observations.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 102, 39-43 (1992).</li><li>Kass-Simon, G., Scappaticci, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamatergic+and+GABAnergic+control+in+the+tentacle+effector+systems+of+Hydra+vulgaris.">Glutamatergic and GABAnergic control in the tentacle effector systems of Hydra vulgaris.</a> Hydrobiologia. 530-531, 67-71 (2004).</li><li>Pierobon, P., Tino, A., Minei, R., Marino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+roles+of+GABA+and+glycine+in+the+modulation+of+chemosensory+responses+in+Hydra+vulgaris+(Cnidaria,+Hydrozoa).">Different roles of GABA and glycine in the modulation of chemosensory responses in Hydra vulgaris (Cnidaria, Hydrozoa).</a> Hydrobiology. 178, 59-66 (2004).</li><li>Pierobon, P., Sogliano, C., Minei, R., Tino, A., Porcu, P., Marino, G., Tortiglione, C., Concas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Putative+NMDA+receptors+in+Hydra:+a+biochemical+and+functional+study.">Putative NMDA receptors in Hydra: a biochemical and functional study.</a> Eur. J. Neurosci. 20, 2598-2604 (2004).</li><li>Alzugaray, M. E., Adami, M. L., Diambra, L. A., Hernandez-Martinez, S., Damborenea, C., Noriega, F. G., Ronderos, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allatotropin:+An+ancestral+myotropic+neuropeptide+involved+in+feeding.">Allatotropin: An ancestral myotropic neuropeptide involved in feeding.</a> PLoS ONE. 8, (2013).</li><li>Bellis, S. L., Laux, D. C., Rhoads, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+purification+of+Hydra+glutathione+binding+proteins.">Affinity purification of Hydra glutathione binding proteins.</a> FEBS Lett. 354, 320-324 (1994).</li><li>Lenhoff, H. M., Shaw, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+discovery+of+the+GSH+receptor+in+Hydra+and+its+evolutionary+significance.">The discovery of the GSH receptor in Hydra and its evolutionary significance.</a> Glutathione in the Nervous System. , 25-43 (1998).</li><li>Venturini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hydra+GSH+receptor.+Pharmacological+and+radioligand+binding+studies.">The hydra GSH receptor. Pharmacological and radioligand binding studies.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 87, 321-324 (1987).</li><li>Reddy, P. C., Barve, A., Ghaskadbi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+and+phylogenetic+characterization+of+common+hydra+from+India.">Description and phylogenetic characterization of common hydra from India.</a> Curr. Sci. 101, 736-738 (2011).</li><li>Horibata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+catabolic+pathway+of+glycosphingolipids+in+a+hydrozoan,+Hydra+magnipapillata.+Involving+endoglycoceramidase.">Unique catabolic pathway of glycosphingolipids in a hydrozoan, Hydra magnipapillata. Involving endoglycoceramidase.</a> J. Biol. Chem. 279, 33379-33389 (2004).</li><li>Koizumi, O., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rise+of+feeding+threshold+in+satiated+Hydra.">Rise of feeding threshold in satiated Hydra.</a> J. Comp. Physiol. 142, 75-80 (1981).</li><li>Bellis, S. L., Kass-Simon, G., Rhoads, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+characterization+and+detergent+solubilization+of+the+putative+glutathione+chemoreceptor+from+hydra.">Partial characterization and detergent solubilization of the putative glutathione chemoreceptor from hydra.</a> Biochemistry. 31, 9838-9843 (1992).</li><li>Morita, H., Hanai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+receptor+proteins+in+invertebrates+-+with+special+reference+to+glutathione+receptor+of+hydra.">Taste receptor proteins in invertebrates - with special reference to glutathione receptor of hydra.</a> Chem. Senses. 12, 245-250 (1987).</li><li>Colasanti, M., Venturini, G., Merante, A., Musci, G., Lauro, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+involvement+in+Hydra+vulgaris+very+primitive+olfactory-+like+system.">Nitric oxide involvement in Hydra vulgaris very primitive olfactory- like system.</a> Journal of Neurosci. 17, 493-499 (1997).</li><li>Kuhn, A., Tsiairis, C. D., Williamson, M., Kalbacher, H., Grimmelikhuijzen, C. J., Holstein, T. W., Gr&#252;nder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+homologous+subunits+form+a+high+affinity+peptide-gated+ion+channel+in+Hydra.">Three homologous subunits form a high affinity peptide-gated ion channel in Hydra.</a> J. Biol. Chem. 285, 11958-11965 (2010).</li><li>Wang, M., Yao, Y., Kuang, D., Hampson, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+family+C+G-protein-coupled+receptors+by+the+tripeptide+glutathione.">Activation of family C G-protein-coupled receptors by the tripeptide glutathione.</a> J. Biol. Chem. 281, 8864-8870 (2006).</li><li>Ruggieri, R. D., Pierobon, P., Kass-Simon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pacemaker+activity+in+hydra+is+modulated+by+glycine+receptor+ligands.">Pacemaker activity in hydra is modulated by glycine receptor ligands.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 138, 193-202 (2004).</li><li>Ramazani, R. B., Krishnan, H. R., Bergeson, S. E., Atkinson, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer+automated+movement+detection+for+the+analysis+of+behavior.">Computer automated movement detection for the analysis of behavior.</a> J. Neurosci. Meth. 162, 171-179 (2007).</li></ol>

