Понимание патофизиологии ишемического инсульта ограничено из-за отсутствия высококачественных данных о тканях у людей. Поскольку такие образцы невозможно приобрести, в качестве суррогата могут служить хорошо контролируемые модельные исследования на животных. Кроличья модель, используемая в этом протоколе, обеспечивает согласованные высококачественные данные для опроса ишемического инсульта.
Описанная здесь методика позволяет осуществлять точный контроль и модуляцию гемодинамических факторов для оценки их влияния на патофизиологию ишемического инсульта. Хорошо спланированная процедура может привести к высококачественным результатам, в частности, за счет использования стратегий смягчения спазма сосудов в артериях посредством сочетания фармакологической профилактики и эффективных ангиографических методов. Для начала поместите кролика в положение лежа на спине на операционном столе, совместимом с рентгеноскопией.
Вытяните головку, так как она оптимизирует положение для последующих ангиографических изображений. Чтобы смягчить спазм сосудов, поместите 0,5 дюйма трансдермального нитроглицерина на внутреннюю часть уха после индукции анестезии. После удаления меха с обеих паховых областей с помощью электрических машинок для стрижки подготовьте кожу скрабами из хлоргексидина и спирта.
Задрапируйте кожу обычным стерильным способом и пальпируйте двусторонние импульсы бедренной артерии. Сделайте пятисантиметровый хирургический разрез лезвием No 10 на месте, где был введен лидокаин. Используйте тупое рассечение, чтобы обнажить сосудисто-нервный пучок, и, при необходимости, расширьте разрез, чтобы обнажить артериальный сегмент, достаточно большой для доступа.
После выделения сосудисто-нервного пучка капните несколько капель 1% лидокаина на артерию, чтобы предотвратить спазм сосудов. Аккуратно отделите артерию от вены и соседнего нерва с помощью щипцов. Идентифицируют артерию по характерному внешнему виду ее мышечной стенки по сравнению с тонкими стенками вены.
После изоляции артерии проведите щипцами под прямым углом под сосудом. Затем возьмитесь инструментом за две петли сосуда и аккуратно проведите ими под артерией. Разместите по одному на верхнем и нижнем концах открытого сосуда.
Подвергните артерию мягкому вытяжению, потянув за петли сосуда, и осмотрите сосуд на предмет удаления остаточной ткани с помощью мягкого рассечения, увеличивая шансы на успешный доступ. После рассечения сосуда и подготовки ангиокатетера снова закапайте лидокаин на сосуд. Артерия заметно расширяется, увеличивая шансы на успешный доступ и размещение оболочки с использованием техники Селдингера.
Приложите мягкое вытяжение к петле сосуда, расположенной ниже по течению, чтобы набухнуть артерию, уменьшив отток и стабилизировав сосуд для попытки доступа. Затем медленно продвигают иглу ангиокатетера в середину обнаженного артериального сегмента. Увидев вспышку крови в ангиокатетере и центральной камере, вставьте катетер в просвет артерии.
После успешной установки ангиокатетера проведите микропровод через просвет ангиокатетера в аорту. Затем снимите ангиокатетер над проволокой и замените его пятифранцузской тонкой гидрофильной оболочкой. Подтвердите возврат артериальной крови через трубку бокового рычага, открыв трехходовой клапан.
Закройте клапан и промойте оболочку 0,9%-ным физиологическим раствором. Прикрепите концентратор влагалища к прилегающей коже дополнительным шелковым швом 3.0 и повторите этот процесс для контралатеральной бедренной артерии. При рентгеноскопической визуализации направьте четырехсторонний скользящий катетер по 0,035-дюймовому скользящему проводу, вставленному через левую оболочку бедренной кости.
Наконечник скользящего катетера помещают в проксимальную левую позвоночную артерию. После удаления проволоки промойте катетер гепаринизированным 0,9%-ным физиологическим раствором. Выполните ангиографию, введя в левую позвоночную артерию йодированный контраст под увеличением доли, чтобы визуализировать всю голову и шею.
