Экспресс-цитотоксичность рецептора химерного антигена Jurkat in vitro с использованием флуоресцентной визуализации

CAR-T-клетки постоянно совершенствуются для достижения лучшего ответа в клинических испытаниях на людях. Мы ищем способы оценить это в нашей лаборатории, используя беспристрастный высокопроизводительный метод, например, использование флуоресцентной визуализации для скрининга комбинаций, которые работают лучше всего. Существует несколько комбинаций конструкций, которые могут быть разработаны для любого фрагмента переменной цепи путем изменения геометрии внеклеточного и шарнирного доменов.

Мы разработали этот протокол для выявления комбинаций с наибольшей эффективностью в элиминации клеток-мишеней с помощью клеток Jurkat. Это быстрый, высокопроизводительный протокол скрининга CAR-конструкций на основе цитотоксичности клеток-мишеней с использованием клеток Jurkat, которые затем валидируются обычными Т-клетками. С помощью этой методики можно одновременно протестировать дюжину различных конструкций CAR в 96-луночном планшете.

Здесь, в лаборатории Ахаван, мы количественно оцениваем в абсолютных цифрах прямой циклоз клеток-мишеней с помощью CAR, экспрессирующих клетки Jurkat с высокой пропускной способностью, для скрининга нескольких конструкций CAR. Основной целью нашей лаборатории является улучшение клинической трансляции CAR-T-клеточной терапии опухолей головного мозга высокой степени злокачественности. Мы используем высокопроизводительные скрининги лекарственных препаратов в качестве одного из методов для улучшения цитотоксичности CAR-T-клеток, а также для воздействия на микроокружение опухоли.