The authors declare no competing financial interests.

Hydra davranışı Beslenme Metazoan&#39;da en atalarının duyusal sistemlerinden birini temsil eder. Nematosist destekli av yakalama sonra yayımlanan kabuklu sıvısında GSH varlığı uzun zaman önce 1 tespit edildi, ancak GSHR protein ne de olası kodlayan gen / ler ne hidra bugüne kadar karakterize edilmiştir. Birkaç deneme GSH hidra 8, 14, 15, bağlama proteinleri karakterize etmek için yapılmıştır. Ancak, bu farazi reseptör proteinlerin kimlik besleme reaksiyona katkıda bulunması olasıdır karanlık ve çok az molekül bileşenleri, bildirilmiştir kalır tarih 16, 17. hayvanlar aleminde sadece karakterize GSHR akvaryum balığı 18 değil. Bu tür POW sağlayabilir GPCR sinyalleme olay zincirinin çeşitli proteinlerin inhibitörleri yanı sıra gelişmiş moleküler biyoloji teknikleri kullanılarak (RNAi aracılı gen susturma ve CRISPR yer-Cas9 aracılı genom düzenleme) kullanılması gibi klasik teknikler,hydra içinde çağlayan sinyal GSH moleküler bileşenlerinin belirlenmesi için erful araçları. Değiştirilmiş bir ifade ve işleminin, reseptörün ve GSH sinyallemesinin diğer bileşenler arasında bir skor alabilir okuma beslenme davranışı değiştirilecektir. Bu GSH ile uyarılan Hydra beslenme yanıtının ölçülmesi için bir yöntem kurulması bu gerekliydi. Fenotipik olarak, besleme yanıtı ve ağzın sonraki açıklığına doğru dokunaçlarıyla buruşmasına içerir. Eski gözlem kullanan biz ahtapotun kollarından ve ağız apikal uçları arasındaki mesafe ölçme içerir besleme davranışı nicelleştirilmesini basit ve sağlam bir yöntem geliştirdi. Bu (1) taze hazırlanmış GSH çözüm kullanmak, (2) GSH uygun konsantrasyonunu kullanmak, ve (3) ve tekrarlanabilir ölçüm elde etmek üniforma ışık yoğunluğunu ve hiçbir güçlü hava akımları olan laboratuvarda deney gerçekleştirmek için esastır GSH-ortakbeslenme davranışı d. Besleme tepki benzeri bir davranış da fiziksel olarak, sadece orta GSH eksik eklenerek uyarılabilmektedir. Ancak, bu tür davranış geçici ve 15-30 saniye sonra fark edilmez. Bu nedenle, bu deney bu denetimi ve mekanik bozukluk nedeniyle bu tepki, son verilir sonra besleme tepkisini ölçmek için gerekliydi. Glütation çözeltisi ilave edilir ve bundan ile değişken akış oranı neden mekanik bozukluğu kaynaklı dokunaçlı daralmada değişikliğini en aza indirmek için, daha önce de tarif edildiği gibi 19 mekanik bir cihaz ile test çözeltisi kılavuzu dağıtımını yerine uygun olabilir. Glutatyon çözümün Mekanize dağıtım tüm dağıtma olayı tektip ve dolayısıyla ülke normalize olabilir gibi mekanik uyaranın büyüklüğü ve yönü sıkı kontrolünü sağlayacak. Bu yöntemde, Hücrelerin yayılması iki di boyunca ölçülürKonakları; Gerçekte ise, dokunaçlarıyla kısmı da gözlemci bakacak üçüncü eksen boyunca yayılır. Benzer şekilde, dokunaçlarıyla oryantasyon glutatyon ekledikten sonra değiştirebilirsiniz. Ancak, tek bir polip birden dokunaçlarıyla genelinde yanı sıra birden fazla polip yayılmış uzantıya da ortalama iki-boyutlu ölçümler yanı sıra dokunaçlarıyla değişen oryantasyon tarafından tanıtıldı önyargı normalleştirir. Biz dokunaçlarıyla net bir gözlem her zaman mümkün değildir kuyu, aşırı çevresine taşımak polipler, analize dahil olmasını öneririz. Bundan başka, beslenme yanıtının bir ölçüsü olarak önce ve GSH eklendikten sonra yayılan tentacle oranı, ve GSH işlemden sonra Hücrelerin yayılması mutlak değeri olan göreli Hücrelerin yayılması, alınarak değişkenlik neden varyasyon minimize neden olabilir bireysel poliplerin tentacle uzunluğunda. Glütatiyon-kaynaklı feedi ölçüm Bu protokolng cevap tüm hydra türler için aynı derecede yararlı olabilir. Hydra geniş popülasyonlardan elde edilen görüntüler Hücrelerin yayılması ölçülmesi için, aynı zamanda hayvan davranışları 20 analiz için uygun benzer bir bilgisayar algoritması yazmak mümkün olacaktır.