Для инъекции в левый позвонок введите 50%-ный контраст, разведенный в обычном физиологическом растворе, с легким крещендо из шприца с тремя CC. Определите количество инъекции, проверив рефлюкс вниз по правой позвоночной артерии и в правую подключичную артерию. Во время этой инъекции также обратите внимание на заднюю мозговую артерию или верхнюю мозговую артерию, одна из которых будет мишенью для окклюзии микрокатетером.
Подготовьте 2,4-дюймовый микрокатетер с французским потоком с помощью микропроволоки 0,010 дюйма и сделайте С-образную форму на кончике микропроволоки. В соответствии с дорожной картой, переместите микрокатетер внутрь катетера с четырьмя французскими скольжениями, используя правую оболочку бедренной кости, и по проводу в правую позвоночную артерию. Продвиньте микрокатетер через шейный сегмент левой позвоночной артерии.
Чтобы пройти крутой поворот от сегмента V2 к сегменту V3, продвигайте микрокатетер в одиночку, пока микропровод находится проксимальнее его кончика. После прохождения резкого поворота от V2 к V3 микрокатетер часто легко переходит к проксимальному базальному или артериальному отделу. На этом этапе продвигают микропровод и выбирают желаемую заднюю мозговую и верхнюю мозжечковые артерии, так как инъекции микрокатетера не рекомендуются из-за хрупкого характера внутричерепных артерий.
Далее продвигайте микрокатетер по микропроводу в целевую артерию и выбирайте проксимальное положение, так как обычно безопаснее всего общаться сзади из-за его угла в начале. Более глубокое положение возможно в верхней мозжечковой артерии. Повторите ангиограмму, введя катетер левой позвоночной артерии с большим увеличением над головой, чтобы подтвердить окклюзию целевой артерии.
Для оптимальной визуализации вводят контраст полной силы, обычно не более одного CC, который достаточен для умиротворения всех внутричерепных артерий. Аккуратно извлеките микропровод из микрокатетера под рентгеноскопической визуализацией, чтобы подтвердить стабильное положение. Поместите запорный кран на ступицу микрокатетера и закройте запорный кран, чтобы предотвратить кровопотерю из-за ретроградного кровотока.
Удалите катетер левого позвонка, чтобы освободить оболочку левого бедренного доступа. В течение последующего периода окклюзии получите прерывистые рентгеноскопические изображения, чтобы подтвердить стабильное положение окклюзионного микрокатетера. Удалите окклюзионный микрокатетер через три часа.
А затем продолжить измерение артериального давления и модуляцию в течение дополнительного желаемого периода. Надуйте и сдуйте баллонный катетер в аорте, чтобы контролировать вариабельность артериального давления. При острых процедурах с немедленным извлечением мозга удаляйте кальварий по частям с помощью ронгеров, начиная с затылочного гребня и работая спереди, пока мозг не будет собран в целости и сохранности.
Поместите мозг в формалин или мгновенную заморозку, в зависимости от желаемого типа анализа тканей. У всех животных был успешно взят головной мозг и проведен гистопатологический анализ, демонстрирующий инфаркт правого мозжечка. Артериальное давление отслеживалось с помощью баллонного катетера Фогарти, помещенного в инфраренальную аорту, и данные примерно одного часа мониторинга демонстрируют изменения артериального давления в режиме реального времени с изменениями в надувании баллона.
Кратковременное отслеживание артериального давления демонстрирует изменения давления на протяжении всего сердечного цикла. Кроме того, небольшие быстрые изменения были отмечены из-за изменчивости дыхания, которая физиологически нормальна. Немедленное почти удвоение измеренного артериального давления было отмечено после надувания баллона.
При попытке этой процедуры решающее значение имеет тщательное тупое вскрытие и капание лидокаина для предотвращения спазма сосудов во время доступа к ангиокатетеру. Кроме того, ангиография левой позвоночной артерии обеспечивает дорожную карту для эффективного эндоваскулярного доступа к целевой внутричерепной артерии. Гемодинамика может быть модулирована фармакологическими способами или путем надувания баллонного катетера в аорте.
Собранные образцы мозга могут быть проанализированы с помощью различных методов, таких как гистопатология или пространственная транскриптомика.
