Изучение инициации гибели клеток с помощью цифрового микроскопа

Для начала перенесите зараженные вирусом растения картофеля в камеру для выращивания, поддерживаемую температурой 22 градуса по Цельсию. Выберите растение для наблюдения и используйте клейкую ленту, чтобы полностью обездвижить второй привитый лист. Далее подключите цифровой микроскоп к компьютеру и запустите программное обеспечение для захвата изображения.

Поместите лист под микроскоп. Затем с помощью диска сфокусируйтесь на поверхности листа. Чтобы настроить параметры камеры, нажмите кнопку настроек.

Теперь установите яркость на 64, контрастность на 14 и оттенок на ноль. Далее отрегулируйте баланс белого, затем установите насыщенность на 47, резкость на ноль и гамму на пять. Нажмите на значок захвата изображения и выберите опцию замедленного видео.

Затем настройте захват изображения каждые 15 минут в течение 24 часов. Нажмите кнопку «Пуск», чтобы начать захват изображения. Чтобы сохранить отснятые изображения, выберите все изображения и нажмите значок сохранения.

Теперь выберите параметры экспорта, а затем установите максимальное количество точек на дюйм. После сохранения удалите все изображения из программы. Чтобы отредактировать изображения, запустите программное обеспечение для редактирования, например ImageJ.

Нажмите на файл, затем выберите «Импорт» и выберите «Последовательность изображений», чтобы импортировать временные последовательности изображений из одного поля зрения. Вставьте путь к каталогу сохраненных картинок и нажмите кнопку ОК. Как только преобразование будет завершено, ImageJ автоматически запустит внутренний видеоплеер, отображающий готовое видео.

Нажмите на файл, затем сохраните как и выберите формат AVI для экспорта видеофайла. Когда откроется небольшое окно, установите частоту кадров 0,3 кадра в секунду, затем нажмите ОК, чтобы сохранить видео в виде файла AVI. Для цифрового микроскопического анализа использовали трех-четырехнедельные инокулированные растения картофеля с не менее чем тремя-четырьмя полностью развитыми листьями.

Одна и та же область на инокулированном листе наблюдалась с интервалом в 15 минут, чтобы определить возникновение поражения и расширение с течением времени. Через 14 часов наблюдения поражения не было обнаружено. Примерно через 90 минут было зафиксировано видимое поражение.

Поражение начало расширяться через два часа и продолжало расширяться в течение следующих восьми с половиной часов.