Hydra is the most primitive organism possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey1. It feeds on a variety of animals such as nematode, crustacea, insect larvae, tadpoles and newly hatched fish1. The movement of these prey organisms causes mechanosensory discharge of the stinging capsules called nematocysts from hydra, which are inserted into the prey2. GSH present in the fluid released from the injured prey subsequently activates the feeding response in hydra which includes curling of the tentacles to bring the prey towards the mouth, opening of the mouth, and consequent engulfing of the prey. Multiple molecules, such as dopamine3, glutamate4, GABA, glycine5, NMDA receptors6, and allatotropin7, have been shown to be involved in the feeding response in hydra. It has also been shown that the chemosensory response induced by GSH is modulated by the feeding status of the animal such that starved hydra exhibited enhanced feeding response1. Such an increase in the GSH sensitivity is biologically relevant since under starvation hydra need to find its prey at higher sensitivity. 
Although the feeding response induced by GSH can be clearly observed under microscope, the methods typically used for measuring the feeding response observations are non-quantitative. In most of the cases, the time during which the mouth of the hydra remains open was taken as a measure of the feeding response8,9; whereas in another case, quantitation was based on the number of hydra out of a population showing the feeding response10. However, observing the mouth opening time of the hydra polyps is cumbersome and subject to variation induced by uncontrollable parameters such as the direction of the mouth orientation during observations. Similarly, since the feeding response is a quantitative parameter, population-based approaches are subject to variations/errors caused by the opinion or observational bias of the individual observer. To circumvent these issues we have developed a method for the relative quantification of the feeding response in hydra (Hydra vulgaris Ind-Pune11) based on the distance of the apical end of the tentacle from the mouth of the hydra polyp.

<table><tbody><tr><td>Cooled Incubator</td><td>Panasonic&amp;nbsp;</td><td>MIR-254-PE</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Leica</td><td>S8AP0&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Camera for the microscope</td><td>Leica&amp;nbsp;</td><td>EC3</td><td></td></tr><tr><td>Reduced glutathione</td><td>Sigma</td><td>G4251</td><td>Stored at 4 &amp;deg;C. Bring the bottle to room temperature before opening to avoid oxidation</td></tr><tr><td>Image editing program</td><td>GIMP</td><td>Version 2.8</td><td></td></tr></tbody></table>

measuring glutathione-induced feeding response in hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. The movement of prey organisms causes mechanosensory discharge of the stinging cells called nematocysts from hydra, which are inserted into the prey. The feeding response in hydra, which includes curling of the tentacles to bring the prey towards the mouth, opening of the mouth and consequent engulfing of the prey, is triggered by GSH present in the fluid released from the injured prey. To be able to identify the molecular mechanism of the feeding response in hydra which is unknown to date, it is necessary to establish an assay to measure the feeding response. Here, we describe a simple method for the quantitation of the feeding response in which the distance between the apical end of the tentacle and mouth of hydra is measured and the ratio of such distance before and after the addition of GSH is determined. The ratio, called the relative tentacle spread, was found to give a measure of the feeding response. This assay was validated using a starvation model in which starved hydra show an enhanced feeding response in comparison with daily fed hydra.

Glutatyon Hidra av içine çeken amacıyla ağzına doğru dokunaçlarıyla buruşmasına sergilemeye neden olur. Dokunaçlarıyla böyle kıvırma yakın hypostome için dokunaçlarıyla apikal uçlarını getiriyor. Bu Hücrelerin yayılması azalma veya Hücrelerin ve hypostome (Şekil 1), apikal ucu arasındaki doğrusal mesafe ile sonuçlanmaktadır. Göreceli tentacle yayılması, ya da ortalama ahtapotun kollarından oranı önce yayılmış ve glutatyon ekledikten sonra, zamanla azaltan çoklu polipler arasında ortalama. Nispi Hücrelerin yayılması, glutatyon yoksun ortam ilave edildikten sonra, ancak, sadece geçici olarak azaltır ve yaklaşık bir dakika (Şekil 2) birim değeri ulaşır. Açlık glutatyon 1,13 ile indüklenen beslenme davranışı geliştirme neden olduğu bilinmektedir. Burada açıklanan besleme davranışı ölçüm göre bir yöntem açlık modeli ile doğrulandı. Ekleyerek glutatyon significantl oldu sonra dokunaçlı bir dakika yayıldıy tok (p = 1 x eşit varyans iki kuyruklu t-testi uygulanarak 10 -16) (Şekil 3) ile karşılaştırıldığında, aç grup için daha düşüktür. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52178/52178fig1highres.jpg" width="675" /> Şekil 1: ortalama dokunaçlı yayılmasını ölçme yöntemi. Rahat bir hydra polip bir görüntü GSH ve ağız ve polip ahtapotun kollarından her apikal ucu arasındaki doğrusal mesafe GIMP aracını kullanarak piksel sayısı bakımından ölçüldü eklemeden önce kaydedildi. Diğer bir görüntü GSH ilave edildikten sonra yakalandı ve tentacle yayılması benzer bir şekilde ölçülmüştür. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52178/52178fig2highres.jpg" width="525" /> Şekil 2: hidra GSH kaynaklı beslenme yanıtının kantitasyonu. Tentacle, Şekil 1 &#39;de tarif edilen ve göreli Hücrelerin yayılması açıyordu tentacle bir oranı olarak (n = 14) GSH ilave edildikten sonra ifade edildiği gibi, GSH ölçülmüştür ilave edildikten sonra farklı zaman noktalarında yayıldı. Kontrol grubu için değerler GSH (n = 14) olmadan hidra ortam ilave edildikten sonra göreli Hücrelerin yayılması temsil eder. Hatalar barlar ± SEM temsil eder. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52178/52178fig3highres.jpg" width="625" /> Şekil 3: açlık modeli kullanılarak beslenme yanıtının nicelendirilmesi yönteminin doğrulanması. X ekseni Aç (n = 61) ve tok (n = 66) grubu için 3 uM GSH ilave edildikten sonra süreyi temsil eder.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra at JoVE.com

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Here we describe a simple assay for the quantification of the feeding response in hydra induced by the reduced form of glutathione. This assay relies on measuring the distance between the apical end of the tentacle and mouth of hydra.

Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

measuring-glutathione-induced-feeding-response-in-hydra

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

11.3K Görüntüleme.  India Institute of Science Education and Research, Pune. Here we describe a simple assay for the quantification of the feeding response in hydra induced by the reduced form of glutathione. This assay relies on measuring the distance between the apical end of the tentacle and mouth of hydra.

Video: Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Imaging Approaches to Assessments of Toxicological Oxidative Stress Using Genetically-encoded Fluorogenic Sensors

While oxidative stress is a commonly cited toxicological mechanism, conventional methods to study it suffer from a number of shortcomings, including destruction of the sample, introduction of potential artifacts, and a lack of specificity for the reactive species involved. Thus, there is a current need in the field of toxicology for non-destructive, sensitive, and specific methods that can be used to observe and quantify intracellular redox perturbations, more commonly referred to as oxidative stress. Here, we present a method for the use of two genetically-encoded fluorogenic sensors, roGFP2 and HyPer, to be used in live-cell imaging studies to observe xenobiotic-induced oxidative responses. roGFP2 equilibrates with the glutathione redox potential (EGSH), while HyPer directly detects hydrogen peroxide (H2O2). Both sensors can be expressed into various cell types via transfection or transduction, and can be targeted to specific cellular compartments. Most importantly, live-cell microscopy using these sensors offers high spatial and temporal resolution that is not possible using conventional methods. Changes in the fluorescence intensity monitored at 510 nm serves as the readout for both genetically-encoded fluorogenic sensors when sequentially excited by 404 nm and 488 nm light. This property makes both sensors ratiometric, eliminating common microscopy artifacts and correcting for differences in sensor expression between cells. This methodology can be applied across a variety of fluorometric platforms capable of exciting and collecting emissions at the prescribed wavelengths, making it suitable for use with confocal imaging systems, conventional wide-field microscopy, and plate readers. Both genetically-encoded fluorogenic sensors have been used in a variety of cell types and toxicological studies to monitor cellular EGSH and H2O2 generation in real-time. Outlined here is a standardized method that is widely adaptable across cell types and fluorometric platforms for the application of roGFP2 and HyPer in live-cell toxicological assessments of oxidative stress.

This manuscript describes the use of genetically-encoded fluorogenic reporters in an application of live-cell imaging for the examination of xenobiotic-induced oxidative stress. This experimental approach offers unparalleled spatiotemporal resolution, sensitivity, and specificity while avoiding many of the shortcomings of conventional methods used for the detection of toxicological oxidative stress.

Genetik olarak kodlanmış Fluorogenic sensörleri kullanarak toksikolojik oksidatif stres ilişkin Değerlendirmeler yaklaşımlar görüntüleme

While oxidative stress is a commonly cited toxicological mechanism, conventional methods to study it suffer from a number of shortcomings, including ...

Kanser Araştırmaları

Combining Quantitative Food-intake Assays and Forcibly Activating Neurons to Study Appetite in Drosophila

Food consumption is under the tight control of the brain, which integrates the physiological status, palatability, and nutritional contents of the food, and issues commands to start or stop feeding. Deciphering the processes underlying the decision-making of timely and moderate feeding carries major implications in our understanding of physiological and psychological disorders related to feeding control. Simple, quantitative, and robust methods are required to measure the food ingestion of animals after experimental manipulation, such as forcibly increasing the activities of certain target neurons. Here, we introduced dye-labeling-based feeding assays to facilitate the neurogenetic study of feeding control in adult fruit flies. We review available feeding assays, and then describe our methods step-by-step from setup to analysis, which combine thermogenetic and optogenetic manipulation of neurons controlling feeding motivation with dye-labeled food intake assay. We also discuss the advantages and limitations of our methods, compared with other feeding assays, to help readers choose an appropriate assay.

Combining Quantitative Food-intake Assays and Forcibly Activating Neurons to Study Appetite in Drosophila

Quantitative food-intake assays with dyed food provide a robust and high-throughput means to evaluate feeding motivation. Combining the food consumption assay with thermogenetic and optogenetic screens is a powerful approach to investigate the neural circuits underlying appetite in adult Drosophila melanogaster.

Nicel gıda alımı deneyleri birleştirerek ve zorla iştah Drosophila içinde çalışmaya nöronların aktive

Food consumption is under the tight control of the brain, which integrates the physiological status, palatability, and nutritional contents of the food, ...

Davranış

Measurement of Glutamate Uptake using Radiolabeled L-[3H]-Glutamate in Acute Transverse Slices Obtained from Rodent Resected Hippocampus

Glutamate removal from the extracellular space by high-affinity Na+-dependent transporters is essential to ensure that the brain&#39;s intrinsic connectivity mechanisms work properly and homeostasis is maintained. The hippocampus is a unique brain structure that manages higher cognitive functions, and is the subject of several studies regarding neurologic diseases. The investigation of physiological and pathological mechanisms in rodent models can benefit from acute hippocampal slice (AHS) preparations. AHS has the advantage of providing reliable information on cell function since the cytoarchitecture and synaptic circuits are preserved. Although AHS preparations are commonly used in neurochemistry laboratories, it is possible to find some methodological differences in the literature. Considering that distinctive slice preparation protocols might change the hippocampal regions analyzed, this current protocol proposes a standard technique for obtaining transverse AHS from resected hippocampus. This simple-to-perform protocol may be used in mice and rats&#39; experimental models and allow several ex vivo approaches investigating neurochemical dynamics (in dorsal, intermediate and ventral hippocampus) in different backgrounds (e.g., transgenic manipulations) or after in vivo manipulations (e.g., pharmacological treatments or suitable rodent models to study clinical disorders). After dissecting the hippocampus from the rodent brain, transverse slices along the septo-temporal axis (300 &#181;m thick) were obtained. These AHS contain distinct parts of the hippocampus and were subjected to an individual neurochemical investigation (as an example: neurotransmitter transporters using their respective substrates). As the hippocampus presents a high density of excitatory synapses, and glutamate is the most important neurotransmitter in the brain, the glutamatergic system is an interesting target for in vivo observed phenomena. Thus, the current protocol provides detailed steps to explore glutamate uptake in ex vivo AHS using L-[3H]-Glutamate. Using this protocol to investigate hippocampal function may help to better understand the influence of glutamate metabolism on mechanisms of neuroprotection or neurotoxicity.

<meta charset="utf8"></head><body>Kemirgen Rezeke Edilmiş Hipokampustan Elde Edilen Akut Transvers Dilimlerde Radyoaktif İşaretli L-[3H]-Glutamat Kullanılarak Glutamat Alımının Ölçülmesi

This article describes a reliable and simple way to obtain ex vivo acute hippocampal transverse slices from mice and rats using a tissue chopper. Slices obtained from resected hippocampi can be submitted for functional glutamate uptake analysis to investigate glutamatergic system homeostasis.

Kemirgen Rezeke Edilmiş Hipokampustan Elde Edilen Akut Transvers Dilimlerde Radyoaktif İşaretli L-[3H]-Glutamat Kullanılarak Glutamat Alımının Ölçülmesi

Glutamate removal from the extracellular space by high-affinity Na+-dependent transporters is essential to ensure that the brain&#39;s intrinsic ...

Biyokimya

Caenorhabditis elegans gıda alımını ve ömrünü ölçmek için yüksek verimli test

Quantifying Food Intake in Caenorhabditis elegans by Measuring Bacterial Clearance

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of Caenorhabditis elegans&#160;(C. elegans), an important parameter when studying the genetics of aging or metabolism. In most species, feeding is determined by measuring the difference between the amount of food provided and the amount left after a given time interval. The method presented here uses the same strategy to determine the feeding of C. elegans. It measures the amount of bacteria, the food source of C. elegans, cleared within 72 h. This method uses 96-well microtiter plates and has allowed the screening of hundreds of drugs for their ability to modulate food intake at a speed and depth not possible in other animal models. The strength of this assay is that it allows to measure feeding and lifespan simultaneously and directly measures the disappearance of food and, thus, is based on the same principles used for other organisms, facilitating species-to-species comparison.

Yazar Spotlight: Lipotoksisite ve HFpEF Arasındaki İlişkiyi Keşfetmek 

This protocol describes an assay to quantify Caenorhabditis elegans feeding rate based on measuring the clearance of bacteria in liquid culture.

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of ...

GSH / GSSG Ölçümü - Antioksidan Araştırmaları için Rafine Bir OPA Testi

Rapid Quantification of Oxidized and Reduced Forms of Glutathione Using Ortho -phthalaldehyde in Cultured Mammalian Cells In Vitro

Glutathione has long been considered a key biomarker for determining the antioxidant response of the cell. Hence, it is a primary marker for reactive oxygen species studies. The method utilizes Ortho-phthalaldehyde (OPA) to quantify the cellular concentration of glutathione(s). OPA conjugates with reduced glutathione (GSH) via sulfhydryl binding to subsequently form an isoindole, resulting in a highly fluorescent conjugate. To attain an accurate result of both oxidized glutathione (GSSG) and GSH, a combination of masking agents and reducing agents, which have been implemented in this protocol, are required. Treatments may also impact cellular viability. Hence, normalization via protein assay is presented in this multiparametric assay. The assay demonstrates a pseudo-linear detection range of 0.234 - 30&#181;M (R2=0.9932&#177;0.007 (N=12)) specific to GSH. The proposed assay also allows for the determination of oxidized glutathione with the addition of the masking agent N-ethylmaleimide to bind reduced glutathione, and the reducing agent tris(2-carboxyethyl) phosphine is introduced to cleave the disulfide bond in GSSG to produce two molecules of GSH. The assay is used in combination with a validated bicinchoninic acid assay for protein quantification and an adenylate kinase assay for cytotoxicity assessment.

Yazar Gündemi: Oksidatif Stres Araştırmaları için Tiyol Kantitasyonu ve Biyobelirteç Tespitinde Yenilik 

Quantification of both oxidized and reduced forms of glutathione (GSSG and GSH, respectively) has been achieved through the use of Ortho-phthalaldehyde (OPA). OPA becomes highly fluorescent once conjugated to GSH but is unable to conjugate GSSG until reduced. Here, we describe a multiparametric assay to quantify both using protein quantification for normalization.

İn Vitro Kültürlenmiş Memeli Hücrelerinde Orto-ftalaldehit Kullanılarak Oksitlenmiş ve İndirgenmiş Glutatyon Formlarının Hızlı Miktar Tayini

Glutathione has long been considered a key biomarker for determining the antioxidant response of the cell. Hence, it is a primary marker for reactive ...

Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Genetik olarak kodlanmış Fluorogenic sensörleri kullanarak toksikolojik oksidatif stres ilişkin Değerlendirmeler yaklaşımlar görüntüleme

Nicel gıda alımı deneyleri birleştirerek ve zorla iştah Drosophila içinde çalışmaya nöronların aktive

Kemirgen Rezeke Edilmiş Hipokampustan Elde Edilen Akut Transvers Dilimlerde Radyoaktif İşaretli L-[³H]-Glutamat Kullanılarak Glutamat Alımının Ölçülmesi

Kemirgen Rezeke Edilmiş Hipokampustan Elde Edilen Akut Transvers Dilimlerde Radyoaktif İşaretli L-[³H]-Glutamat Kullanılarak Glutamat Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

İn Vitro Kültürlenmiş Memeli Hücrelerinde Orto-ftalaldehit Kullanılarak Oksitlenmiş ve İndirgenmiş Glutatyon Formlarının Hızlı Miktar Tayini

İn Vitro Kültürlenmiş Memeli Hücrelerinde Orto-ftalaldehit Kullanılarak Oksitlenmiş ve İndirgenmiş Glutatyon Formlarının Hızlı Miktar Tayini

İn Vitro Kültürlenmiş Memeli Hücrelerinde Orto-ftalaldehit Kullanılarak Oksitlenmiş ve İndirgenmiş Glutatyon Formlarının Hızlı Miktar Tayini